一种基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法技术

一种基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法，包括以下步骤：（1）样品称取；（2）甲醛溶液处理；（3）漂洗；（4）2

【技术实现步骤摘要】
一种基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法


[0001]本专利技术涉及艾绒鉴定领域，特别是一种基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法。

技术介绍

[0002]艾灸疗法历史悠久，应用广泛，艾灸疗法的主要材料为艾绒，艾绒是由艾叶加工而成。近年来，随着艾灸养生的普及，艾产业蓬勃发展，但对合格艾绒的性状认识却仍停留在古人描述水平。性状鉴别对于鉴别者专业技能和经验要求较高，即便是一般的从业人员也难以做到熟练掌握和准确鉴别。显微鉴别具有简便、准确的特点，然而，自1977版至2020版的中国药典艾叶的显微鉴别特征都未能完善和提高，其最大问题在于艾绒存在两种非腺毛：T形非腺毛和（顶细胞极长的）单列性非腺毛。在此情况下，有将劣质棉花、各种植物纤维甚至合成纤维等经过加工掺入艾绒，使艾绒质量受到影响，直接影响疗效。中国药典对灸用艾绒国家标准进行了分级，然而对于艾绒显微鉴定存在一定的问题，这无疑对艾绒的显微鉴定带来了困难。
[0003]根据研究显示，艾叶的非腺毛都为T形非腺毛，不存在现行2020版中国药典所述的单列性非腺毛；高精度艾绒的主要成分是顶细胞细长而弯曲的T形非腺毛，在加工成艾绒的过程中，随着反复的粉碎和过筛，T形非腺毛柄的完整性不断降低甚至脱落，然而，目前在艾绒显微鉴定方面，通常采用的是对艾绒水合氯醛透化后进行显微观察，艾绒中T形非腺毛大多相互缠结成乱团状，在普通光学显微镜下难以看清T形非腺毛柄的存在情况（图1）。
[0004]研究发现，用刀片从艾叶上刮下来的T形非腺毛特有的柄或脱落痕因有角质化现象，以及柄细胞中存在一些次生代谢产物，这些都能够自发荧光（图2），强度大大高于顶细胞的自发荧光，这对于鉴定艾绒的真伪有重要的价值。然而，目前艾绒显微鉴定均采用水合氯醛处理后才进行显微观察，由于水合氯醛的影响，导致即使使用荧光显微镜也无法看到这一荧光特征；另一方面，由于现在的艾绒一般采用机械加工，在反复粉碎的过程中，受高温的影响也使得T形非腺毛顶细胞和柄部的荧光依次消退，无法在荧光显微镜下清晰看到T形非腺毛的结构特征（图3）。因此如何对艾绒采用一定的方法进行处理后，恢复并增强其荧光特征，从而在荧光显微镜下能清晰看到艾绒特有的T形非腺毛的荧光显微特征，籍此来对艾绒的真伪做出鉴定有着非常重要的实用价值。

