一种镀金免疫磁微球修饰方法及其在免疫分析中的应用技术

本发明专利技术公开了一种镀金免疫磁微球修饰方法及其在免疫分析中的应用，提出了一种镀金免疫磁微球修饰方法，可用于电化学发光免疫分析中；相较于不导电的磁微珠，该方法突破了低氧化电位路径的电化学发光原理的限制，将电化学发光光强提高了近20倍，显著地提高了电化学发光效率；结合电化学发光成像技术，实现了基于粒径分辨的多重免疫分析方法，相较于罗氏诊断，该方法提高了检测通量。该方法提高了检测通量。该方法提高了检测通量。

【技术实现步骤摘要】
一种镀金免疫磁微球修饰方法及其在免疫分析中的应用


[0001]本专利技术属于医学诊断
，具体涉及一种镀金免疫磁微球修饰方法及其在免疫分析中的应用。

技术介绍

[0002]电化学发光是由电化学反应引起的发光过程，因此不受光漂白和自荧光的影响。由于其背景低、灵敏度高、响应速度快、时空可控等特点，电化学发光在从基础研究到商业临床和生物学应用的多个领域内成为一种多功能和强大的分析技术。
[0003]目前已经实现商业化的电化学发光方法包括罗氏（Roche）诊断和Meso Scale Discovery（MSD）。其中罗氏诊断是将发光分子通过免疫夹心反应标记在磁微球的表面，实现对疾病标志物的检测。受低氧化电位路径的电化学发光原理的限制，该方法存在的问题是：（1）采用的磁微珠是不导电的，电化学发光效率低；（2）采用的设备是电子倍增管，收集的是所有磁珠的ECL，造成一次只能检测一种标志物，检测通量低。（3）采用的磁微珠粒径多为~2.8 μm，不利于使用电化学发光成像的方法进行免疫分析。
[0004]因此，突破低氧化电位路径的电化学发光原理本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于导电的镀金免疫磁微球修饰方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）将镀金磁微球用等离子体清洗，然后浸泡于3
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巯基丙酸的乙醇溶液中，并于4 ℃条件下静置18 h，最后经过超声分散后收集并洗涤得到羧基功能化的镀金磁微球；（2）将步骤（1）中得到的羧基功能化的镀金磁微球用去离子水和吗啉乙磺酸缓冲液洗涤，然后与羧基活化剂在室温条件下孵育30 min，经磁分离与洗涤后，得到活化的羧基功能化的镀金磁微球；（3）将步骤（2）中得到的活化的羧基功能化的镀金磁微球与捕获抗体在37 ℃条件下孵育3 h，经过磁分离、洗涤后与6
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巯基
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己醇在37 ℃条件下孵育1 h，最后经过磁分离后洗涤得到捕获抗体修饰的镀金磁微球；（4）将步骤（3）中得到的捕获抗体修饰的镀金磁微球与抗原及生物素标记的检测抗体在37 ℃条件下孵育30 min，经过磁分离、洗涤后与发光分子Ru(bpy)
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标记的链霉亲和素在37 ℃条件下孵育10 min，最后经过磁分离后洗涤得到Ru(bpy)
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标记镀金磁微球。2.根据权利要求1所述的一种基于导电的镀金免疫磁微球修饰方法，其特征在于：所述步骤（1）中等离子体清洗的条件为空气气氛，清洗时间为3 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭维亮，杭俊梦，戴志晖，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：