黄精中抗高尿酸活性成分的筛选及其应用制造技术

本发明专利技术公开了从黄精中筛选到具有较高活性的抗高尿酸活性成分及其应用，首次在黄精中采用基于黄嘌呤氧化酶

【技术实现步骤摘要】
黄精中抗高尿酸活性成分的筛选及其应用


[0001]本专利技术属于天然产物活性成分筛选及应用领域，具体涉及黄精中抗高尿酸活性成分的筛选及其应用。

技术介绍

[0002]据《中国药典》记载黄精为百合科(Liliaceae)黄精属(Polygonatum)的多年生草本植物，在我国分布广泛，是我国著名的药食同源材料。传统中医学认为黄精具有补气养阴、健脾、润肺、益肾等功效；现代药理学研究表明，黄精具有抗高尿酸、降血糖、降血脂、提高免疫力和抗炎等作用。黄精主要含有黄精多糖、皂苷类、黄酮类、苯丙素类及生物碱类等化学成分，在健康保健领域作用突出。目前，黄精药理活性多集中于降糖降脂、提高免疫力等方面，活性成分研究多集中在黄精多糖。而对于黄精抗高尿酸活性研究较少，关于黄精中抗高尿酸的具体活性成分，尚未见报道。
[0003]高尿酸血症(Hyperuricemia，HUA)已经成为继“三高”后的第四高，它是指血液中尿酸浓度过高，细胞外液的尿酸盐呈超饱和状态的一种疾病。高尿酸血症是引发痛风的重要生化基础，与心血管疾病、慢性肾脏病及代谢综合征(如糖尿病、胰岛素抵抗、肥胖等)密切相关，是一种严重影响公共健康的疾病。随着人们生活水平的提高、生活习惯和饮食结构的改变，高尿酸血症的患病率在世界范围内呈上升趋势，在国内，高尿酸血症发病率亦逐年升高。加强对高尿酸的管理，将这类疾病及其并发症的风险降到最低是非常必要的。其中，黄嘌呤氧化酶是尿酸生成过程中的关键靶点，而高水平的黄嘌呤氧化酶可能会引起高尿酸血症或痛风。鉴于此，基于关键靶酶—黄嘌呤氧化酶从药食同源材料黄精中筛选出天然抗高尿酸的活性成分及其活性成分的进一步发展应用是极具前景的。
[0004]目前，虽然已有一些研究表明黄精具有抗高尿酸的作用，但公开的内容中没有对黄精中抗高尿酸相关成分的报道，表明黄精在抗高尿酸活性方面尚未得到充分的开发利用。其次，现有的传统技术手段，相关活性成分的发现需要通过分离、纯化、结构鉴定和活性验证等复杂步骤，耗时耗力。因此，需要更准确、高效的技术手段对传统中药中天然抗高尿酸活性化合物进行筛选。当前，主要的筛选方法包括基于分子识别技术的筛选、基于代谢组学方法的筛选、基于计算机模拟技术的筛选等。其中基于分子识别技术的筛选策略快速简单，专属性强。黄精已公开的内容中没有对其活性成分筛选新技术应用的报道，依旧采用传统的单体分离及活性验证。本专利技术提供了基于分子识别技术的筛选方法，即基于特定生物活性的关键靶标进行活性成分筛选，从黄精中首次筛选到四个较高活性的生物碱类抗高尿酸活性成分，可用于制备抗高尿酸血症或抗痛风的药物和保健食品，有利于黄精的进一步开发利用。

