一种布病胶体金免疫层析试纸条、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种布病胶体金免疫层析试纸条、制备方法及应用，包括将使用胶体金探针溶液浸泡过的金标垫、采用布鲁氏菌外膜蛋白OMP28为检测线兔抗人IgG为质控线的NC膜、样品垫及吸水纸组装到PVC底板上制成布病胶体金免疫层析试纸条；本试纸条应用在制备布鲁氏菌病检测用试剂盒中。本发明专利技术提供的这种布病胶体金免疫层析试纸条结构简单易实现；且在对布病的检测中具有操作简单、费时少、成本低、所需的实验操作条件要求低的优点。验操作条件要求低的优点。验操作条件要求低的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种布病胶体金免疫层析试纸条、制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及布病检测
，具体涉及一种布病胶体金免疫层析试纸条、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]布鲁氏菌病，俗称布病，是由布鲁氏杆菌引起的一种人畜共患性全身传染病。羊为主要传染源，牧民或兽医接羔为主要传播途径；皮毛、肉类加工、挤奶等可经皮肤黏膜受染，进食病畜肉、奶及奶制品可经消化道传染。近年来，布病主要发生在中国北方地区，大部分病例集中在黑龙江、新疆、内蒙古、山西及河南省等地，青壮年农牧民是主要累及人群，并且发病率逐年增加。因此，能够及时进行的诊断方法非常重要。
[0003]现行的血清学诊断方法主要基于布鲁氏菌体本身的粗制外膜蛋白、全菌蛋白、脂多糖抗原(LPS)等天然抗原，但易和革兰氏阴性细菌如：沙门氏菌、小肠结肠炎耶尔森菌O：9、大肠杆菌等产生交叉反应，可能会出现假阳性结果，且大部分诊断在于构建ELISA检测手段，专业要求较高、耗时较长、成本较高。因此，研制快速、准确、简便的诊断试剂是早发现、早治疗布鲁氏菌病的关键。
[0004]布鲁氏菌外膜蛋白28(OMP28(29
‑
250AA))在布鲁氏菌通过细胞外基质(ECM)组分粘附于宿主细胞的过程中可能发挥作用，其具有作为检测感染动物抗布鲁氏菌抗体的免疫优势靶分子的特殊用途。另外，OMP28(29
‑
250AA)可用于感染动物与疫苗接种动物血清学应答的确认性区分，且其在不同的布鲁氏菌物种中序列是保守的。

技术实现思路

[0005]本专利技术需要解决的技术问题是提供一种布病胶体金免疫层析试纸条、制备方法及应用，以布鲁氏菌OMP28(29
‑
250AA)为检测线，以兔抗人IgG(抗体)为质控线制作布病胶体金免疫层析试纸条，可以特异性地检测布鲁氏菌感染的阳性血清，即可评价诊断布病的效果。
[0006]本专利技术的第一个目的在于提供一种布病胶体金免疫层析试纸条的制备方法。
[0007]本专利技术的第二个目的在于提供一种可以简单高效检测布鲁氏菌感染的阳性血清的布病胶体金免疫层析试纸条。
[0008]本专利技术的第三个目的在于提供一种所述布病胶体金免疫层析试纸的用途。
[0009]本专利技术的第一个目的由如下技术方案实施：一种布病胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其包括以下步骤：S1，制备胶体金溶液；S2，制备最适浓度SPG蛋白溶液；S3，利用所述胶体金溶液来标记所述SPG蛋白溶液制备胶体金探针溶液；S4，利用所述胶体金探针溶液浸泡预处理后的金标垫来制备胶体金垫；S5，制备具有检测功能的NC膜，其中，所述NC膜上的检测线为布鲁氏菌外膜蛋白OMP28，质控线为兔抗人IgG；S6，利用所述NC膜组装布病胶体金免疫层析试纸条。
[0010]优选的，在所述S1中，由浓度为0.0001g/mL的氯金酸溶液100mL与浓度为0.01g/mL
的柠檬酸三钠溶液1.5mL混合加热反应制备得到所述胶体金溶液，所述胶体金溶液的胶体金粒径为25nm。
[0011]优选的，所述金标垫的预处理方法为：将所述金标垫在封闭液中室温下浸泡封闭10min，之后37℃烘干。
[0012]优选的，所述封闭液由0.05g/mL蔗糖2μl/mLTween
‑
20组成。
[0013]优选的，在所述S2中，SPG蛋白与胶体金结合的最适浓度为36μg/mL；SPG蛋白与胶体金结合的最适pH值为5.5。
[0014]优选的，所述胶体金探针溶液的制备方法具体为：取所述SPG蛋白溶液逐滴加入到所述胶体金溶液中，取所述SPG蛋白溶液逐滴加入到所述胶体金溶液中，之后再加入浓度为0.02g/mL稳定液至混合溶液中，使稳定液的终浓度为0.01g/mL，得到胶体金探针粗溶液；然后对所述胶体金探针粗溶液进行纯化浓缩后得到胶体金探针纯化液，在所述胶体金探针纯化液中加入重悬缓冲液得到胶体金探针溶液。
