CD40结合蛋白制造技术

提供了一种结合蛋白，其结合CD40并且是CD40的激动剂。在特定实施方案中，本发明专利技术提供了一种激动性抗CD40抗体。还提供了包含所述结合蛋白的双特异性缀合物以及包含与包含抗原的标签构建体非共价结合的双特异性缀合物并且用于将抗原输送到免疫细胞的复合物。还提供了本发明专利技术的结合蛋白、缀合物和复合物的医学用途。途。途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】CD40结合蛋白
[0001]本专利技术提供了一种结合蛋白，该结合蛋白结合CD40并且是其激动剂。在特定实施方案中，本专利技术提供了一种激动性抗CD40抗体。还提供了包含结合蛋白的双特异性缀合物以及包含与包含抗原的标签构建体非共价结合的双特异性缀合物并且用于将抗原输送到免疫细胞的复合物。还提供了本专利技术的结合蛋白、缀合物和复合物的医学用途。

技术介绍

[0002]调节免疫应答的单克隆抗体(mAb)在癌症治疗中被证明是非常有效的，越来越多的证据表明这样的应答可以被用来提供持久的肿瘤根除。针对不同靶的各种抗体已经被开发出来，例如靶向免疫检查点CTLA
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4和PD
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1，这支持T细胞免疫可以为癌症提供有效治疗的观点。用与抗原呈递细胞(APC)上的共刺激受体CD40激动性结合的免疫刺激性mAb也获得了有希望的临床数据。
[0003]CD40是TNF受体超家族的成员(也称为TNF受体超家族成员5；TNFRSF5)，并且在抗原呈递细胞(APC)(例如B细胞、树突状细胞(DC)、巨噬细胞和单核细胞)、以及上皮细胞和内皮细胞以及某些肿瘤细胞上表达。当被其主要表达在成熟T细胞上的配体(CD40配体；CD40L，也称为CD154)激活时，CD40激活APC，并且诱导先天和适应性免疫应答二者。激动性CD40剂，例如抗CD40抗体，可用于诱导免疫系统，以预防癌细胞的增殖和/或杀伤癌细胞，从而为癌症提供有效的治疗方法。特别地，由激动性CD40剂激活的APC可以刺激包括效应T细胞、特别是CD8+细胞毒性T细胞在内的T细胞，导致T细胞介导的癌细胞(例如肿瘤)的破坏。如果APC是巨噬细胞，也可能有直接的癌细胞杀伤，对于CD40阳性的肿瘤可以观察到直接的抗肿瘤机制，其中抗CD40抗体与肿瘤细胞的结合可以诱导凋亡。在病毒感染的情况下，替代性地，T细胞激活可以促进受感染细胞的杀伤。
[0004]各种抗CD40抗体处于临床前或临床开发阶段，包括抗体ADC
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1013、CP
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870，893、Chi Lob 7/4、SEA
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CD40和APX005M。抗体ADC
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1013在WO 2016/023960中有描述，并且在WO 2015/091853和US 2017/0342159中提出了用于抗癌的各种其他抗CD40抗体。ChiLob 7/4在US 2009/0074711中有描述，SEA
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CD40在US 2017/0137528中有描述，CP
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870，893在US 2017/0342159中有描述，APX005M(有时可替代地简称为APX005)在WO 2014/070934中有描述。
[0005]本申请提供了一种进一步的针对CD40的激动性抗体(或相关的结合蛋白)。该结合蛋白已显示以高亲和力结合CD40，并且显示强激动活性，并且因此可以用作独立的癌症治疗药，如上文描述。该结合蛋白还特别适合用于治疗性双特异性缀合物的情况，其可以类似地用于癌症疗法，或者替代性地用于抗感染的治疗或疫苗接种。
[0006]T细胞的有效刺激(或引发)不仅需要对APC施加CD40刺激，还需要APC呈递抗原(在MHC的情况下)以被T细胞受体(TCR)识别和结合。因此，为了T细胞刺激的目的，对于APC而言有利的是将抗原交叉呈递于T细胞，换言之，吸收、加工(细胞外来源的)抗原并将其呈递于T细胞。然而，抗原性材料可能并非总是存在的(例如如果肿瘤已被切除，或者在抗感染疫苗的情况下)，并且在此类情况下，CD40激动剂可能在驱动有效的T细胞刺激方面功效较差。
CD40刺激也可能不足以激活T细胞(例如，如果作为输注产品的CD40激动剂存在剂量限制毒性)。
[0007]出于这些原因，有利的是在用激动剂激活APC表面上的CD40的同时，将抗原输送到APC中。用于此目的的双特异性缀合物在WO 2020/104690中描述。其中描述的双特异性缀合物包含彼此共价偶联的两个结合蛋白。第一结合蛋白对CD40有特异性；第二结合蛋白并不是直接对抗原有特异性，而是对标签有特异性。提供了一种标签构建体，其中该标签与抗原共价偶联，并且与双特异性缀合物形成复合物。因此，通过结合标签，第二结合蛋白与抗原间接结合，提供了一种灵活的模块化方法，通过该方法可以改变抗原，因为在抗原与抗体之间没有化学连接。
