基于ExoⅠ和HCR反应的电化学核酸生物传感器及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种基于ExoⅠ和HCR反应的电化学核酸生物传感器及其制备方法，将外切核酸酶Ⅰ和HCR策略相结合，构建了一种针对KRAS基因的超灵敏、无标记的电化学核酸生物传感器。本发明专利技术利用DNA模板沉积的银纳米颗粒作为电活性标记，通过ExoⅠ辅助的背景电流抑制来实现高灵敏的固态Ag/AgCl反应。因此，在本发明专利技术中，我们通过HCR反应和DNA金属化，实现双重信号放大和靶扩增，引入ExoⅠ，减少背景信号，提高传感器检测性能。该策略对靶DNA检测具有较高的灵敏度，为基于DNA的分子诊断提供了一个通用的传感平台。台。台。

【技术实现步骤摘要】
基于Exo
ꢀⅠ
和HCR反应的电化学核酸生物传感器及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物传感器
，具体涉及一种基于Exo
ꢀⅠ
和HCR反应的电化学核酸生物传感器及其制备方法。

技术介绍

[0002]循环肿瘤DNA(Circulating Tumor DNA,ctDNA)是指来源于肿瘤基因组，游离在人体血液循环系统中的DNA片段。ctDNA是肿瘤在血液中的“密码”，其含有肿瘤特异性基因改变(单核苷酸变多态性、拷贝数改变、微卫星改变、DNA甲基化变异、杂合性缺失等)，保证了其作为肿瘤生物标志物的特异性。因此ctDNA的研究对临床上肿瘤的早期诊断、恶性程度分析、识别耐药突变、动态监测具有重要意义。而且，ctDNA的分析对治疗反应评价、复发预测和微小残留疾病的监测也起着重要作用。KRAS基因突变是ctDNA最常见的分子特异性检测之一，与非小细胞肺癌、结直肠癌和胰腺癌等恶性肿瘤的发生发展密切相关。目前KRAS基因检测已逐步成为恶性肿瘤常规检测项目，正发展成为癌症检测和临床治疗检测技术。<br/>[0003]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一个基于Exo
ꢀⅠ
和HCR反应的电化学核酸生物传感器的制备方法，其特征在于，在HCR反应中滴加Exo
ꢀⅠ
溶液，用于酶切掉未与靶标结合的捕获探针。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将巯基化的捕获探针、MCH溶液、靶标溶液、Exo
ꢀⅠ
溶液、启动子溶液、含有发夹H1和H2的溶液依次滴加于修饰后的金电极表面。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，巯基化的捕获探针的序列为：5
’‑
HS
‑
(CH2)6C TAC GCC ACT
‑3’
；靶标的序列为：5
’‑
GTT GGA GCT AGT GGC GTA G
‑3’
；启动子的序列为：5
’‑
AGC TCC AAC AGT CTA GGA TTC GGC GTG GGT TAA
‑3’
；发夹H1的序列为：5
’‑
CAA AGT AGT CTA GGA TTC GGC GTG TTA ACC CAC GCC GAATCC TAG ACT
‑3’
；发夹H2的序列为：5
’‑
CAC GCC GAA TCC TAG ACT ACT TTG AGT CTA GGA TTC GGC GTG GGT TAA
‑3’
。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，启动子序列设计成两部分，一部分与捕获的靶标序列相配对结合，另一部分充当启动子的作用引发两个发夹探针之间的交替...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴丽，蔡爱婷，刘金霞，杨露霞，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：