抗HBV抗体及其使用方法技术

本发明专利技术提供抗S

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗HBV抗体及其使用方法


[0001]本专利技术涉及针对抗乙型肝炎病毒(HBV)的抗体及其使用方法。

技术介绍

[0002]尽管有有效的疫苗可供使用，但慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染是影响全球超过2.5亿人的主要医疗保健问题(WHO,2017)。由于HBV相关的肝硬化、肝功能衰竭和肝细胞癌，感染导致每年大约100万人死亡(WHO,2017)。HBV是一种DNA病毒，属于嗜肝DNA病毒科(Hepadnaviridae)家族，它以传染性病毒粒子或Dane颗粒的形式产生，但也以非传染性亚病毒颗粒的形式产生(Seeger等人，2013)。病毒粒子和亚病毒颗粒在其表面展示三种形式的HBV包膜糖蛋白或HBV表面抗原(HBsAg)：L
‑
HBs(大)、M
‑
HBs(中)和S
‑
HBs(小)。因此，比传染性HBV病毒粒子数量多的缺陷颗粒充当免疫诱饵(Seeger等人，2013)。目前治疗慢性HBV的疗法很少能实现由HBsAg消失和抗HBs抗体血清转换所定义的功能性治愈。然而，在超过90％的成年感染患者和约1％的自发清除感染的慢性感染患者(称为HBV血清转换者或自然控制者)中，自然免疫应答可以成功控制HBV感染(Bauer等人，2011；Chu和Liaw，2016；McMahon，2009；Rehermann和Nascimbeni，2005)。强大且多特异性的HBV特异性CD4
+
和CD8
+
T细胞应答是在控制感染中的关键免疫效应物(Bauer等人，2011)。然而，B细胞和抗体也有助于在功能性治愈后长期清除和防止病毒反弹(Bertoletti和Ferrari，2016；Corti等人，2018；Rehermann和Nascimbeni，2005)。例如，尽管患者中的HBsAg
‑
/抗HBs
+
抗体血清转换与无法检测到的HBV DNA水平相关(McMahon,2009)，但正在接受B细胞耗竭疗法以治疗非霍奇金淋巴瘤的功能性治愈的个体HBV再激活的风险较高，这会迅速导致严重的肝功能障碍(Kusumoto等人，2019；Perrillo等人，2015)。因此，控制和最终消除HBV感染的关键免疫成分可能包括广泛而强大的抗原特异性T细胞应答，以及介导HBsAg清除和终身保护性免疫的中和抗HBs抗体的开发(Bertoletti和Ferrari，2016；Corti等人，2018)。
[0003]为应答HBV感染而产生的中和抗体靶向所有3种HBsAg形式。它们识别S
‑
HBs抗原环并干扰与肝细胞上的硫酸乙酰肝素蛋白多糖(HS)的预附着，或识别L
‑
HBs的preS1结构域并阻断与宿主细胞受体牛磺胆酸钠共转运多肽(NTCP)的结合(Corti等人，2018)。由HBV疫苗接种(基于重组S
‑
HBs免疫原)诱导的针对S
‑
HBs环的“决定因素”部分的IgG抗体，或施用于存在暴露于多克隆HBV免疫球蛋白输注风险个体的IgG抗体可对HBV感染提供保护(Samuel等人，1993；West和Calandra，1996)。已从免疫小鼠和少数人类免疫供体中分离出几种中和抗preS和抗S
‑
HBs抗体(Corti等人，2018)。S
‑
HBs中和抗体可能有助于HBV血清转换者的病毒清除和长期抑制，就像它们保护疫苗接种者免受感染一样。然而，尚未通过克隆和表征人HBsAg特异性抗体来研究功能性治愈的HBV感染个体对HBV的记忆B细胞应答。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供抗S
‑
HBs抗体及其使用方法。
附图说明
[0005]图1.从HBV疫苗接种者和控制者中克隆的S
‑
HBs记忆抗体
[0006](A)来自HBV疫苗接种者(HBVv，n＝6，底部曲线)和控制者(HBVc，n＝8，顶部曲线)的血清IgG的平均S
‑
HBsAg反应性。阴影区域表示值范围。代表性的流式细胞术图显示了HBV疫苗接种者和控制者中的S
‑
HBs结合IgG
+
记忆B细胞(显示了Bv4和Bc3)。nS
‑
HBsAg和rS
‑
HBsAg分别是人源性天然S
‑
HBs抗原和重组S
‑
HBs抗原。
[0007](B)S
‑
HBsAg捕获的IgG
+
记忆B细胞抗体的S
‑
HBsAg
‑
ELISA反应性(左)和从HBVv和HBVc中分离出来的S
‑
HBs特异性单克隆抗体的百分比(％S
‑
HBsAg
+
)(右)。显示了根据HBVc中S
‑
HBs抗体滴度(<150IU/ml和>900IU/ml)的％S
‑
HBsAg
+
。capt
‑
rHBAgs、rHBAgs捕获ELISA。
[0008](C)气泡图显示了根据S
‑
HBs特异性IgG抗体的IgH和IgL链可变结构域中体细胞突变百分比的克隆扩增水平。每个供体的扩展大小如下面的条形图所示。
[0009](D)火山图分析比较了来自HBV免疫供体的S
‑
HBsAg特异性B细胞和来自健康个体的IgG记忆B细胞的免疫球蛋白(Ig)基因谱(上)。虚线上方的点表示两种Ig基因谱之间的统计学显著差异。显示了V
H
(D
H
)J
H
重排频率的比较(下)。pV，p值；FC，倍数变化。
[0010](E)S
‑
HBs记忆IgG中构象依赖性与非构象抗体的分布。测试抗体的总数显示在饼图的中心。红外免疫印迹显示抗S
‑
HBs IgG记忆B细胞抗体对变性S
‑
HBs蛋白有反应(右上)。显示了肽反应性S
‑
HBs抗体的ELISA结合曲线(右下，四次重复的平均值
±
SD)。
[0011]图2.人S
‑
HBs记忆抗体的中和活性
[0012](A)S
‑
HBs IgG抗体对基因型D HBV体外感染HepaRG细胞的中和活性。显示了每种抗体(n＝72)的50％抑制浓度(IC
50
)值(左上)，以及中和抗体与非活性抗体的分布(左下)。(B)显示了根据结合的S
‑
