一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒制造技术

本发明专利技术一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒由如下成分组成：包被有第一位点抑制素A抗体的磁微粒混悬液、校准品、酶标第二位点的抑制素A抗体的酶结合物、第一缓冲液、第二缓冲液、发光底物、浓缩洗液。本发明专利技术利用包被有抑制素A抗体的磁微粒混悬液和酶标第二位点的抑制素A抗体的酶结合物分别与样本中抑制素A抗原上的两个抗原决定簇结合，形成固相抗体

【技术实现步骤摘要】
一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种免疫检测领域，特别是涉及一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒。

技术介绍

[0002]抑制素A(inhibin
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A)：抑制素是一个异二聚体的糖蛋白。β
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亚单位与一个βA
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亚单位组成抑制素A。血液中以无生物活性的游离亚单位存在。妊娠时母体血清中的大量抑制素被认为来源于胎盘的合体滋养层。抑制素A在孕10～12周时增加并达到高峰，在妊娠中期下降成一个平台，但到妊娠晚期时再一次升高，足月时达最高水平。抑制素A同hCG一样在并发唐氏综合征时升高。抑制素在母体的血清浓度不依赖于hCG的浓度而变化。Noble等发现在12.8％的唐氏综合征胎儿母体血清中的抑制素A>95百分位数。而Wald等测定了77例唐氏综合征胎儿早孕时母体血清的抑制素A为1.19MoM，因此，检测血浆中的抑制素A的含量对诊断唐氏综合征也有所帮助。
[0003]目前，对于人抑制素A，检测试剂盒主要采用时间分辨荧光法，其缺点主要是检测时间长。磁微粒化学发光法是以化学发光法平台发展起来的新型检测方法，此方法是将磁性分离技术、化学发光技术、免疫分析技术三者结合起来的一种新兴分析方法，该技术充分利用了磁性分离技术的快速易自动化性，化学发光技术的高灵敏度性，以及免疫分析的特异性，在生物分析领域有较大的应用前景，但是在磁性分离技术中制作酶标抗体时为了保证酶的活性，需要实验全程在4℃的环境下进行，使实验对于环境要求度很高，操作不慎就影响了酶的活性，从而影响了抑制素A检测的准确性，在一部分步骤中需要将试剂在在大于35℃的环境下进行长时间的水浴反应，这种操作方法也也会降低酶的活性，使酶不稳定，从而影响发光值。
[0004]因此，目前亟需一种方便操作人员检测的、提高检测准确率的一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题是提供一种方便操作人员检测的、提高检测准确率的一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒。
[0006]本专利技术一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒，包括包被有第一位点抑制素A抗体的磁微粒混悬液10
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30μL、酶标第二位点的抑制素A抗体的酶结合物10
‑
300μL、校准品10
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100μL、第一缓冲液10
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1000μL、第二缓冲液10
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1000μL、发光底物10
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150μL、浓缩洗液10
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2000μL。
[0007]本专利技术一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒，其中所述包被有第一位点的抑制素A抗体的磁微粒混悬液25μL、酶标第二位点的抑制素A抗体的酶结合物150μL、校准品50μL、第一缓冲液500μL、第二缓冲液800μL、发光底物130μL、浓缩洗液1000μL。
[0008]本专利技术一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒，其中所述第一缓冲液的制备方法
为：
[0009]S1、取8.0g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4、0.25g Ba(OH)2溶于800mL蒸馏水中；
[0010]S1.1，用PH值为5.5的HCl溶液调节溶液的PH值直至7.7；
[0011]S1.2，最后加蒸馏水定容至1L即可得第一缓冲液。
[0012]本专利技术一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒，其中所述酶标第二位点的抑制素A抗体的酶结合物的制备方法为：
[0013]S2、称取1.5mg辣根过氧化物酶溶解于1ml、1mM pH5.6的醋酸盐缓冲液中，加入同时10μL C
102
H
151
O
39
N
31
、10μL MgSO4、20μL C5HO2NS静置20min过滤沉淀，再加入1％DNFB无水乙醇溶液0.1ml，室温下轻微搅拌1h得第一溶液；
