一种食品和乳品中泛酸高通量评价方法技术

本发明专利技术属于食品快速检测技术领域，具体涉及一种食品和乳品中泛酸高通量评价方法，包括以下步骤：S1.制备菌株储备液；S2.制备测定用平板；S3.制备标准溶液；S4.制备样液；S5.制备标准曲线及泛酸含量的测定。本发明专利技术采用杯碟法建立泛酸的快速测定方法，克服传统微生物法的检测缺陷，操作简单，效率高，成本低，重现性好，结果稳定，适用于大批量样品的检测需求。适用于大批量样品的检测需求。

【技术实现步骤摘要】
一种食品和乳品中泛酸高通量评价方法


[0001]本专利技术属于食品快速检测
，具体涉及一种食品和乳品中泛酸高通量评价方法。

技术介绍

[0002]泛酸（Pantothenic acid），又称维生素B5、遍多酸，在生物界中分布广泛。其在维持人体正常生理功能中具有不可或缺的作用，是酰基载体蛋白(CoA)和辅酶 A(CoA)的组成部分。缺乏泛酸易引发免疫力下降、头疼、失眠、痴呆等症状。人体自身无法合成泛酸，因此需要从食物中获取。许多食品如婴幼儿配方食品、孕产妇营养补充食品、保健食品等都会添加泛酸。
[0003]但国标微生物法操作繁琐、测定时间长、对人员要求较高，不易掌握，无法满足大批量样品快速检测的需求。国内外部分实验室采用试剂盒法测定食品中泛酸含量，该方法相对于通过微孔板培养，酶标仪读数的方式，极大程度的降低了工作难度和工作量。相对于国标微生物法，具有步骤便捷，检测快速等优势。然而试剂盒的检测成本较高。杯碟法常用于抗生素类样品的检测，在泛酸含量测定方面，尚未见有报道。
[0004]虽然中国专利CN201010277447.5公开了一种测定维生素H的生物学检测方法，通过维生素H浓度的对数值与生长圈直径的线性关系，建立一种快速简便检测维生素H含量的方法。但是，仍然存在以下问题：1、在进行试验前，需配置菌悬液，且菌悬液配置时间较长，一般为3天，检测效率低；2、采用的储备菌液，须反复活化传代，影响实验结果；3、培养皿中培养基含量为25mL，培养基厚度大，不利于菌的生长扩散，且生长圈不易观察测量；同时采用的是覆盖法：培养基厚度大，透光性不强，模糊不易测量；4、培养时间为2天，时间较长。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供一种食品和乳品中泛酸高通量评价方法。
[0006]本专利技术的技术方案为：一种食品和乳品中泛酸高通量评价方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.制备菌株储备液；将冻干的营养缺陷型菌株接种到乳酸菌肉汤培养基上，33
‑
39℃培养20
‑
28 h；再转种3代增强活力；将活化后的菌液以8000 r/min离心5 min，弃去上清液，加入10 mL无菌水，混匀；重复洗脱3次，确保无残留培养基；加入含甘油的泛酸测定用培养基，混匀制成菌株储备液，分装到菌株保存管中，
‑ꢀ
70℃冻存备用；S2.制备测定用平板；配制一定量的泛酸测定用培养基，加入琼脂粉后，121℃灭菌5min，冷却至50
‑
60℃，加入适量的菌株储备液，使培养基中菌浓度在设定的OD
600
值；充分混匀后，分装于无菌培养皿内；轻摇平板使菌液均匀平铺，待其凝固后制成测定用平板，2
‑
4℃
保存备用；S3.制备标准溶液；S4.制备样液；S5.制备标准曲线及泛酸含量的测定；制备标准曲线：将无菌牛津杯放入泛酸测定用平板中，移取标准曲线溶液于各牛津杯中，无菌蒸馏水空白对照组，一式3份；将平板正置于33
‑
39℃恒温培养箱中培养20
‑
28h；测量各溶液的菌株生长圈的直径；以泛酸标准品浓度的对数值为横坐标，生长圈直径为纵坐标，绘制标准曲线；泛酸含量的测定：移取样液于各牛津杯中，无菌蒸馏水空白对照组，一式3份；将平板正置于33
‑
39℃恒温培养箱中培养20
‑
28h；测量各溶液的菌株生长圈的直径，然后根据标准曲线计算样品中泛酸的含量。
[0007]本专利技术是利用微生物的特异性，给予一定的营养条件或改变微生物的生存环境，通过其生长繁殖和代谢表达来完成对单一维生素成分的测定。虽然现有技术中微生物法已经非常成熟，利用微生物本身对生存环境极为敏感，且其特异性表达决定了微生物法检出限低、灵敏度高、结果可靠的优点，但同时也因为微生物易染菌、特异性强造成了其具有培养周期长、重现性差等缺点。尤其是活化培养及分离，不论传统方法或现代检测技术，受检测灵敏度的限制，经前处理后多需经过活化培养、选择性分离后方可用于后续检测分析。传统微生物检测中上述两个步骤耗时长达24
‑
96h，为整个检测流程中的关键限速步骤。
[0008]本专利技术中，通过将植物乳杆菌的冻干菌株活化传代后，利用甘油将同一批次储备菌株分装冻存到菌株保存管中，可长时间保持菌株的活力，节省了菌种制备的时间，简化了实验操作，有效降低了污染的概率；并且，由于同一批次分装的菌株活力基本一致，制备平板时无须重复测定。有效控制试验菌株的活力，保证了试验的稳定性，简化了实验操作，避免交叉污染。另外，制备的平板相当于特异性检测试剂盒，保存时间长，试验前现取现用，节省了检验时间，有效提高了检测效率解决了传统微生物法试验周期长、操作复杂的问题，极大缩短了检测时间。
