一种山东灵芝提取物的制备方法及其在制备降血糖药物中的应用技术

本发明专利技术公开了一种山东灵芝提取物的制备方法及其在制备降血糖药物中的应用，包括以下步骤，取保藏编号CGMCCNO.40284山东灵芝菌种经活化后进行摇床震荡液体发酵培养，培养结束后，过滤，得到发酵液和菌丝；菌丝烘干磨成粉末，用热水提取获得胞内水提物；热水提取结束后用乙醇进行醇提获得胞内醇提物；将过滤所得发酵液加热并浓缩，加入乙醇进行醇沉，醇沉后，再将其放在离心机中离心，取沉淀，得到胞外醇沉物，醇沉物烘干后粉碎成粉末；取离心后的上清醇溶液用旋转蒸发仪旋蒸处理，得到胞外醇溶物。本研究结果将为山东灵芝提取物开发利用和降血糖等相关药品的研发提供一定的试验基础和理论依据，具有一定的理论意义和实际应用价值。值。值。

【技术实现步骤摘要】
一种山东灵芝提取物的制备方法及其在制备降血糖药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种山东灵芝提取物的制备方法及其在制备降血糖药物中的应用。

技术介绍

[0002]山东灵芝Ganderma shangdongense 担子果一年生，有柄，木栓质或木质，无气味、味苦，干燥后质量轻。菌盖形状多变，匙形或圆形。糖尿病（Diabetes Mellitus）是一种常见的代谢性疾病，其发病率在世界范围内逐年上升。据统计，目前全世界约有1.2亿糖尿病患者，已成为继心血管病、肿瘤之后严重威胁人类健康的第三大疾病。α
‑
葡萄糖苷酶（α
‑
glucosidase）是一种存在小肠绒毛粘膜细胞刷状缘的酶类，可以从淀粉和其它有关多糖的非还原端水解葡萄糖。人体对摄入的淀粉、蔗糖等碳水化合物的吸收利用，依赖于小肠内该酶的活性。α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂是上世纪 70 年代开发研制的一类新型口服降血糖药物，能竞争性抑制小肠内 α
‑
葡萄糖苷酶的活性，延缓或抑制葡萄糖在肠道吸收，有效降低餐后高血糖。目前，临床常用的α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂有阿卡波糖、伏格列波糖、米格列醇等。目前，α
‑
葡萄糖苷酶抑制剂主要来源于两个方向：从动植物及微生物中提取，以及人工半合成。α
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葡萄糖苷酶抑制剂成分随来源物不同而不同，主要有多糖、生物碱、苷类、多肽、糖苷类、黄酮类、皂苷和酚类等。
[0003]天然抗氧化剂能有效调节氧化应激，减轻糖尿病、心脏、肝脏或神经系统性疾病和抑制癌转移。因此从植物中寻找天然的抗氧化剂，作为预防性干预活性氧介导的疾病，已经成为很有吸引力的研究领域之一。研究发现赤芝多糖、灵芝孢子粉粗多糖、紫芝、南方灵芝、无柄紫灵芝等具有抗氧化活性并呈浓度依赖性。Kan 等验证灵芝是天然抗氧化剂和食品工业防腐剂的良好来源。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种山东灵芝提取物的制备方法及其在制备降血糖药物中的应用，测定山东灵芝四种提取物体外抗氧化和降血糖活性，为山东灵芝作为天然药剂的研发提供新的方向，同时为开发山东灵芝种质资源开发提供一定的理论基础。
[0005]本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种山东灵芝提取物的制备方法，包括以下步骤：（1）将平板活化6
‑
7d的山东灵芝菌种转接到液体菌种培养基中，25
‑
29℃、110
‑
150rpm摇床中震荡培养6
‑
7d后，作为液体菌种，以5
‑
10%的接种量转接到液体发酵培养基中扩大培养8
‑
10d。培养结束后，用200目纱网进行过滤，得到发酵液和菌丝；其中所述山东灵芝（Ganderma shangdongense）的保藏编号为CGMCC NO.40284；（2）菌丝于50
‑
60℃烘干，烘干磨成粉末。按照1:10
‑
1:20的比例，用70
‑
95%乙醇以60
‑
100Hz频率进行超声醇提，每次1h，重复3
‑
4次，合并提取液用旋转蒸发仪进行乙醇回收
后剩余液体经冷冻干燥后，即得胞内醇提样品；（3）经醇提后的菌丝残渣，以1:5
‑
1:10的比例，用90
‑
100℃热水提取3
‑
4次，每次1h，合并提取液后浓缩至原体积的1/10，后加入1
‑
4倍70
‑
95%乙醇进行醇沉，醇沉24
‑
48h后，置5000r/min离心机中离心10min，所得沉淀经冷冻干燥后，即得胞内醇沉样品；（4）将过滤的发酵液加热并浓缩至原始体积的1/10，后加入1
‑
4倍70
‑
95%乙醇进行醇沉，醇沉24
‑
48h后，置5000r/min离心机中离心10min，所得沉淀经冷冻干燥后，即为胞外醇沉样品；（5）取离心后的上清醇溶液用旋转蒸发仪进行乙醇回收后剩余液体经冷冻干燥后，即得胞外醇溶样品。
[0006]优选地，所述的山东灵芝液体菌种活化的过程为：接种量为每瓶10块0.5cm2平板菌种块，培养的前1
‑
3天，温度设定25
‑
27℃，转速110r/min，避光振荡培养；培养的第3
‑
7天，温度设定27
‑
29℃，转速130
‑
150r/min，避光振荡培养。液体菌种培养的不同阶段，设定不同的温度和转速，以保证前期尽快定植，中后期快速增长。
[0007]优选地，所述的山东灵芝液体发酵扩大培养的过程为：液体菌种接种量5
‑
10%，培养的第1
‑
5天，温度设定27
‑
29℃，转速130
‑
150r/min，避光振荡培养；培养的第5
‑
8天，温度设定25
‑
27℃，转速110
‑
130r/min，避光振荡培养。液体发酵扩大培养的不同阶段，设定不同的温度和转速，以保证前期尽快进入快速增长期，后期减缓衰老且促进次生代谢产物的积累。
