一种柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定方法技术

技术编号:36549187 阅读:11 留言:0更新日期:2023-02-04 17:02
本发明专利技术公开了一种柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定方法,用含0.2

【技术实现步骤摘要】
一种柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定方法


[0001]本专利技术涉及一种柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定方法,属于柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留测定的


技术介绍

[0002]我国是柞蚕的发源地,也是世界柞蚕主要养殖国,柞蚕茧年产量约8.5万t,占世界总产量90%以上。柞蚕在野外柞园中放养,柞园与农田及防护林、果园等交错分布,农林害虫防控过程中使用的农药可通过雾滴飘移污染柞树叶而引起柞蚕中毒,从而导致柞蚕严重减产,给蚕茧生产造成巨大经济损失。苦参碱是一种高效广谱植物源杀虫剂,对蛾类和蝶类昆虫的幼虫具有速效性和持久性毒杀作用。近些年来因其具有低毒、低残留等优点,在防治各种松毛虫、茶毛虫、菜青虫等农林害虫领域里被广泛使用。柞蚕与毛虫同为鳞翅目昆虫,苦参碱类农药的施用势必会给柞蚕生产带来安全风险,柞蚕中毒事件时有发生。
[0003]柞蚕属于动物源样品,基质复杂,且少量苦参碱和氧化苦参碱即可引起柞蚕中毒,因此,现有技术中虽然也有关于苦参碱残留测定的少许报道,但并不适于柞蚕的检测,如申请号为202011608584.2的专利公开了一种果蔬中苦参碱农药残留量的高效液相色谱检测方法,用于果蔬类的检测,采用其方法并不能实现对柞蚕的提取和净化,也无法完成对苦参碱和氧化苦参碱的同时检测,且其对苦参碱检出限为0.1mg/kg,对于少量苦参碱即可引起中毒的柞蚕并不适用。目前还未见柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留检测的相关报道,使柞蚕苦参碱类农药残留的风险评估难以进行。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定方法,可实现柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的同时检测,苦参碱检出限为0.05μg/kg,氧化苦参碱检出限0.1μg/kg。
[0005]为解决上述技术问题,本专利技术所采用的技术方案如下:
[0006]一种柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定方法,用含0.2
±
0.02%氨水的80
±
2%乙腈水溶液超声提取样品,经分散固相萃取净化、浓缩复溶,以Kinetex 2.6μm BiphenylBiphenyl色谱柱(100mm
×
3.0mm)分离,0.1
±
0.01%甲酸水和0.1
±
0.01%甲酸甲醇为流动相梯度洗脱,电喷雾电离(ESI),正离子模式多反应监测(+MRM)下检测,苦参碱以离子对Q1/Q3:249.2/148.3为定量离子对、以离子对Q1/Q3:249.2/150.3为定性离子对,氧化苦参碱以离子对Q1/Q3:265.2/247.3为定量离子对,以离子对Q1/Q3:265.2/148.2为定性离子对,外标法定量。
[0007]本申请%未特别说明的,均为体积百分比。
[0008]上述含0.2
±
0.02%氨水的80
±
2%乙腈水溶液,指乙腈水溶液中乙腈的体积含量为80
±
2%,乙腈水溶液中含有0.2
±
0.02%体积的氨水,以下用80
±
2%乙腈水溶液(含0.2
±
0.02%氨水)表示,其它类似表达,含义也类似。0.1
±
0.01%甲酸水为甲酸体积含量为
0.1
±
0.01%的甲酸水溶液;0.1
±
0.01%甲酸甲醇为甲酸体积含量为0.1
±
0.01%的甲酸甲醇溶液,其它类似表达,含义也类似。
[0009]上述方法具有较高的灵敏度、准确度和重现性,可用于柞蚕中苦参碱、氧化苦参碱残留量的测定,并为相关产品中苦参碱、氧化苦参碱残留量检测提供了方法依据。
[0010]专利技术人发现,柞蚕,属于动物源样品,基质复杂,使用现有用于果蔬、茶叶、蜂蜜等的提取剂,提取率极低,无法完成检测,而采用提取剂80
±
2%乙腈水溶液(含0.2
±
0.02%氨水)提取效率显著高于其它试剂;超声提取结合无水硫酸钠作提取盐,相比于不采取超声以及采用其它提取盐,回收率显著提升,结合本申请净化处理及其它条件的选择,可精准快速完成对柞蚕的检测。
[0011]以0.1
±
0.01%甲酸水和0.1
±
0.01%甲酸甲醇为流动相洗脱,苦参碱、氧化苦参碱的分离度、峰型及响应值均为最好,满足检测要求,且绿色环保、配制简单。
[0012]现有技术中多采用InspireHILIC色谱柱(150mm
×
2.1mm
×
3μm),HILIC柱为正向色谱柱,使用溶剂受限,只能使用70%以上乙腈,难以预平衡,且价格昂贵,使用寿命短;而本申请采用Kinetex