[0009]进一步的，步骤S1中，所述营养缺陷型菌株为植物乳杆菌。
[0010]本专利技术中，泛酸是植物乳杆菌生长所必须的营养素，根据分子扩散的原理，利用杯碟法使泛酸在含植物乳杆菌的特异性培养基内呈球面形扩散，形成含一定浓度泛酸的球形区。植物乳杆菌在无泛酸的培养基区域无法生长繁殖，在含泛酸的培养基区域生长繁殖而呈现浑浊的生长圈。在一定浓度范围内，植物乳杆菌生长圈的大小与泛酸浓度呈线性关系。
[0011]进一步的，步骤S1中，加入含10
‑
30%甘油的泛酸测定用培养基。
[0012]本专利技术中，通过添加10
‑
30%甘油，利用甘油保护菌种，节省菌种制备时间，简化试验操作，同时菌种活力更稳定，保证了试验的有效性。
[0013]进一步的，步骤S2中，所述泛酸测定用培养基中琼脂的浓度为0.5%
‑
2%。
[0014]本专利技术中，通过控制测定用平板中琼脂的特定比例，为植物乳杆菌提供适宜的生长条件，保证菌在测定用平板中有效生长，保证了试验的有效性；同时，琼脂可作为凝固剂将液体培养基转化为凝固态培养基，方便后续测试。
[0015]进一步的，步骤S2中，使培养基中菌浓度OD
600
值为0.015
‑
0.035。
[0016]本专利技术中，通过控制培养基与菌株储备液在特定比例，可通过OD
600
数值获得培养
基中准确的菌浓度，能够对菌浓度准确定量，进而可以保证各平板的检测结果误差可控。所述OD
600
值是指在600nm光波长下的吸光度值。
[0017]本专利技术中，通过大量创造性试验，发现在600nm光波长下，可以有更加快速准确地获得菌株储备液在培养基中浓度的真实值，避免造成实验误差，可保证实验结果的准确度。
[0018]进一步的，步骤S2中，分装于无菌培养皿内，每皿10
‑
15mL。
[0019]本专利技术中，通过预先制备测定用平板，保存于2
‑
4℃环境下，试验前按量取用，简化试验操作，节省了检验时间，有效提高了检测效率。
[0020]进一步本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种食品和乳品中泛酸高通量评价方法，其特征在于，包括以下步骤：S1.制备菌株储备液；将冻干的营养缺陷型菌株接种到乳酸菌肉汤培养基上，33
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39℃培养20
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28 h；再转种3代增强活力；将活化后的菌液以8000 r/min离心5 min，弃去上清液，加入10 mL无菌水，混匀；重复洗脱3次，确保无残留培养基；加入含甘油的泛酸测定用培养基，混匀制成菌株储备液，分装到菌株保存管中，
‑ꢀ
70℃冻存备用；S2.制备测定用平板；配制一定量的泛酸测定用培养基，加入琼脂粉后，121℃灭菌5min，冷却至50
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60℃，加入适量的菌株储备液，使培养基中菌浓度在设定的OD
600
值；充分混匀后，分装于无菌培养皿内；轻摇平板使菌液均匀平铺，待其凝固后制成测定用平板，2
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4℃保存备用，试验时按量取用；S3.制备标准溶液；S4.制备样液；S5.制备标准曲线及泛酸含量的测定；制备标准曲线：将无菌牛津杯放入泛酸测定用平板中，移取标准曲线溶液于各牛津杯中，无菌蒸馏水空白对照组，一式3份；将平板正置于33
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39℃恒温培养箱中培养20
‑
28h；测量各溶液的菌株生长圈的直径；以泛酸标准品浓度的对数值为横坐标，生长圈直径为纵坐标，绘制标准曲线；泛酸含量的测定：移取样液于各牛津杯中，无菌蒸馏水空白对照组，一式3份；将平板正置于33
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39℃恒温培养箱中培养20
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28h；测量各溶液的菌株生长圈的直径，然后根据标准曲线计算样品中泛酸的含量。2.根据权利要求1所述的食品和乳品中泛酸高通量评价方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：严家俊，金佳佳，苏焕斌，郑思珩，綦艳，吴思敏，张娟，黄翠莉，庄艺协，刘辉，
申请(专利权)人：广东产品质量监督检验研究院国家质量技术监督局广州电气安全检验所，广东省试验认证研究院，华安实验室，
类型：发明
国别省市：