一种靶向TSHR蛋白的核酸适体、核酸适体衍生物及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种靶向TSHR蛋白的核酸适体、核酸衍生物及其应用，属于分子生物学技术领域。本发明专利技术中靶向TSHR蛋白的核酸适体包含如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，在所述的靶向TSHR蛋白的核酸适体的两端或一端进行放射性标记、治疗性药物连接、荧光标记或生物素标记在内的一种或多种修饰，得到靶向TSHR蛋白的核酸适体及其衍生物。本发明专利技术中的核酸适体及其衍生物能够识别靶向表达促甲状腺素受体细胞，亲和力高、稳定性强、成本低，具有体内外成像标记功能等优点，为甲状腺疾病与甲状腺相关性眼病的诊断和治疗提供新的分子工具。的诊断和治疗提供新的分子工具。的诊断和治疗提供新的分子工具。

【技术实现步骤摘要】
一种靶向TSHR蛋白的核酸适体、核酸适体衍生物及其应用


[0001]本专利技术涉及分子生物学
，尤其涉及一种靶向TSHR蛋白的核酸适体、核酸适体衍生物及其应用。

技术介绍

[0002]促甲状腺素受体作为促甲状腺激素(TSH)的受体，在控制甲状腺细胞代谢中起核心作用。这种受体的活性由G蛋白介导激活腺苷酸环化酶。格雷夫斯病(GD)是一种常见的全身性自身免疫性疾病。我们现在称为GD的综合征，自从在19世纪早期的医学文献中首次被描述以来，甲状腺的增大和过度活动与眼睛周围结缔组织的炎症和膨胀之间的奇怪联系一直困扰着医学界。直到Adams和Purves发现长效甲状腺刺激剂，并证明其刺激甲状腺中的腺苷酸环化酶活性，才首次认识到TSHR和GD之间的关系。这些抗体现在被称为促甲状腺素免疫球蛋白(TSI)。其中对TSHR的免疫耐受性通过尚未确定的机制丧失。这种将TSHR误认为“非我”的结果是产生了针对甲状腺上皮细胞上促甲状腺素受体的促甲状腺素免疫球蛋白。促甲状腺素免疫球蛋白直接参与了Graves病的发病机制和甲状腺功能亢进，与TSHR的相互作用导致不受控制的受体刺激。GD的临床标志是甲状腺的异常生长和过度活动，导致病理性的甲状腺激素水平高。这些增强了目标组织中的氧气消耗和新陈代谢。除了对甲状腺的影响之外，大约20％的真正的GD患者会出现该疾病的眼部表现，称为甲状腺相关眼病(TAO)。TAO代表了一个结缔组织激活和重塑的过程，这可能导致毁容和失明。在这一过程中，TSI通过甲状腺周围组织中局部表达的TSHR发挥作用，与发生在眼眶内的炎症和扩张有关。已经在眼眶脂肪、眼外肌和眼眶成纤维细胞中检测到功能性TSHR。因此，有强有力的证据支持TSHR和TSI在GD的甲状腺过度活动和眼眶病理学中的作用。另外，已有广泛报道TSHR的缺陷也是甲状腺肿瘤(乳头状癌和滤泡癌)的一个原因。(Terry Smith(2017):TSHR as a therapeutic target in Graves
’
disease,Expert Opinion on Therapeutic Targets,DOI:10.1080/14728222.2017.1288215)
[0003]目前现有靶向促甲状腺素受体抗体5C9抗体K1
–
70，但具有生产成本高，周期长，批次稳定性差，免疫原性，价格昂贵的劣势；(TurcuAF,Kumar S,Neumann S,et al.A small molecule antagonist inhibits thyrotropin receptor antibody
‑
induced orbital fibroblast functions involved in the pathogenesis of Graves ophthalmopathy.J Clin Endocrinol Metab.2013；98(5):2153
‑
2159.doi:10.1210/jc.2013
‑
1149)小分子化合物NCGC00229600(ANTAG2)/NCGC00242364(ANTAG3)/SMAS37a/b，但亲和力低(微摩尔)，半衰期短(＜3h)，生物利用率低(50％)的劣势。(Marcinkowski P,HoyerI,Specker E,et al.A New Highly Thyrotropin Receptor
‑
Selective Small
‑
