用于确定反应动力学参数的方法技术

根据本发明专利技术，提供了一种用于确定在分析物和附着于流动池的测试表面的配体之间的反应的动力学参数的方法，该方法包括以下步骤：（a）在第一时间点（t1）至第二时间点（t2）之间，使包含所述分析物的第一体积的样本流体（V1）流过测试表面；（b）在第三时间点（t3）至第四时间点（t4）之间，使不具有分析物的第一体积的缓冲流体（Vb1）流过测试表面；（c）在第五时间点（t5）至第六时间点（t6）之间，使包含所述分析物的至少第二体积的样本流体（V2）流过测试表面；（d）在第七时间点（t7）至第八时间点（t8）之间，使不具有分析物的至少第二体积的缓冲流体（Vb2）流过测试表面；（e）使用传感器测量分析物与测试表面上的配体的接合，以获得接合曲线；（f）仅使用接合曲线在预定义间隔时间段中的部分而不使用接合曲线的其他部分来确定动力学参数。用接合曲线的其他部分来确定动力学参数。用接合曲线的其他部分来确定动力学参数。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于确定反应动力学参数的方法


[0001]本专利技术涉及一种确定分析物和附着于流动池的测试表面的配体之间反应的动力学参数的方法；以及特别是涉及一种方法，该方法涉及使用显著较少的表示分析物与配体关联的接合曲线部分，而是主要使用表示分析物与配体解离的接合曲线部分，以便确定动力学参数。

技术介绍

[0002]在用于确定分析物和附着于流动池的测试表面的配体之间的反应的动力学参数的现有方法中，包含所述分析物的一定体积的样本流体连续流过测试表面。当包含所述分析物的一定体积的样本流体连续流过测试表面时，使用传感器来测量与测试表面上的配体接合的分析物的量；传感器输出曲线，该曲线表示与测试表面上的配体接合的分析物的量，称为接合曲线。接合曲线将包含关联阶段和解离阶段。当一定体积的样本流体正经过测试表面并且样本流体中的分析物与配体接合时，关联阶段发生；接合曲线将示出在关联阶段期间与测试表面上的配体接合的分析物的量的增加。在一定体积的样本流体经过测试表面之后，并且在下一体积的样本流体流过测试表面之前，解离阶段发生；接合曲线将示出在解离阶段期间与测试表面上的配体接合的分析物的量减少，并且先前接合的分析物变为从配体解离（或脱离）。
[0003]然后使用整个接合曲线（即所有的关联阶段和解离阶段）来确定分析物和测试表面上的配体之间的反应的动力学参数；典型地，这是通过标识预定义的模型来完成的，该预定义的模型具有已知的动力学参数，其最佳地配合到接合曲线；最佳地配合到接合曲线的模型的动力学参数然后被认为是反应的动力学参数。
[0004]然而，使用整个接合曲线来确定分析物和测试表面上的配体之间的反应的动力学参数的问题是，它可能导致对反应的动力学参数的不准确确定：用于测量接合到测试表面上的配体的分析物的量并输出接合曲线的现有传感器对样本流体体积的折射率的改变敏感；当包含分析物的一定体积的样本流体流过测试表面时，该体积的样本流体的折射率的改变可能在接合曲线中引入伪像；这些伪像存在于接合曲线的关联阶段中；因为整个接合曲线（即所有的关联阶段和解离阶段）然后被用于确定分析物和测试表面上的配体之间的反应的动力学参数，所以这些伪像进而导致对反应的动力学参数的不准确确定。
[0005]本专利技术的目的是消除或减轻至少一些与本领域中现有方法相关联的缺点。特别地，本专利技术的目的是提供一种用于确定反应的动力学参数的改进方法，该方法不易受到由折射率改变创建的接合曲线中的伪像所影响，该伪像发生在一定体积的样本流体流过流动池的测试表面时。

