一种用斑马鱼缺血性脑卒中模型评价脑卒中治疗剂的方法技术

本发明专利技术提供了斑马鱼缺血性脑卒中模型的建立方法，以及用该模型筛选或评价脑卒中治疗剂的用途与评价方法。本发明专利技术提供的斑马鱼缺血性脑卒中模型，选择特定的诱导剂和发育阶段的斑马鱼造模，造模可行，能准确反映药物在体内的真实情况，可实现在体内高通量筛选或评价药物对缺血性脑卒中的治疗功效，具有可靠、快速、高效、低廉、高性价比等优点，意义重大。意义重大。意义重大。

【技术实现步骤摘要】
一种用斑马鱼缺血性脑卒中模型评价脑卒中治疗剂的方法


[0001]本专利技术属于药物评价与筛选的
，具体涉及一种简便、经济、高通量的斑马鱼缺血性脑卒中模型的建立方法及其应用，尤其是用该模型筛选或评价脑卒中治疗剂的方法。

技术介绍

[0002]脑卒中又称脑血管意外或脑中风，是一种急性脑血管疾病，它是由于脑血管突然破裂或血管阻塞导致血液循环障碍，使受累血管的血供区域脑组织发生损害的一种疾病，具有高发病率、高死亡率和高致残率的特点，素有第三大致死性疾病之称。脑卒中包括缺血性和出血性卒中两种，缺血性卒中的发病率高于出血性卒中，占脑卒中总数的80％～85％。缺血性卒中是由血栓栓塞导致脑灌注减少而引起的。全球脑卒中的疾病负担大多来自于发展中国家。全球疾病负担(GBD)2013年研究显示：发展中国家的脑卒中死亡率占全球75％，脑卒中所导致的伤残调整寿命(DALY)占全球81％
[1]。作为发展中国家和世界第一人口大国，中国脑卒中的疾病负担尤为严重。2013年全球脑卒中所导致的DALY占所有疾病4.62％，而中国占 9.71％，中国脑卒中的疾病负担本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种斑马鱼缺血性脑卒中模型的建立方法，包括如下步骤：(1)斑马鱼最佳发育阶段的确定取基因突变型Albino品系斑马鱼亲本交配、孵化，选择不同发育阶段的斑马鱼分别移入微孔板；根据不同的发育阶段将对应的微孔板设置如下实验组：诱导剂处理组，该组中对斑马鱼水溶给药单浓度的诱导剂；正常对照组，该组中对斑马鱼不进行任何处理；然后，各实验组均加入相同体积的养鱼用水，在相同温度下恒温培养；当诱导剂处理斑马鱼至实验终点后，将实验组的斑马鱼置于心跳血流分析系统，分析斑马鱼脑部供血量和血流速度，判断并确定斑马鱼的最佳发育阶段；所述不同发育阶段的斑马鱼为2～4dpf的斑马鱼；(2)诱导剂最佳给药浓度的确定将步骤(1)确定的2dpf斑马鱼移入微孔板中，设置如下实验组：正常对照组和不同给药浓度的诱导剂处理组；正常对照组中对斑马鱼不进行任何处理，诱导剂处理组中对斑马鱼水溶给药不同浓度的诱导剂；然后，各实验组均加入相同体积的养殖用水，在相同温度下恒温培养；当诱导剂处理斑马鱼至实验终点后，各实验组中加入邻联茴香胺染色液，对染色处理后的斑马鱼脑部位置拍照并保存，统计脑卒中发生率，判断并确定诱导剂的最佳给药浓度；优选的，所述诱导剂的给药浓度为0.5～10μg/mL；所述步骤(1)、步骤(2)中的诱导剂，为普纳替尼。2.根据权利要求1所述的斑马鱼缺血性脑卒中模型的建立方法，其特征在于，所述的步骤(1)中确定最佳发育阶段的斑马鱼为2dpf的斑马鱼；所述的步骤(2)中确定诱导剂的最佳给药浓度为2.5μg/mL。3.根据权利要求1或2所述的斑马鱼缺血性脑卒中模型的建立方法，其特征在于，所述的养鱼用水条件为：溶解氧质量浓度为6～8mg/L；水温为28℃；pH为7.2～7.6；总硬度为200～250mg/L。4.根据权利要求1或2所述的斑马鱼缺血性脑卒中模型的建立方法，其特征在于，所述的恒温培养条件为：微孔板置于恒温培养箱中，在28℃下培养4～6h。5.一种如权利要求1～4中任一所...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱晓宇，沈锡明，夏波，李春启，
申请(专利权)人：杭州环特生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：