R2.6μm Biphenyl柱,是款核

壳联苯基色谱柱,这种由核

壳颗粒带来的高性能配合独特的固定相,可以实现反相保留以及增强极性与芳香类化合物的选择性,且能显著改善色谱峰形,提高灵敏度,其色谱分离相互作用机理:由联苯基双环结构所产生的高密度电子云可起到类似弱阳离子交换的作用,使得碱性分析物的保留增强。
[0013]上述苦参碱和氧化苦参碱离子对的选择,可以确保检测的响应值和稳定性。
[0014]本申请苦参碱最低检出限为0.05μg/kg;氧化苦参碱最低检出限为0.1μg/kg。本申请在空白柞蚕样品中加入低浓度苦参碱、氧化苦参碱标液,制备加标样品,按本文方法进行提取测定并计算其信噪比,以3倍信噪比(S/N=3)时对应的加标量为最低检出限,充分考虑到样品基质的干扰及回收率的影响,是真正意义上的方法检出限。
[0015]为了进一步提高提取效率,提取样品的方法为:将样品与含0.2
±
0.02%氨水的80
±
2%乙腈水溶液混合后,涡旋1
±
0.2min,超声提取20
±
2min,向离心管中加5.0g无水硫酸钠,再涡旋提取2
±
0.2min后,4℃下、9500
±
500r/min离心5
±
0.5min,上清液待净化。
[0016]上述以无水硫酸钠为提取盐,可使得回收率得到显著的提升。
[0017]测试时,先将待测柞蚕绞碎至匀浆状态,得到样品,然后再称取样品进行提取等后续操作;优选,含0.2
±
0.02%氨水的80
±
2%乙腈水溶液的用量为4
±
0.5mL/g样品;无水硫酸钠的质量用量为样品质量的2
±
0.2倍。
[0018]为了提高测试的准确性和有效性,萃取净化的方法为:将提取样品所得的上清液加入到安捷伦QuEChERS试剂净化管中,涡旋2
±
0.2min,4℃下、5000
±
500r/min离心5
±
0.5min,上清液为本文档来自技高网
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定方法,其特征在于:用含0.2
±
0.02%氨水的80
±
2%乙腈水溶液超声提取样品,经分散固相萃取净化、浓缩复溶,以Kinetex 2.6μm Biphenyl色谱柱分离,0.1
±
0.01%甲酸水和0.1
±
0.01%甲酸甲醇为流动相梯度洗脱,电喷雾电离,正离子模式多反应监测下检测,苦参碱以离子对Q1/Q3:249.2/148.3为定量离子对、以离子对Q1/Q3:249.2/150.3为定性离子对,氧化苦参碱以离子对Q1/Q3:265.2/247.3为定量离子对,以离子对Q1/Q3:265.2/148.2为定性离子对,外标法定量。2.如权利要求1所述的柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定方法,其特征在于:提取样品的方法为:将样品与含0.2
±
0.02%氨水的80
±
2%乙腈水溶液混合后,涡旋1
±
0.2min,超声提取20
±
2min,向离心管中加5.0g无水硫酸钠,再涡旋提取2
±
0.2min后,4℃下、9500
±
500r/min离心5
±
0.5min,上清液待净化。3.如权利要求2所述的柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定方法,其特征在于:含0.2
±
0.02%氨水的80
±
2%乙腈水溶液的用量为4
±
0.5mL/g样品;无水硫酸钠的质量用量为样品质量的2
±
0.2倍。4.如权利要求1

3任意一项所述的柞蚕中苦参碱和氧化苦参碱残留量的测定方法,其特征在于:萃取净化的方法为:将提取样品所得的上清液加入到安捷伦QuEChERS试剂净化管中,涡旋2
±

【专利技术属性】
技术研发人员:杨淑芳张海东辛若竹丁梅张春杨宫田娇靳向东郭鸿儒孙继红王茹
申请(专利权)人:吉林省蚕业科学研究院
类型:发明
国别省市:

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