水产品中甲基睾酮的液相色谱-串联质谱测定方法技术

本发明专利技术提供了一种水产品中甲基睾酮的液相色谱

【技术实现步骤摘要】
水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法


[0001]本专利技术属于化学分析
，具体涉及一种水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法，具体适用于鱼类、虾类、蟹类、贝类、牛蛙和甲鱼中甲基睾酮的测定。

技术介绍

[0002]甲基睾酮(17α
‑
Methyltestosterone)是人工合成的雄性激素，通常用于新孵化的鱼苗的性别逆转。根据已有报道，目前甲基睾酮已经成功诱导了罗非鱼、黄颡鱼和虹鳟等多种鱼类发生性逆转。在水产养殖中，甲基睾酮还能促进蛋白质的合成代谢，从而加快动物生长，提高饲料转化率。实践证明，如果在养鱼中使用甲基睾酮，鱼的产量可以增加30％。在水产养殖中使用甲基睾酮的方式主要有浸泡、注射和饲料添加等，对比注射和浸泡方式，一般在鱼饲料中添加甲基睾酮是激素诱导性反转最简单、最方便的方式。然而，甲基睾酮是可以在生物基质中持久累积的化合物，是一种不易被生物代谢的脂溶性化合物。食用动物中微量的甲基睾酮残留会危害消费者的健康，如早孕反应、胎儿异常、肝脏损伤和扰乱激素平衡等。因此，许多国家规定禁止在食品动物中使用甲基睾酮，而且在食品中不得检出。在我国《农业农村部公告第250号》中，明确规定甲基睾酮为禁止使用药物。然而，据报道，水产品中的甲基睾酮的检出问题仍然存在，因此，迫切需要建立更加高效灵敏的甲基睾酮检测方法。
[0003]目前，检测甲基睾酮的方法有GC
‑
MS、ELISA、CE、LC、LC
‑
MS等，但是水产品中甲基睾酮残留检测研究的深度和范围明显不足，存在灵敏度不足，前处理过程复杂，需要的试剂耗材较多，使用范围受到限制。以上种种给水产品中甲基睾酮残留的监控和风险评估带来了很大的不便。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中的不足，本专利技术的目的是提供一种水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法。
[0005]为达到上述目的，本专利技术的解决方案是：
[0006]一种水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法，其包括如下步骤：
[0007](1)、将水产品去头、骨、内脏，取可食部分分别绞碎混合均匀，得到预处理的水产品，并在
‑
18℃以下保存；
[0008](2)、将预处理的水产品置于离心管中，加入50μL(200ng/mL)内标物标准工作液进行涡旋混合30s，接着加入8mL乙酸乙酯，涡旋1min，水浴超声，离心，取上清液转移至10mL玻璃离心管中，并在50℃下氮气下吹干；最后加入乙腈水溶液振荡复溶，得到待净化液；
[0009](3)、将中性氧化铝固相萃取柱用5mL乙腈活化后，移入待净化液，试样溶液以1滴/秒的流速过柱，将流出液过0.22μm的PTFE滤膜至进样瓶中，至液相色谱
‑
串联质谱仪进行测定。
[0010]优选地，步骤(1)中，水产品包括鱼类、虾类、蟹类、贝类、牛蛙和甲鱼。
[0011]优选地，步骤(2)中，内标物标准工作液的制备过程为：将甲基睾酮
‑
D3标准中间液
置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，浓度为200ng/mL，
‑
18℃避光保存。
[0012]优选地，甲基睾酮
‑
D3标准中间液的制备过程为：将甲基睾酮
‑
D3标准储备液置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，浓度为20.0μg/mL，
‑
18℃避光保存。
[0013]优选地，甲基睾酮
‑
D3标准储备液的制备过程为：将甲基睾酮
‑
D3溶于甲醇后至10mL棕色容量瓶，用甲醇定容至刻度，混匀，于
‑
18℃避光保存。
[0014]优选地，步骤(2)中，加入8mL乙酸乙酯提取1次，超声的时间为10
‑
20min，优选为10min，由于超声10min和20min的待测物回收率相近，选择超声10min可节约前处理时间，提高检测效率；离心的转速为4000
‑
8000r/min，优选为4000r/min，离心的时间为2
‑
5min，优选为5min，由于8000r/min对仪器设备要求较高，而选择4000r/min离心5min即可达到理想效果，因此优选离心转速为4000r/min，离心时间为5min。。
[0015]优选地，步骤(3)中，将中性氧化铝固相萃取柱用5mL乙腈活化后，移入待净化液，直接通过型方式过柱，这一步有效减少了富集、浓缩的过程，大大节约了前处理时间，减少了有机试剂的使用，更加环保，且经过测试，过柱前后甲基睾酮回收率接近100％，待测物无损失。
[0016]优选地，步骤(3)中，液相色谱
‑
串联质谱仪测定标准溶液中甲基睾酮的过程为：