[0008]因此WO 2020/104690提供了一种在双特异性缀合物与标签构建体之间形成的复合物，该复合物提供了CD40激动剂(以激活APC)和抗原(以被APC呈递)二者。这保证了CD40激动剂对APC的激活导致对靶抗原有特异性的T细胞的激活，并且有利地允许灵活制备用于个性化药物的缀合物和复合物以及使用这种灵活的疫苗开发平台对使用CD40途径的个体进行疫苗接种以产生有效的抗病原体免疫应答。
[0009]WO 2020/104690的复合物也可以刺激针对抗原的B细胞应答。该复合物可以与B细胞形成两种相互作用：抗CD40结合蛋白可以结合B细胞表面上的CD40，并且标签构建体上的抗原可以结合特异性B细胞受体。这两种相互作用的组合激活了识别抗原的B细胞。实际上，使用WO 2020/104690描述的复合物以此方式激活的B细胞可能不需要辅助T细胞的共刺激来完全激活。
[0010]并非制备包含与CD40激动剂直接融合的抗原或与激动剂融合的抗原特异性地结合物的的缀合物，这将需要为每个患者(或者至少每种不同的肿瘤抗原)或为每种病原血清型辛苦地合成和生产单独的缀合物，而是可以根据特定的个体患者的需要，通过与包含不同抗原但相同标签的标签构建体结合来定制针对个体的个性化用途的双特异性缀合物。通过这种策略定制的双特异性缀合物也适于针对高抗原漂移的病原体进行疫苗接种的个性化策略，保证了灵活的疫苗接种策略。以此方式，仅需要制备单独的标签构建体，这提供了制备患者/病原体特异性治疗剂的简易性和成本方面的益处。进一步相信，与包含与CD40激动剂直接共价融合的抗原的缀合物相比，或者与单独提供CD40激动剂和抗原相比，抗原与CD40激动剂非共价结合可能对于复合物的功效是有利的。
[0011]专利技术人现已发现并非所有激动性CD40抗体都同样适合用于WO 2020/104690的双特异性缀合物。已发现许多激动性CD40抗体在用于此类双特异性缀合物的情况下时具有降低的激动活性。不受理论束缚，可能是这样的情况：在双特异性缀合物的情况下保留激动活性取决于抗体识别的表位在CD40内的位置。假设在双特异性缀合物的情况下，在远离膜的位置处结合CD40的抗体保持激动活性，而在接近膜的位置处结合CD40的抗体失去活性，因为与抗CD40抗体共价连接的大体积的第二结合蛋白在空间上阻断其接近其表位。
[0012]已发现本专利技术的CD40结合蛋白(通常为被称为A9的抗体的形式)在接近CD40的N末端、远离膜的表位处结合CD40，并且在用于上面描述的双特异性缀合物的情况下时保持了高水平的激动活性。因此，本专利技术的抗体可以有利地用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种结合蛋白，其特异性地结合CD40，其中所述结合蛋白是CD40的激动剂并且包含抗体的结合结构域，所述结合结构域包含重链可变结构域和轻链可变结构域，所述重链可变结构域和所述轻链可变结构域各自包含三个互补决定区(CDR)，其中：VLCDR1具有SEQ ID NO：1所示的序列；VLCDR2具有SEQ ID NO：2所示的序列；VLCDR3具有SEQ ID NO：3所示的序列；VHCDR1具有SEQ ID NO：4所示的序列；VHCDR2具有SEQ ID NO：5所示的序列；并且VHCDR3具有SEQ ID NO：6所示的序列。2.如权利要求1所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白结合人CD40并且是人CD40的激动剂。3.如权利要求1或2所述的结合蛋白，其中所述结合蛋白是单克隆抗体、抗体片段或scFv。4.如权利要求3所述的结合蛋白，其中所述抗体、抗体片段或scFv是人的。5.如权利要求3或4所述的结合蛋白，其中所述抗体片段是Fab或F(ab
’
)2抗体片段。6.如权利要求3至5中任一项所述的结合蛋白，其中所述轻链可变结构域包含SEQ ID NO：7所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；并且所述重链可变结构域包含SEQ ID NO：8所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。7.如权利要求3至6中任一项所述的结合蛋白，其中所述特异性地结合分子是IgG2同种型的单克隆抗体。8.如权利要求7所述的结合蛋白，其中所述抗体包含轻链，所述轻链包含SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列；以及重链，所述重链包含SEQ ID NO：10所示的氨基酸序列，或与其具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。9.一种双特异性缀合物，其包含：(i)至少一个如权利要求1至8中任一项定义的第一结合蛋白二以及(ii)至少一个第二结合蛋白，其包含抗体的结合结构域并且结合肽部分二其中所述第一结合蛋白和所述第二结合蛋白共价连接。10.如权利要求9所述的双特异性缀合物，其中所述第一结合蛋白是单克隆抗体并且所述第二结合蛋白是scFv，优选其中所述单克隆抗体是IgG2同种型。11.如权利要求10所述的双特异性缀合物，其中所述scFv共价连接到：(i)所述抗体的C
H
3结构域二或者(ii)所述抗体的C
L
结构域。12.如权利要求11所述的双特异性缀合物，其中所述缀合物包含一个单克隆抗体和两个scFv，并且：(i)一个scFv缀合到所述抗体的每个重链的C
H
3结构域；或者...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：斯特赖克药物公司，
类型：发明
国别省市：