技术实现思路

[0006]根据本专利技术，该目的通过至少具有权利要求1中所记载的步骤的方法来实现。从属权利要求记载了可以在本专利技术的各种实施例中执行的有利的、可选的步骤。
[0007]有利的是，在本专利技术的方法中，主要是接合曲线的解离阶段（即，与一定体积的样本流体已经流过测试表面之后、下一体积的样本流体流过测试表面之前的时段相对应的接合曲线部分），而不是接合曲线的关联阶段（即，与当一定体积的样本流体正流过测试表面并且样本流体中的分析物正与配体接合时相对应的接合曲线部分）用于确定反应的动力学参数。
[0008]特别地，在第一实施例中，仅使用接合曲线的解离阶段而不使用接合曲线的关联阶段来确定动力学参数；并且在第二实施例中，接合曲线的解离阶段以及接合曲线的关联阶段的仅仅非常小的一部分被用于确定动力学参数。在第二实施例中，接合曲线的关联阶段的小部分可以如此小，以至于接合曲线的那些部分中的伪像对动力学参数的确定具有可忽略的影响。在任一实施例中，与现有技术相比，用于确定动力学参数的接合曲线的关联阶段的量减少了。
[0009]因此，在本专利技术中，当一定体积的样本流体流过流动池的测试表面时发生的折射率改变创建的接合曲线中的伪像将对动力学参数的确定具有较小影响。
附图说明
[0010]本专利技术的示例性实施例在说明书中公开，并由附图图示，其中：图1是完整接合曲线，其包括六个关联阶段和六个解离阶段，这是由在流动池的测试表面之上连续流过相应六个体积的包含分析物的样本流体而产生的；图2示出了图1的接合曲线在多个预定义间隔时间段中的部分；图3示出了用于确定所述多个预定义间隔时间段的归一化浓度曲线。
具体实施方式
[0011]根据本专利技术，提供了一种用于确定分析物和附着于流动池的测试表面的配体之间的反应的动力学参数的方法。该方法包括以下步骤：（a）在第一时间点（t1）至第二时间点（t2）之间，使包含所述分析物的第一体积的样本流体（V1）流过测试表面。（b）在第三时间点（t3）至第四时间点（t4）（第三时间点（t3）可以等于第二时间点（t2））之间，使第一体积的缓冲流体（Vb1）（其不具有分析物）流过测试表面；最优选地，在第三时间点（t3）至第四时间点（t4）之间发生从第一体积的样本流体（V1）中解离与测试表面上的配体接合的至少一些分析物。在一个实施例中，缓冲流体被配置为促进接合的分析物从配体的解离。（c）在第五时间点（t5）至第六时间点（t6）（第五时间点（t5）可以等于第四时间点（t4））之间，使包含所述分析物的至少第二体积的样本流体（V2）流过测试表面；（d）在第七时间点（t7）至第八时间点（t8）（第七时间点（t7）可以等于第六时间点（t6））之间，使第二体积的缓冲流体（Vb2）（其不具有分析物）流过测试表面；最优选地，在第七时间点（t7）和第八时间点（t8）之间发生从第二体积的样本流体（V2）中解离与测试表面上的配体接合的至少一些分析物。在一个实施例中，缓冲流体被配置为促进接合的分析物从配体的解离。（e）使用传感器测量分析物与测试表面上的配体的接合，以获得接合曲线。
（f）仅使用接合曲线在预定义间隔时间段内的部分、而不使用接合曲线的其他部分来确定动力学参数。
[0012]为了确定仅接合曲线在预定义间隔时间段的部分的动力学参数，实行以下步骤：建立归一化浓度曲线（c(t)），其描述了测试表面处的分析物随时间的浓度；估计动力学参数Rmax、k
a
、k
d
的值，其中Rmax是对应于配体饱和的预定义理论最大接合曲线值，诸如例如当配体的所有接合位点被接合到配体的分析物占据时，k
a
是关联速率常数，并且k
d
是解离速率常数；使用所述归一化浓度曲线（c(t)）和动力学参数Rmax、k
a
、k
d
的所述估计值来求解微分反应方程：以便获得模拟接合曲线sbc = R(t)。
[0013]一旦获得了微分反应方程，则提取所述预定义间隔时间段（）中的模拟接合曲线的部分，以提供相应的偏模拟接合曲线（sbcj）。