HBs抗原(右上)和体细胞超突变百分比(％SHM)(右下)的中和能力。
[0013](C)通过Northern印迹法在HepaRG细胞中使用HDV RNA定量，所选S
‑
HBs IgG抗体抗HDV的体外中和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】NO:51的VL序列。12.一种与S
‑
HBs结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:55的氨基酸序列的CDR
‑
H1、(b)含有SEQ ID NO:56的氨基酸序列的CDR
‑
H2和(c)含有SEQ ID NO:57的氨基酸序列的CDR
‑
H3，以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:58的氨基酸序列的CDR
‑
L1、(e)含有SEQ ID NO:59的氨基酸序列的CDR
‑
L2和(f)含有SEQ ID NO:60的氨基酸序列的CDR
‑
L3。13.根据权利要求12所述的抗体，其包含选自由以下项组成的组的序列：(a)与SEQ ID NO:70的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:69的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；以及(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。14.根据权利要求12或权利要求13所述的抗体，其包含SEQ ID NO:70的VH序列和SEQ ID NO:69的VL序列。15.一种与S
‑
HBs结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:73的氨基酸序列的CDR
‑
H1、(b)含有SEQ ID NO:74的氨基酸序列的CDR
‑
H2和(c)含有SEQ ID NO:75的氨基酸序列的CDR
‑
H3，以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:76的氨基酸序列的CDR
‑
L1、(e)含有SEQ ID NO:77的氨基酸序列的CDR
‑
L2和(f)含有SEQ ID NO:78的氨基酸序列的CDR
‑
L3。16.根据权利要求15所述的抗体，其包含选自由以下项组成的组的序列：(a)与SEQ ID NO:88的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:87的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；以及(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。17.根据权利要求15或权利要求16所述的抗体，其包含SEQ ID NO:88的VH序列和SEQ ID NO:87的VL序列。18.一种与S
‑
HBs结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:91的氨基酸序列的CDR
‑
H1、(b)含有SEQ ID NO:92的氨基酸序列的CDR
‑
H2和(c)含有SEQ ID NO:93的氨基酸序列的CDR
‑
H3，以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:94的氨基酸序列的CDR
‑
L1、(e)含有SEQ ID NO:95的氨基酸序列的CDR
‑
L2和(f)含有SEQ ID NO:96的氨基酸序列的CDR
‑
L3。19.根据权利要求18所述的抗体，其包含选自由以下项组成的组的序列：(a)与SEQ ID NO:106的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:105的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；以及(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。20.根据权利要求18或权利要求19所述的抗体，其包含SEQ ID NO:106的VH序列和SEQ ID NO:105的VL序列。21.一种与S
‑
HBs结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:109的氨基酸序列的CDR
‑
H1、(b)含有
SEQ ID NO:110的氨基酸序列的CDR
‑
H2和(c)含有SEQ ID NO:111的氨基酸序列的CDR
‑
H3，以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:112的氨基酸序列的CDR
‑
L1、(e)含有SEQ ID NO:113的氨基酸序列的CDR
‑
L2和(f)含有SEQ ID NO:114的氨基酸序列的CDR
‑
L3。22.根据权利要求21所述的抗体，其包含选自由以下项组成的组的序列：(a)与SEQ ID NO:124的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:125的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；以及(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。23.根据权利要求21或权利要求22所述的抗体，其包含SEQ ID NO:124的VH序列和SEQ ID NO:123的VL序列。24.一种与S
‑
HBs结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:127的氨基酸序列的CDR
‑
H1、(b)含有SEQ ID NO:128的氨基酸序列的CDR
