一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法技术

本发明专利技术涉及生物制品技术领域，具体涉及一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法，该制备方法以羊胎盘为原料，通过制匀浆、对匀浆进行反复冻融直至细胞破碎率达95%，然后再通过离心获取上清液并对上清液进行一步水解，再在水解后通过离心分离上清液，并对该上清液进行灭菌，可以获得质量稳定、活性较好的羊胎盘提取液，上述提取方式可以扩展至其他动物来源或是人源的胎盘提取液的制备，该种制备方法简单易行，且水解条件便于实施，制备得到的胎盘提取液活性较高，安全性好，质量可控，能够作为化妆品的原液或者添加物进行应用。品的原液或者添加物进行应用。品的原液或者添加物进行应用。

【技术实现步骤摘要】
一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法


[0001]本专利技术涉及生物制品
，尤其涉及一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法。

技术介绍

[0002]胎盘是哺乳动物生产后从胎儿剥离下来的包衣组织，富含丰富的血管和各种基质细胞，对哺乳动物胚胎的发育提供保护和营养支持的作用，胎盘提取液是胎盘组织经水解、酸解后的产物，含有很多氨基酸、免疫调节活性物质，可以作为化妆品的原液或者添加物。
[0003]目前，胎盘提取液的制备一般采用多次水解工艺，上述方法极易导致胎盘中的活性成分被破坏，从而使得制备得到的胎盘提取液活性较差。例如，文献号为CN 101721458 B的中国专利技术专利公开了一种人胎盘组织液的制备方法，该方法通过超声提取得到粗分胎盘组织液，然后再依次进行酸水解和碱水解，并在水解后进行精滤，从而得到精滤胎盘组织液，该方法需要进行多次水解，不仅操作繁琐，同时制备得到的胎盘提取液质量不易控制。因而，还需要进一步改进。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术问题，本专利技术的目的在于提供一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法，所述羊胎盘提取液的一步水解制备方法以羊胎盘为原料，制备方法简单，且制备所得的羊胎盘提取液安全有效，质量易于控制。
[0005]为达到上述技术效果，本专利技术采用了以下技术方案：一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法，包括步骤：S1：对羊胎盘进行预处理以分离子叶：S2：将子叶制备为匀浆；S3：对上述匀浆进行反复冻融，直至细胞破碎率达95%；S4：对反复冻融后的匀浆进行离心，并在离心结束后收集上清液；S5：取S4获得的上清液进行过滤以得到澄清滤液，将上述澄清滤液于60～80℃下进行水解，得水解液；S6：将上述水解液进行离心，并取上清液进行灭菌，以获得羊胎盘提取液。
[0006]进一步地，所述S1的预处理包括：取新鲜羊胎盘或将冻存的羊胎盘解冻，分离子叶并进行漂洗，再将漂洗后的子叶剪切为直径为2～3 mm的块状组织。
[0007]进一步地，所述漂洗条件为：漂洗2～4次，每次漂洗均采用体积为100～2000ml的经4℃预冷的PBS溶液进行漂洗。
[0008]进一步地，所述S2具体包括：S21：对匀浆器进行预冲洗，且所述预冲洗包括先采用PBS冲洗，再使用生理盐水进行冲洗，具体为：先向匀浆器捣碎杯中加入150～200ml 4℃预冷的PBS，使匀浆器运转2～3min，然后倒去PBS，采用PBS重复清洗2～3次；再加入 4℃预冷的生理盐水100～200 ml，使
匀浆器运转2～3min，倒去生理盐水。
[0009]S22：将漂洗后的子叶放入匀浆器的捣碎杯中，按2～3ml/g加入4℃预冷的生理盐水，旋动调速旋钮，缓慢加速，至最高速度的2/3后捣碎2分钟，停机，将匀浆倒入容器中，再按2～3ml/g加入4℃预冷的生理盐水冲洗捣碎杯，将洗液一并倒入烧杯中。
[0010]进一步地，所述S3具体为：将S2制得的匀浆进行分装并将其置于
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30～
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20℃以下温度下冻存24～26h，然后取出化冻，反复冻融4～5次，然后可将其置于4℃冰箱中存放待用。优选地，冷冻温度为
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30℃。
[0011]优选地，所述化冻过程具体为：先取出冷冻匀浆将其置于37℃以下室温化冻1/5～1/3体积，然后再将其置于37℃以下水浴直至化冻95%以上体积或完全化冻，且化冻过程中每5～10min对匀浆进行一次振摇，可选为手动振摇或机械振摇。
[0012]进一步地，所述澄清过滤采用滤膜进行过滤，且所选滤膜孔径为0.8μm，滤膜使用前先使用灭菌水浸泡20min，再使用生理盐水泡10min。
[0013]进一步地，所述S5中的水解具体为：将水浴锅提前预热至60～80℃，优选为80℃将滤液装入容器内并将其转移水浴锅内水浴从而进行水解，处理时长为20～40 min，优选为30 min。