[0008]优选地，液体菌种培养基为：马铃薯20%，合欢木屑1%，葡萄糖2%。
[0009]优选地，液体发酵扩大培养基为：玉米面1%，麸皮1%，蔗糖2%，酵母膏0.2%，蛋白胨0.3%，KH2PO
4 0.1%，MgSO4·
7H20 0.05%。
[0010]上述制备方法制备的山东灵芝提取物在制备降血糖药物中的应用。山东灵芝提取物与医学上可接受载体制备成片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、泡腾片剂、舌下片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、微球剂、微球剂、颗粒剂、丸剂、滴丸剂、散剂、膏剂、口服液、混悬剂、溶液剂、气雾剂、注射剂、注射乳剂、冻干粉针、缓释或控释制剂。
[0011]有益效果本专利技术通过将山东灵芝提取物的四组有效成分进行试验，发现具有明显的降低血糖的作用。
[0012]山东灵芝的胞外醇沉样品当浓度为1mg/mL时，对α
‑
葡萄糖苷酶抑制效果最佳，抑制率可以达到90%以上，明显与阿卡波糖的抑制效果相近，表明其具有良好的体外降糖活性，通过Lineweaver
‑
Burk双倒数作图法也可以看出胞外醇沉样品对α
‑
葡萄糖苷酶的抑制类型为竞争性抑制剂。这一研究对开发和可持续利用我国丰富的自然资源具有重要的科学和现实意义。
[0013]菌种保藏信息保藏时间：2022.8.24；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏编号：CGMCC NO.40284；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所；分类命名：山东灵芝Ganderma shangd本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种山东灵芝提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将平板活化6
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7d的山东灵芝菌种转接到液体菌种培养基中，25
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29℃、110
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150rpm摇床中震荡培养6
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7d后，作为液体菌种，以5
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10%的接种量转接到液体发酵培养基中扩大培养8
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10d；培养结束后，用200目纱网进行过滤，得到发酵液和菌丝；其中所述山东灵芝（Ganderma shangdongense）的保藏编号为CGMCC NO.40284；（2）菌丝于50
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60℃烘干，烘干磨成粉末，按照1:10
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1:20的比例，用70
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95%乙醇以60
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100Hz频率进行超声醇提，每次1h，重复3
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4次，合并提取液用旋转蒸发仪进行乙醇回收后剩余液体经冷冻干燥后，即得胞内醇提样品；（3）经醇提后的菌丝残渣，以1:5
‑
1:10的比例，用90
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100℃热水提取3
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4次，每次1h，合并提取液后浓缩至原体积的1/10，后加入1
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4倍70
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95%乙醇进行醇沉，醇沉24
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48h后，置5000r/min离心机中离心10min，所得沉淀经冷冻干燥后，即得胞内醇沉样品；（4）将过滤的发酵液加热并浓缩至原始体积的1/10，后加入1
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4倍70
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95%乙醇进行醇沉，醇沉24
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【专利技术属性】
技术研发人员：田雪梅，耿彬彬，张馨元，张国利，候冉冉，王光远，张英昊，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：