Molecule Antagonist with Potential for the Treatment of Graves'Orbitopathy.Thyroid.2019；29(1):111
‑
123.doi:10.1089/thy.2018.0349)。
[0004]核酸适体具有体积小、特异性强、稳定性高、免疫原性低、易于修饰、构建靶向递送等优点，具有作为靶向识别、标记蛋白的潜力。核酸适体是具有20
‑
100个核苷酸长度的单链
DNA或RNA，通过指数富集(SELEX)方法对配体进行系统进化筛选得到，可以形成三维结构特异地结合到目标分子上。核酸适体最显著的特征如下：1)首先，适体介导的分子识别具有很高的特异性，可以用于区分细微的分子差异。对这一概念的证明是使用适体来区分三种不同但密切相关且形态相似的急性髓系白血病(AML)细胞。这种准确区分分子特征的能力，有助于阐明发病机制相关的分子基础。2)Cell
‑
SELEX是为了能够模拟真实环境中的活细胞而开发的，它能够为任何感兴趣的细胞生成适体，而不需要依赖其先前的分子特征知识。因此，Cell
‑
SELEX可用于发现以前未知的生物标志物，或其在发病机制中尚未被认识的特征；3)核酸适体易于修饰，可增强其体内稳定性；同时能偶联其他药物、分子或纳米颗粒，与细胞膜上的受体结合后，能介导自身或偶联颗粒进入细胞，可作为药物递送的理想靶向分子工具。但目前还没有促甲状腺素受体特异性核酸适体的报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种靶向TSHR蛋白的核酸适体、核酸适体衍生物及其应用。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了靶向TSHR蛋白的核酸适体YC2，其特征在于，包含如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。
[0008]优选的，所述靶向TSHR蛋白的核酸适体YC2在22
‑
27℃，0.5
‑
2.0mM Na
+
，0.1
‑
1.0mM Mg
2+
条件下具有茎环结构，如图1所示。
[0009]作为优选，在所述核酸适体YC2的基础上增加、删减或者替换碱基，获得具有相同功能的核酸适体。
[0010]作为优选，所述TSHR蛋白属于人源性。
[0011]本专利技术还提供了一种靶向TSHR蛋白的核酸适体YC2衍生物。
[0012]作为优选，所述核酸适体衍生物是在所述的靶向TSHR蛋白的核酸适体YC2的两端或一端进行放射性标记、治疗性药物连接、荧光标记或生物素标记在内的一种或多种修饰。
[0013]本专利技术还提供了所述靶向TSHR蛋白的核酸适体YC2和所述靶向TSHR蛋白的核酸适体YC2衍生物在以下任一方面中的应用：
[0014](1)制备TSHR蛋白检测试剂；
[0015](2)制备TSHR靶向载体试剂；
[0016](3)相对高表达TSHR细胞和相对低表达TSHR细胞之间的差异化研究；
[0017](4)TSHR蛋白活体标记研究；
[0018](5)制备甲状腺相关疾病靶向载药制剂。
[0019]通过采用上述技术方案，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供了一种靶向TSHR蛋白的核酸适体，通过对所述靶向TSHR蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向TSHR蛋白的核酸适体YC2，其特征在于，包含如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列。2.根据权利要求1所述的靶向TSHR蛋白的核酸适体YC2，其特征在于，所述靶向TSHR蛋白的核酸适体在22
‑
27℃，0.5
‑
2.0mM Na
+
，0.1
‑
1.0mM Mg
2+
条件下具有茎环结构。3.根据权利要求1所述的靶向TSHR蛋白的核酸适体YC2，其特征在于，在所述核酸适体的基础上增加、删减或者替换碱基，获得具有相同功能的核酸适体。4.根据权利要求1所述的靶向TSHR蛋白的核酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴文灿，叶茂，吴恩德，张嫣宸，
申请(专利权)人：温州医科大学附属眼视光医院，
类型：发明
国别省市：