[0014]进一步地，所述S6中的灭菌采用高压蒸汽灭菌方法，具体为：灭菌温度为121℃、灭菌2～3次，每次20～30min。
[0015]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：本专利技术提供的一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法以羊胎盘为原料，通过制匀浆、对匀浆进行反复冻融直至细胞破碎率达95%，然后再通过离心获取上清液并对上清液进行一步水解，再在水解后通过离心分离上清液，并对该上清液进行灭菌，可以获得质量稳定、活性较好的羊胎盘提取液，上述提取方式可以扩展至其他动物来源或是人源的胎盘提取液的制备方法，该种制备方法简单易行，且水解条件便于实施，制备得到的胎盘提取液活性较高，安全性好，质量可控，能够作为化妆品的原液或者添加物进行应用。
附图说明
[0016]图1为本专利技术的实施例5提供的1号志愿者（实验组一）在测试前后的皮肤斑点的检测对比图（左为测试前，右为测试后）；图2为本专利技术的实施例5提供的2号志愿者（实验组二）在测试前后的皮肤皱纹检测对比图（左为测试前，右为测试后）；图3为本专利技术的实施例5提供的3号志愿者（实验组三）在测试前后的皮肤紫质检测对比图（左为测试前，右为测试后）。
具体实施方式
[0017]下面将结合附图对本专利技术技术方案的实施例进行详细地描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂或仪器未注明生产厂商者，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料，且实施例中未注明具体条件者，均按照常规条件或制造商建议的条件进行。
[0018]实施例1本实施例为本专利技术的第一制备实施例，本实施例提供一种羊胎盘提取液的制备方法，该羊胎盘提取液通过以下方法进行制备：S1：对羊胎盘进行预处理以分离子叶：将冻存的羊胎盘从
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20℃取出放入4℃冰箱或室温化冻，分离出子叶，对上述子叶进行采用提前配好并放4℃预冷的PBS漂洗，150～250ml每次，漂洗3～4次；然后用手术剪将胎盘子叶剪至直径为2～3 mm大小的块状组织，称重并记录重量为M1，然后放4℃保存，待匀浆。
[0019]S2：将子叶制备为匀浆，包括：S21：对匀浆器进行预冲洗：在匀浆器的捣碎杯中加入150～200ml 4℃预冷的PBS，开机运转1分钟后停机2分钟，倒去PBS，重复上述过程2次。
[0020]再加入 4℃预冷的生理盐水100ml，开机运转1分钟后停机2分钟，倒去生理盐水。
[0021]S22：将漂洗后的子叶放入匀浆器的捣碎杯中，制备匀浆，具体操作如下：将上述块状组织置捣碎杯中，按2ml/g加入4℃预冷的生理盐水，旋动调速旋钮，缓慢加速，至最高速度的2/3后捣碎2分钟，停机，将匀浆倒入烧杯中，再按2ml/g加入4℃预冷的生理盐水冲洗捣碎杯，将洗液一并倒入烧杯中。
[0022]S3：对上述匀浆进行反复冻融，直至细胞破碎率达95%，具体为：将匀浆分装至15ml离心管，每管10ml匀浆，置于
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法，其特征在于，包括步骤：S1：对羊胎盘进行预处理以分离子叶：S2：将子叶制备为匀浆；S3：对上述匀浆进行反复冻融，直至细胞破碎率达95%；S4：对反复冻融后的匀浆进行离心，并在离心结束后收集上清液；S5：取S4获得的上清液进行过滤以得到澄清滤液，将上述澄清滤液于60～80℃下进行水解，得水解液；S6：将上述水解液进行离心，并取上清液进行灭菌，以获得羊胎盘提取液。2.如权利要求1所述的一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法，其特征在于：所述S1的预处理包括：取新鲜羊胎盘或将冻存的羊胎盘解冻，分离子叶并进行漂洗，再将漂洗后的子叶剪切为直径为2～3 mm的块状组织。3.如权利要求2所述的一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法，其特征在于，所述漂洗条件为：漂洗2～4次，每次漂洗均采用体积为100～2000ml的经4℃预冷的PBS溶液进行漂洗。4.如权利要求1所述的一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法，其特征在于，所述S2具体包括：S21：对匀浆器进行预冲洗；S22：将漂洗后的子叶放入匀浆器的捣碎杯中，按2～3ml/g加入4℃预冷的生理盐水，旋动调速旋钮，缓慢加速，至最高速度的2/3后捣碎2分钟，停机，将匀浆倒入容器中，再按2～3ml/g加入4℃预冷的生理盐水冲洗捣碎杯，将洗液一并倒入烧杯中。5.如权利要求1所述的一种羊胎盘提取液的一步水解制备方法，其特征在于，所述S21具...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘馨，马波，
申请(专利权)人：昆明时光肌生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：