[0015]优选的，所述胶体金探针纯化液的具体制备方法为：先在4℃离心机上先以1500rpm/min离心20min，去沉淀，留红色胶体部分，用以去除过量的未与胶体金颗粒结合的SPG蛋白；再以10000rpm/min离心60min，弃上清液，得到胶体金探针纯化液。
[0016]优选的，所述重悬缓冲液的组成为：0.02g/mL PEG2000、2μl/mL Tween
‑
20、0.0001g/mL BSA和0.05g/mL蔗糖的TBS缓冲液。
[0017]优选的，所述布鲁氏菌外膜蛋白OMP28的浓度为1mg/mL；所述兔抗人IgG的浓度为1mg/mL。
[0018]本专利技术的第二个目的由如下技术方案实施：采用所述布病胶体金免疫层析试纸条的制备方法制备得到布病胶体金免疫层析试纸条。
[0019]本专利技术的第三个目的由如下技术方案实施：所述的布病胶体金免疫层析试纸条在制备布鲁氏菌病检测用试剂盒中应用。
[0020]本专利技术的优点：
[0021]1、本专利技术提供的这种布病胶体金免疫层析试纸条结构简单易实现。
[0022]2、本专利技术提供的这种布病胶体金免疫层析试纸条在对布病的检测中具有操作简单、费时少、成本低、所需的实验操作条件要求低的优点。
[0023]3、本专利技术制备的25nm粒径的胶体金稳定性更好；且使用经过两次离心得到的胶体金探针纯化液浸泡金标垫后，扩大了金标垫的检测范围，使待测血清的与金标垫的结合更佳容易。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0025]图1是本专利技术的整体结构示意图。
[0026]图2是本专利技术不同pH条件下SPG蛋白与胶体金溶液结合的状态图。
[0027]图3是本专利技术不同pH条件下SPG蛋白与胶体金溶液结合的吸光度曲线图。
[0028]图4是本专利技术不同浓度的SPG蛋白与胶体金溶液结合的状态图。
[0029]图5是本专利技术不同浓度的SPG蛋白与胶体金溶液结合的吸光度曲线图。
[0030]PVC底板1，样品垫2，胶体金垫3，NC膜4，T线401，C线402，吸水纸5。
具体实施方式
[0031]如图1
‑
5所示，一种布病胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其包括如下步骤，
[0032]S1，制备胶体金溶液：
[0033](1)0.01g/mL的氯金酸溶液：取血清瓶100mL，先加入80mL去离子水，再加入1g氯金酸，待氯金酸完全溶解后，加去离子水到100mL，摇匀，4℃保存备用。
[0034](2)0.01g/mL的柠檬酸三钠溶液：称取0.1g二水合柠檬酸三钠，加去离子水溶解后，于血清瓶定容至10.0mL。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种布病胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，制备胶体金溶液；S2，制备最适浓度SPG蛋白溶液；S3，利用所述胶体金溶液来标记所述SPG蛋白溶液制备胶体金探针溶液；S4，利用所述胶体金探针溶液浸泡预处理后的金标垫来制备胶体金垫；S5，制备具有检测功能的NC膜；所述NC膜上的检测线为布鲁氏菌外膜蛋白OMP28，质控线为兔抗人IgG；S6，利用所述NC膜组装布病胶体金免疫层析试纸条。2.根据权利要求1所述的一种布病胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，在所述S1中，由浓度为0.0001g/mL的氯金酸溶液100mL与浓度为0.01g/mL的柠檬酸三钠溶液1.5mL混合加热反应制备得到所述胶体金溶液，所述胶体金溶液的胶体金粒径为25nm。3.根据权利要求1所述的一种布病胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述金标垫的预处理方法为：将所述金标垫在封闭液中室温下浸泡封闭10min，之后37℃烘干；所述封闭液由0.05g/mL蔗糖2μl/mLTween
‑
20组成。4.根据权利要求1所述的一种布病胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，在所述S2中，SPG蛋白与胶体金结合的最适浓度为36μg/mL；SPG蛋白与胶体金结合最适pH值为5.5。5.根据权利要求1所述的一种布病胶体金免疫层析试纸条的制备方法，其特征在于，所述胶体金探针溶液的制备方法具体为：取所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁海涛，王占国，王占黎，王锐，王波，肖伟利，贺娟，任志宏，
申请(专利权)人：内蒙古自治区人民医院内蒙古自治区肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：