一种高效分泌有机磷农药水解酶MPH的基因工程枯草芽孢杆菌制造技术

有机磷农药降解酶MPH在去除有机磷农药残留方面有很好的应用潜力，但该酶还未实现高效生产。鉴于此，本发明专利技术将来源于菌株Pseudomonas sp.M6的MPH编码基因(mpd)进行密码子优化，然后将优化后的基因连同其他表达元件整合到枯草芽孢杆菌的染色体上，构建了高效合成MPH的基因工程菌。该工程菌无任何抗生素抗性基因残留，且合成的MPH被分泌至细胞外，产量达工业生产标准。产标准。产标准。

【技术实现步骤摘要】
ID NO.1所示。
[0010]本专利技术所述的表达盒在构建高效分泌有机磷农药水解酶MPH的基因工程枯草芽孢杆菌中的应用。
[0011]本专利技术所述的表达盒在制备有机磷农药水解酶MPH中的应用。
[0012]一种含本专利技术所述的表达盒的基因片段，序列如SEQ ID NO.9所示。
[0013]本专利技术所述的基因片段在构建高效分泌有机磷农药水解酶MPH的基因工程枯草芽孢杆菌中的应用。
[0014]本专利技术所述的基因片段在制备有机磷农药水解酶MPH中的应用。
[0015]一种构建高效表达有机磷农药水解酶MPH且无抗生素抗性基因的枯草芽孢杆菌的方法，包括以下步骤：
[0016](1)构建不含抗生素抗性基因的枯草芽孢杆菌表达菌株；
[0017](2)合成SEQ ID NO.9所示的基因片段UP
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MPH表达盒
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DOWN；将片段UP
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MPH表达盒
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DOWN导入菌株PD7
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PC的感受态细胞，在含有5mM对氯苯丙氨酸的平板上筛选；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于在枯草芽孢杆菌中高效表达有机磷农药水解酶MPH的表达盒，其特征在于序列如SEQ ID NO.1所示。2.权利要求1所述的表达盒在构建高效分泌有机磷农药水解酶MPH的基因工程枯草芽孢杆菌中的应用。3.权利要求1所述的表达盒在制备有机磷农药水解酶MPH中的应用。4.一种含权利要求1所述的表达盒的基因片段，其特征在于序列如SEQ ID NO.9所示。5.权利要求4所述的基因片段在构建高效分泌有机磷农药水解酶MPH的基因工程枯草芽孢杆菌中的应用。6.权利要求4所述的基因片段在制备有机磷农药水解酶MPH中的应用。7.一种构建高效表达有机磷农药水解酶MPH且无抗生素抗性基因的枯草芽孢杆菌的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)构建不含抗生素抗性基因的枯草芽孢杆菌表达菌株；(2)合成SEQ ID NO.9所示的基因片段UP
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MPH表达盒
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DOWN；将片段UP
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MPH表达盒
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DOWN导入菌株PD7
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PC...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫新，叶斌，李顺鹏，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：