技术实现思路

[0005]针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法，可有效解决艾绒真假鉴定问题。
[0006]为实现上述目的，本专利技术解决的技术方案是，一种基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法，包括以下步骤：（1）样品称取：称取5—10mg的艾绒做样品；（2）甲醛溶液处理：在样品中加入体积浓度10%—20%的甲醛溶液3—5ml，室温下，
浸渍处理1
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2min；（3）漂洗：从甲醛溶液中取出艾绒，置入培养皿中，用蒸馏水漂洗10—20s；（4）2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理：将漂洗后的艾绒从培养皿中转入称量瓶中，在称量瓶中加入质量浓度0.5%—1%的 2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂3—5ml，室温下，浸渍处理1
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5min；（5）显微观察：取2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理后的艾绒3
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5mg，置于载玻片上展开，在艾绒上滴加体积浓度20%的甘油0.02
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0.05ml，盖上盖玻片，在荧光显微镜紫外光激发下观察，根据显微特征判断艾绒真伪，若观察到T形非腺毛有长度不等的柄或脱落痕，则为真艾绒，反之则为假艾绒。
[0007]本专利技术方法简单，操作方便，机械加工后的真艾绒在甲醛和2
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苯硼酸2
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氨基乙酯的作用下，顶细胞重新恢复了荧光，柄部细胞也得到了加强。可以清晰的看到艾绒中的T形非腺毛有长度不等的柄或脱落痕，而假艾绒则不存在T形非腺毛特有的柄或脱落痕。有效解决了艾绒真伪的鉴别，确保了治疗和疗效，经济和社会效益巨大。
附图说明
[0008]图1是为本专利技术普通显微镜明场下的艾绒显微图。
[0009]图2是为本专利技术艾叶刀片刮下来的T形非腺毛自发荧光显微图（紫外光激发）。
[0010]图3是为本专利技术机械加工后艾绒T形非腺毛显微图（荧光消退）。
[0011]图4是为本专利技术实验组中真艾绒经处理后T形非腺毛恢复荧光显微图。
[0012]图5是为本专利技术对照组中假艾绒样品1经处理后明场下观察显微图。
[0013]图6是为本专利技术对照组中假艾绒样品1经处理后紫外光下观察显微图（与图5同一视野）。
[0014]图7是为本专利技术对照组中假艾绒样品2经处理后明场下观察显微图。
[0015]图8是为本专利技术对照组中假艾绒样品2经处理后紫外光下观察显微图（与图7同一视野）。
具体实施方式
[0016]以下结合附图和实施例对本专利技术的具体实施方式作详细说明。
[0017]实施例1一种基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法，包括以下步骤：（1）样品称取：称取5mg的艾绒做样品；（2）甲醛溶液处理：在样品中加入体积浓度20%的甲醛溶液3ml，室温下，浸渍处理2min；（3）漂洗：从甲醛溶液中取出艾绒，置入培养皿中，用蒸馏水漂洗10s；（4）2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理：将漂洗后的艾绒从培养皿中转入称量瓶中，在称量瓶中加入质量浓度1%的 2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂3ml，室温下，浸渍处理5min；（5）显微观察：取2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理后的艾绒3mg，置于载玻片上展开，在艾绒上滴加体积浓度20%的甘油0.02ml，盖上盖玻片，在荧光显微镜紫外光激发下观察，根据显微特征判断艾绒真伪，若观察到T形非腺毛有长度不等的柄或脱落痕，则为真艾绒，
反之则为假艾绒。
[0018]实施例2一种基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法，包括以下步骤：（1）样品称取：称取10mg的艾绒做样品；（2）甲醛溶液处理：在样品中加入体积浓度10%的甲醛溶液5ml，室温下，浸渍处理1min；（3）漂洗：从甲醛溶液中取出艾绒，置入培养皿中，用蒸馏水漂洗20s；（4）2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理：将漂洗后的艾绒从培养皿中转入称量瓶中，在称量瓶中加入质量浓度0.5%的 2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂5ml，室温下，浸渍处理1min；（5）显微观察：取2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理后的艾绒5mg，置于载玻片上展开，在艾绒上滴加体积浓度20%的甘油0.05ml，盖上盖玻片，在荧光显微镜紫外光激发下观察，根据显微特征判断艾绒真伪，若观察到T形非腺毛有长度不等的柄或脱落痕，则为真艾绒，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品称取：称取5—10mg的艾绒做样品；（2）甲醛溶液处理：在样品中加入体积浓度10%—20%的甲醛溶液3—5ml，室温下，浸渍处理1
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2min；（3）漂洗：从甲醛溶液中取出艾绒，置入培养皿中，用蒸馏水漂洗10—20s；（4）2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理：将漂洗后的艾绒从培养皿中转入称量瓶中，在称量瓶中加入质量浓度0.5%—1%的 2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂3—5ml，室温下，浸渍处理1
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5min；（5）显微观察：取2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理后的艾绒3
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5mg，置于载玻片上展开，在艾绒上滴加体积浓度20%的甘油0.02
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0.05ml，盖上盖玻片，在荧光显微镜紫外光激发下观察，根据显微特征判断艾绒真伪，若观察到T形非腺毛有长度不等的柄或脱落痕，则为真艾绒，反之则为假艾绒。2.根据权利要求1所述的基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品称取：称取5mg的艾绒做样品；（2）甲醛溶液处理：在样品中加入体积浓度20%的甲醛溶液3ml，室温下，浸渍处理2min；（3）漂洗：从甲醛溶液中取出艾绒，置入培养皿中，用蒸馏水漂洗10s；（4）2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理：将漂洗后的艾绒从培养皿中转入称量瓶中，在称量瓶中加入质量浓度1%的 2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂3ml，室温下，浸渍处理5min；（5）显微观察：取2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理后的艾绒3mg，置于载玻片上展开，在艾绒上滴加体积浓度20%的甘油0.02ml，盖上盖玻片，在荧光显微镜紫外光激发下观察，根据显微特征判断艾绒真伪，若观察到T形非腺毛有长度不等的柄或脱落痕，则为真艾绒，反之则为假艾绒。3.根据权利要求1所述的基于非腺毛荧光显微特征的艾绒真伪鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）样品称取：称取10mg的艾绒做样品；（2）甲醛溶液处理：在样品中加入体积浓度10%的甲醛溶液5ml，室温下，浸渍处理1min；（3）漂洗：从甲醛溶液中取出艾绒，置入培养皿中，用蒸馏水漂洗20s；（4）2
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苯硼酸2
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氨基乙酯试剂处理：将...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘孟奇，高富，王小巧，刘春朝，郭涛，陈随清，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：