[0014]然后根据以下方程建立模拟接合曲线的偏卡方（）：其中dmbj是接合曲线在第j个预定义间隔时间段（）中的部分，并且其中sbcj是第j个偏模拟接合曲线，并且N
dmbj
是接合曲线在第j个预定义间隔时间段（）中的部分中的数据点的数量。
[0015]在已经确定模拟接合曲线的偏卡方（）之后本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于确定在分析物和附着于流动池的测试表面的配体之间的反应的动力学参数的方法，所述方法包括以下步骤：（a）在第一时间点（t1）至第二时间点（t2）之间，使包含所述分析物的第一体积的样本流体（V1）流过测试表面；（b）在第三时间点（t3）至第四时间点（t4）之间，使不具有分析物的第一体积的缓冲流体（Vb1）流过测试表面；（c）在第五时间点（t5）至第六时间点（t6）之间，使包含所述分析物的至少第二体积的样本流体（V2）流过测试表面；（d）在第七时间点（t7）至第八时间点（t8）之间，使不具有分析物的至少第二体积的缓冲流体（Vb2）流过测试表面；（e）使用传感器测量分析物与测试表面上的配体的接合，以获得接合曲线；（f）仅使用所述接合曲线在预定义间隔时间段中的部分，而不使用所述接合曲线的其他部分，来确定动力学参数。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述预定义间隔时间段包括第一和第二间隔时间段（、）；其中第一间隔时间段（）发生在第二时间点（t2）和第五时间点（t5）之间；并且其中第二间隔时间段（）发生在第六时间点（t6）和第九时间点（t9）之间，其中第九时间点（t9）发生在第八时间点（t8）之后的某个时间，或者，第九时间点（t9）等于第八时间点（t8）。3.根据权利要求2所述的方法，其中，第一间隔时间段（）是第二时间点（t2）和第五时间点（t5）之间的持续时间的部分；并且第二间隔时间段（）是第六时间点（t6）和第九时间点（t9）之间的持续时间的部分；或者其中第一间隔时间段（）由第二时间点（t2）和第五时间点（t5）之间的整个时间间隔定义；并且第二间隔时间段（）由第六时间点（t6）和第九时间点（t9）之间的整个时间间隔定义。4.根据权利要求1所述的方法，进一步包括校准步骤，以确定预定义间隔时间段；其中校准步骤包括，建立浓度曲线；以及使用所述浓度曲线来确定预定义间隔时间段。5.根据权利要求4所述的方法，其中，使用所述浓度曲线来确定预定义间隔时间段的步骤包括，选择阈值浓度；标识当浓度曲线等于阈值浓度的时刻；其中每个相应的预定义间隔时间段由当浓度曲线处于阈值浓度时的时刻和当浓度曲线处于阈值浓度时的下一时刻之间的时段来定义，所述浓度曲线示出所述时刻之前的浓度降低，所述浓度曲线示出所述下一时刻之前的浓度增加。6.根据权利要求5所述的方法，其中，选择阈值浓度的步骤包括，标识浓度曲线的最大值；选择百分比值，其中阈值浓度由浓度曲线的最大值乘以所述百分比值来定义。7.根据权利要求1所述的方法，进一步包括校准步骤，以确定预定义间隔时间段；其中校准步骤包括，建立浓度曲线；归一化所述浓度曲线以提供归一化浓度曲线（c(t)）；并且然后使用该归一化浓度曲线（c(t)）来确定预定义间隔时间段。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，使用所述归一化浓度曲线来确定预定义间隔时间段的步骤包括，选择阈值浓度；标识当归一化浓度曲线等于阈值浓度时的时刻；其中每个相应的预定义间隔时间段由当归一化浓度曲线处于阈值浓度时的时刻和当归一化浓度曲线处于阈值浓度时的下一时刻之间的时段来定义，所述归一化浓度曲线示出所述时刻之前的浓度降低，所述归一化浓度曲线示出所述下一时刻之前的浓度增加。9.根据权利要求8所述的方法，其中，选择阈值浓度的步骤包括，标...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：建奥迪斯有限公司，
类型：发明
国别省市：