技术实现思路

[0005]针对上述的研究空白及现有技术中的缺点，为探究黄精中抗高尿酸的活性成分。本专利技术提供了黄精中抗高尿酸活性成分及其筛选方法，首次在黄精中利用基于黄嘌呤氧化
酶
‑
活性小分子配体相互作用的亲和超滤技术，识别和筛选出黄嘌呤氧化酶的活性配体。从黄精中首次筛选出四个较高活性的生物碱类抗高尿酸活性成分，可用于制备抗高尿酸血症或抗痛风的药物和保健食品。
[0006]为解决上述问题，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0007]化合物在制备抗高尿酸血症或抗痛风的药物和保健品中的应用：所述的化合物为N
‑
cis
‑
p
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coumaroyloctopamine(N
‑
顺式
‑
对香豆酰基去甲辛弗林)、N
‑
cis
‑
feruloyloctopamine(N
‑
顺式
‑
阿魏酰真蛸胺)、N
‑
cis
‑
p
‑
coumaroyltyramine(N
‑
顺式
‑
对香豆酰基酪胺)、N
‑
cis
‑
feruloyltyramine(N
‑
顺式
‑
阿魏酰基酪胺)，结构式如图3所示。
[0008]一种黄精中抗高尿酸活性化合物的筛选方法，包括以下步骤：
[0009](1)将黄精提取物溶液和黄嘌呤氧化酶溶液恒温孵育，孵育后的溶液超滤离心，用缓冲溶液洗脱下未与黄嘌呤氧化酶特异性结合的黄精成分，离心后将保留在超滤膜的黄精成分进行解离，收集解离液，吹干后复溶，得到实验组溶液；同时将失活的黄嘌呤氧化酶溶液作为对照组，与实验组相同方法处理后得到对照组溶液；
[0010](2)取上述黄精提取物溶液、实验组溶液、对照组溶液进行液相色谱
‑
质谱分析，采集出峰数据；
[0011](3)根据实验组和对照组溶液中不同化合物的液相色谱峰的峰面积变化，计算得到黄精提取物中不同化合物与黄嘌呤氧化酶的结合度，筛选出黄精中抗高尿酸的活性化合物，所述结合度计算公式如下：
[0012]BD(％)＝(A
实验
‑
A
对照
)/A
实验
×
100
[0013]BD是黄嘌呤氧化酶与黄精提取物中活性化合物的结合度，A
实验
为实验组溶液中黄精提取物与黄嘌呤氧化酶相互作用后色谱峰的峰面积，A
对照
为对照组溶液中黄精提取物与失活的黄嘌呤氧化酶相互作用后色谱峰的峰面积。
[0014]进一步地，所述步骤(1)中，恒温孵育温度为37℃，孵育时间为20～60min。
[0015]进一步地，所述步骤(1)中，选用甲醇
‑
水溶液(9:1，v/v)对保留在超滤膜的黄精成分进行解离。
[0016]进一步地，所述步骤(1)中，酶溶液的浓度0.1～0.2U/μL，黄精提取物的浓度为5.0～10.0mg/mL。
[0017]本专利技术的优点和有益效果是：
[0018]1.本专利技术首次在黄精中利用基于黄嘌呤氧化酶
‑
活性小分子配体相互作用的亲和超滤方法，高效识别和筛选出与黄嘌呤氧化酶特异性结合的抗高尿酸活性成分。
[0019]2.本专利技术首次在黄精中筛选出四个较高活性的抗高尿酸活性成分，具体包括N
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cis
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p
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coumaroyloctopamine(N
‑
顺式
‑
对香豆酰基去甲辛弗林)、N
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cis
‑
feruloyloctopamine(N
‑
顺式
‑
阿魏酰真蛸胺)、N
‑
cis
‑
p
‑
coumaroyltyramine(N
‑
顺式
‑
对香豆酰基酪胺)、N
‑
cis
‑
feruloyltyramine(N
‑
顺式
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.黄精中四个生物碱类活性化合物在制备抗高尿酸血症或抗痛风药物和保健食品中的应用，其特征在于，所述化合物为N
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cis
‑
p
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coumaroyloctopamine、N
‑
cis
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feruloyloctopamine、N
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cis
‑
p
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coumaroyltyramine、N
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cis
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feruloyltyramine。2.一种黄精中抗高尿酸活性化合物的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将黄精提取物溶液和黄嘌呤氧化酶溶液恒温孵育，孵育后的溶液超滤离心，用缓冲溶液洗脱下未与黄嘌呤氧化酶特异性结合的黄精成分，离心后将保留在超滤膜的黄精成分进行解离，收集解离液，吹干后复溶，得到实验组溶液；同时将失活的黄嘌呤氧化酶溶液作为对照组，与实验组相同方法处理后得到对照组溶液；(2)取上述黄精提取物溶液、实验组溶液、对照组溶液进行液相色谱
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【专利技术属性】
技术研发人员：郭明全，李静，范民霞，
申请(专利权)人：中国科学院武汉植物园，
类型：发明
国别省市：