人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物及其应用，涉及生物技术领域，通过对不同传代次数的人骨髓间充质干细胞来源的凋亡囊泡进行蛋白质谱数据分析，筛选出ITGA10为候选凋亡囊泡骨活性表面标志物。本发明专利技术将ITGA10作为囊泡骨活性特异性的表面标志物，特异性地在促成骨能力强的囊泡中高表达中，并定位在凋亡囊泡表面，从而可以将促成骨能力强的囊泡由普通混合细胞中分离纯化出来；在采用ITGA10作为表面标志物时可以有效地判断凋亡囊泡是否适用于骨组织工程，并分离出高表达ITGA10囊泡，增强其可应用性，本发明专利技术的凋亡囊泡表面标志物填补其骨活性标志物的空缺并使其更加符合骨组织工程应用的要求。并使其更加符合骨组织工程应用的要求。并使其更加符合骨组织工程应用的要求。

【技术实现步骤摘要】
人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物及其应用


[0001]本专利技术涉及生物
，具体为人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物及其应用。

技术介绍

[0002]细胞凋亡是一种程序性的细胞死亡，包括明显的细胞收缩、染色质凝结和胞浆起泡，人体内每天有超过500亿个细胞发生凋亡，是维持组织稳态所必需的。在这一过程中产生了大量的凋亡囊泡(apoVs)，其中包含蛋白质、DNA、RNA、脂类和代谢产物。凋亡囊泡是一种异质的纳米囊泡群体，具有不同的货物、大小和生产机制。以往的研究主要集中在凋亡小体(直径1
‑
5μm)，而最近的研究发现了更小的囊泡，包括凋亡囊泡(直径0.1
‑
1μm)和凋亡外泌体(直径<150 nm)。越来越多的证据表明，凋亡囊泡作为旁分泌的一个重要组成部分，通过促进细胞间通讯参与多种生理和病理生理事件。
[0003]骨间充质干细胞(BMSCs)是一种具有自我更新和多向分化潜能的多能细胞，被认为在骨形成中发挥重要作用。因为移植可以直接补足由于各种原因导致的骨髓间充质干细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物，其特征在于：通过对不同传代次数的人骨髓间充质干细胞来源的凋亡囊泡进行蛋白质谱数据分析，筛选出ITGA10为候选凋亡囊泡骨活性表面标志物。2.根据权利要求1所述的人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物，其特征在于：所述ITGA10是整合素家族的成员，由1167个氨基酸组成，是单通道I型膜蛋白。3.人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物在骨组织工程中的应用，其特征在于：将ITGA10定位在凋亡囊泡表面，ITGA10在促成骨能力强的骨髓间充质干细胞源性凋亡囊泡中高表达，而ITGA10在促成骨能力弱的复制性老化细胞源性凋亡囊泡中表达量显著降低，可用于检测和鉴定其体外促进间充质干细胞成骨活性，并可用于将成骨活性强的凋亡囊泡从混合囊泡中分离出来以提高治疗效果。4.根据权利要求3所述的人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物在骨组织工程中的应用，其特征在于：人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的制备方法，包括以下操作：S1：体外分离并提纯人骨髓间充质干细胞；S2：以培养液重悬，在培养液中加入星形孢菌素诱导人骨髓间充质干细胞凋亡，用于重悬的培养液为MEMα培养基；S3：收集上清液，通过梯度离心法分离得到凋亡囊泡，所述的梯度离心法包括以下步骤：S31：将所述上清液于4℃，以800g离心10min，取上清液，获得第一离心上清液；S32：将所述上清液于4℃，以2000g离心10min，取上清液，获得第二离心上清液；S33：将所述第一离心上清液于4℃，以16000g离心30min，取沉淀物，即得粗制凋亡囊泡；S34：将所述粗制凋亡囊泡以无菌PBS洗涤，然后于4℃、以16000g离心30min，获得凋亡囊泡纯品。5.根据权利要求4所述的人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物在骨组织工程中的应用，其特征在于：所述S34中获得的凋亡囊泡呈双面凹的圆盘状，粒径为100
‑
1000nm。6.根据权利要求4所述的人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡的表面标志物在骨组织工程中的应用，其特征在于:所述方法提纯不同传代次数人骨髓间充质干细胞来源凋亡囊泡，并对其所包含的蛋白进行测序分析，包括以下步骤：S1：提取凋亡囊泡蛋白并加载于SDS
–
PAGE胶，蛋白质样品进入堆叠凝胶后停止电泳，含有蛋白质的凝胶部分被切除并用考马斯亮蓝染色；S2：将凝胶切片切成1
×
1 mm片，放置在含有1 ml水的1.5 ml微型离心管中，并孵育30分钟；S3：将水替换为200
...

【专利技术属性】
技术研发人员：张晓，周永胜，江雨荷，
申请(专利权)人：北京大学口腔医学院，
类型：发明
国别省市：