[0017]3‑
1)甲基睾酮标准储备液及其内标物标准储备液的制备：甲基
‑
17Β
‑
羟基
‑
雄甾
‑4‑
烯
‑3‑
酮和甲基睾酮
‑
D3分别溶于甲醇中，溶解后至10mL棕色容量瓶，分别用甲醇定容至刻度，混匀，分别配制成浓度为1.0mg/mL的甲基睾酮标准储备液和内标物标准储备液，于
‑
18℃避光保存，有效期均为1年；
[0018]3‑
2)甲基睾酮标准中间液的制备：准确吸取1.00mL的甲基睾酮标准储备液，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，浓度为20.0μg/mL，
‑
18℃避光保存，有效期为3个月；
[0019]内标物标准中间液的制备：准确吸取甲基睾酮
‑
D3标准储备液(即内标物标准储备液)，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，浓度为20.0μg/mL，
‑
18℃避光保存，有效期为3个月；
[0020]3‑
3)甲基睾酮标准工作液的制备：准确吸取1.00mL的甲基睾酮标准中间液，置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，浓度为200ng/mL，
‑
18℃避光保存，有效期为1个月；
[0021]内标物标准工作液的制备：准确吸取甲基睾酮
‑
D3标准中间液(即内标物标准中间液)，置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，浓度为200ng/mL，
‑
18℃避光保存；
[0022]3‑
4)准确移取0.1mL、0.25mL、0.5mL、1.0mL、2.5mL、5.0mL的甲基睾酮标准工作液，分别置于10mL的容量瓶中，并分别加入50μL内标物标准工作液，用30％乙腈水溶液稀释并定容，现配现用；得到浓度梯度为2μg/L、5μg/L、10μg/L、20μg本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法，其特征在于：其包括如下步骤：(1)、将水产品去头、骨、内脏，取可食部分分别绞碎混合均匀，得到预处理的水产品，并在
‑
18℃以下保存；(2)、将预处理的水产品置于离心管中，加入内标物标准工作液进行涡旋混合，接着加入乙酸乙酯，涡旋，超声，离心，取上清液转移至离心管中，并在氮气下吹干；最后加入乙腈水溶液振荡，得到待净化液；(3)、将中性氧化铝固相萃取柱用乙腈活化后，移入待净化液，将流出液过聚四氟乙烯滤膜后，至液相色谱
‑
串联质谱仪进行测定。2.根据权利要求1所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法，其特征在于：步骤(1)中，所述水产品包括鱼类、虾类、蟹类、贝类、牛蛙和甲鱼。3.根据权利要求1所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法，其特征在于：步骤(2)中，所述内标物标准工作液的制备过程为：将甲基睾酮
‑
D3标准中间液置于100mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，
‑
18℃避光保存。4.根据权利要求3所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法，其特征在于：所述甲基睾酮
‑
D3标准中间液的制备过程为：将甲基睾酮
‑
D3标准储备液置于10mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，混匀，
‑
18℃避光保存。5.根据权利要求4所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法，其特征在于：所述甲基睾酮
‑
D3标准储备液的制备过程为：将甲基睾酮
‑
D3溶于甲醇后至10mL容量瓶，用甲醇定容至刻度，混匀，于
‑
18℃避光保存。6.根据权利要求1所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法，其特征在于：步骤(2)中，所述超声的时间为10
‑
20min；所述离心的转速为4000
‑
8000r/min，离心的时间为2
‑
5min。7.根据权利要求1所述的水产品中甲基睾酮的液相色谱
‑
串联质谱测定方法，其特征在于：步骤(3)中，所述液相色谱
‑
串联质谱仪测定标准溶液中甲基睾酮的过程为：3
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1)甲基睾酮标准储备液及其内标物标准储备液的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：张璇，黄冬梅，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院东海水产研究所，
类型：发明
国别省市：