[0014]S2.1、将第一溶液中加入0.2ml新配的0.1mol/L的NaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟，再加入抑制素A抗体80μL和第二缓冲液调节溶液的pH值至9.0并静置12h，再加入2.5％乙二醇1ml，室温下轻微搅拌1h，终止反应得第二溶液；
[0015]S2.2、在第二溶液中加入硼氢化钠溶液0.1ml，混匀，常温状态下放置3h得第三溶液；
[0016]S2.3、将第三溶液中用第一缓冲液透析12h，期间每4小时更换一次第一缓冲液得第四溶液；
[0017]S2.4、将第四溶液在3000r/min的速度下离心30min，过滤沉淀物得第五溶液；
[0018]S2.5、在第五溶液中收集上层清液加入第二位点的抑制素A抗体，制成酶标第二位点的抑制素A的酶结合物。
[0019]本专利技术一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒的检测方法，其中包括如下步骤：
[0020]S3、取50μL的血浆于第一试管中，并摇晃均匀后在离心机中3000r/min离心30min后取上层清液，在上层清液中添加200μL的第一缓冲液、20μL包被有抑制素A抗体的磁微粒混悬液，在常温环境下摇晃30s后静置20min，再用浓缩洗液充分洗涤，得第一混合液；
[0021]S3.1、向第一混合液中加入150μL酶标第二位点的抑制素A抗体的酶结合物搅拌30s后静置15min，再用浓缩洗液充分洗涤，得第三混合液；
[0022]S3.2、向第三混合液中加入150μL的发光底物，避光1分钟内测发光值，通过发光值拟合出血浆中的抑制素A的浓度。
[0023]本专利技术一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒的检测方法，其中所述“通过发光值拟合出血浆中的抑制素A的浓度”的步骤为：
[0024]S4、以牛血清白蛋白和第一缓冲液为溶剂，配制抑制素A抗原浓度分别为0、25、100、500、1000、2000pg/ml的系列梯度校准品；
[0025]S4.1、将抑制素A校准品浓度值与第三混合液中的发光值用LOG
‑
LOG_B数学模型进行拟合。
[0026]本专利技术一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒与现有技术不同之处在于本专利技术一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒中使用了机械强度高，表面易功能化的磁性聚苯乙烯微球能够很好的交联抑制素A抗体，再利用包被有抑制素A抗体的磁微粒混悬液和酶标第二位点的抑制素A抗体的酶结合物分别与样本中抑制素A抗原上的两个抗原决定簇结合，形成固相抗体
‑
抗原
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酶标抗体的免疫复合物，由于反应系统中的抑制素A抗体和酶标第二位点
的抑制素A抗体的酶结合物相比于待测的抑制素A抗原是过量的，因此复合物的形成量与抑制素A抗原的含量成正比，再加入发光底物，显色后根据校准品标准曲线回算即可确定血浆内抑制素A抗原含量。由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒，其特征在于由如下成分组成：包被有第一位点抑制素A抗体的磁微粒混悬液10
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30μL、酶标第二位点的抑制素A抗体的酶结合物10
‑
300μL、校准品10
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100μL、第一缓冲液10
‑
1000μL、第二缓冲液10
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1000μL、发光底物10
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150μL、浓缩洗液10
‑
2000μL。2.根据权利要求1所述的一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒，其特征在于由如下成分组成：所述包被有第一位点的抑制素A抗体的磁微粒混悬液25μL、酶标第二位点的抑制素A抗体的酶结合物150μL、校准品50μL、第一缓冲液500μL、第二缓冲液800μL、发光底物130μL、浓缩洗液1000μL。3.根据权利要求2所述的一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒，其特征在于，所述第一缓冲液的制备方法为：S1、取8.0g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4、0.24g KH2PO4、0.25g Ba(OH)2溶于800mL蒸馏水中；S1.1，用PH值为5.5的HCl溶液调节溶液的PH值直至7.7；S1.2，最后加蒸馏水定容至1L即可得第一缓冲液。4.根据权利要求2所述的一种检测血浆中抑制素A含量的试剂盒，其特征在于：所述酶标第二位点的抑制素A抗体的酶结合物的制备方法为：(配比与步骤参考了链接2)S2、称取1.5mg辣根过氧化物酶溶解于1ml、1mM pH5.6的醋酸盐缓冲液中，加入同时10μL C
102
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151
O
39
N
31
、10μL MgSO4、20μL C5HO2NS静置20min过滤沉淀，再加入1％DNFB无水乙醇溶液0.1ml，室温下轻微...

【专利技术属性】
技术研发人员：司国权，王柯，唐凡程，
申请(专利权)人：深圳盛源生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：