‑
H2和(c)含有SEQ ID NO:129的氨基酸序列的CDR
‑
H3，以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:130的氨基酸序列的CDR
‑
L1、(e)含有SEQ ID NO:131的氨基酸序列的CDR
‑
L2和(f)含有SEQ ID NO:132的氨基酸序列的CDR
‑
L3。25.根据权利要求24所述的抗体，其包含选自由以下项组成的组的序列：(a)与SEQ ID NO:142的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:141的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；以及(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。26.根据权利要求24或权利要求25所述的抗体，其包含SEQ ID NO:142的VH序列和SEQ ID NO:141的VL序列。27.一种与S
‑
HBs结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:145的氨基酸序列的CDR
‑
H1、(b)含有SEQ ID NO:146的氨基酸序列的CDR
‑
H2和(c)含有SEQ ID NO:147的氨基酸序列的CDR
‑
H3，以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:148的氨基酸序列的CDR
‑
L1、(e)含有SEQ ID NO:149的氨基酸序列的CDR
‑
L2和(f)含有SEQ ID NO:150的氨基酸序列的CDR
‑
L3。28.根据权利要求27所述的抗体，其包含选自由以下项组成的组的序列：(a)与SEQ ID NO:160的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:159的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；以及(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。29.根据权利要求27或权利要求28所述的抗体，其包含SEQ ID NO:160的VH序列和SEQ ID NO:159的VL序列。30.一种与S
‑
HBs结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:163的氨基酸序列的CDR
‑
H1、(b)含有SEQ ID NO:164的氨基酸序列的CDR
‑
H2和(c)含有SEQ ID NO:165的氨基酸序列的CDR
‑
H3，以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:166的氨基酸序列的CDR
‑
L1、(e)含有
SEQ ID NO:167的氨基酸序列的CDR
‑
L2和(f)含有SEQ ID NO:168的氨基酸序列的CDR
‑
L3。31.根据权利要求30所述的抗体，其包含选自由以下项组成的组的序列：(a)与SEQ ID NO:178的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:177的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；以及(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。32.根据权利要求30或权利要求31所述的抗体，其包含SEQ ID NO:178的VH序列和SEQ ID NO:177的VL序列。33.一种与S
‑
HBs结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:181的氨基酸序列的CDR
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H1、(b)含有SEQ ID NO:182的氨基酸序列的CDR
‑
H2和(c)含有SEQ ID NO:183的氨基酸序列的CDR
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H3，以及轻链可变结构域(VL)，其包含(d)含有SEQ ID NO:184的氨基酸序列的CDR
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L1、(e)含有SEQ ID NO:185的氨基酸序列的CDR
‑
L2和(f)含有SEQ ID NO:186的氨基酸序列的CDR
‑
L3。34.根据权利要求33所述的抗体，其包含选自由以下项组成的组的序列：(a)与SEQ ID NO:196的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)与SEQ ID NO:195的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；以及(c)如(a)中定义的VH序列和如(b)中定义的VL序列。35.根据权利要求33或权利要求34所述的抗体，其包含SEQ ID NO:196的VH序列和SEQ ID NO:195的VL序列。36.一种与S
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HBs结合的抗体，其中所述抗体包含重链可变结构域(VH)，其包含(a)含有SEQ ID NO:199的氨基酸序列的CDR
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H1、(b)含有S...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：巴斯德研究院，
类型：发明
国别省市：