一种液质联用测定人血浆中羟丙基β环糊精含量的分析方法技术

本发明专利技术提出了一种液质联用测定人血浆中羟丙基β环糊精含量的分析方法，包括以下步骤：制备工作溶液；样品前处理；采用液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种液质联用测定人血浆中羟丙基
β
环糊精含量的分析方法


[0001]本专利技术属于G01N30/02
，更具体的涉及一种液质联用测定人血浆中羟丙基β环糊精含量的分析方法。

技术介绍

[0002]羟丙基β环糊精易溶于水，且具有优异的包合作用，在医药领域可以作为静脉输送药物的增溶剂、促流动剂、药物稳定剂、靶向给药剂等，得到了广泛的研究。现有技术中，对于药物中羟丙基β环糊精的含量已有研究。
[0003]例如中国专利CN113671061A中公开了测定丁苯酞氯化钠注射液中羟丙基被他环糊精含量的方法，采用液相色谱法进行检测，检测过程简单、快速，检测结果准确可靠。中国专利CN101685083B中公开了一种液质联用测定羟丙基β环糊精的测试方法，可以用来检测冻干型多西他赛制剂或尿液中的羟丙基β环糊精的含量。
[0004]然而，羟丙基β环糊精在血液中需要通过肾脏的代谢作用排出体外，长期且大量的羟丙基β环糊精积累在血液中可能会导致溶血等现象的发生，对人体产生危害。而现有文献中对于血浆中或血液中羟丙基β环糊精的含量的分析研究和报道较少。本申请基于此，提出了一种液质联用测定人血浆中羟丙基β环糊精含量的分析方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术提出了一种液质联用测定人血浆中羟丙基β环糊精含量的分析方法，包括以下步骤：
[0006](1)制备羟丙基β环糊精工作溶液；
[0007](2)样品前处理；
[0008](3)采用液相色谱
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质谱联用方法进行检测；
[0009]所述样品为空白血浆。
[0010]在一种优选的实施方式中，所述空白血浆是抗凝剂为K2EDTA的空白人血浆。在本申请中，人血浆采集于身体健康的志愿者，志愿者为年龄18岁及以上的健康志愿者，男女不限；男性健康志愿者体重不低于50公斤或女性健康志愿者体重不低于45公斤，体重指数(BMI)：≧19kg/m2且≤30kg/m2；健康志愿者(包括男性健康志愿者)愿意未来2个月内无妊娠计划且自愿采取有效避孕措施；健康志愿者自愿参加试验，并签署了书面的知情同意书。
[0011]在一种优选的实施方式中，所述步骤(1)中工作溶液包括羟丙基β环糊精储备溶液、内标物储备溶液、标准曲线工作溶液、质控样品工作溶液、内标物工作溶液、标准曲线样品溶液、质控样品溶液、定量限样品溶液、沉淀剂。
[0012]在一种优选的实施方式中，所述内标物储备溶液为酸枣仁皂苷B储备溶液。
[0013]在一种优选的实施方式中，所述羟丙基β环糊精储备溶液、内标物储备溶液、标准曲线工作溶液、质控样品工作溶液、内标物工作溶液均用超纯水稀释配置。
[0014]在一种优选的实施方式中，所述质控样品工作溶液用来检测包括萃取回收率、基
质效应、基质稳定性、准确度、精密度。
[0015]在本申请中，质控样品工作溶液根据工作溶液中质控样品的浓度，分成低浓度质控样品工作溶液、中浓度质控样品工作溶液、高浓度质控样品工作溶液，所述低浓度质控样品工作溶液、中浓度质控样品工作溶液、高浓度质控样品工作溶液中质控样品浓度的比值为3:25:40。
[0016]在一种优选的实施方式中，所述质控样品工作溶液还用来检测溶液稳定性、溶血效应、高脂血效应、全血稳定性。
[0017]在本申请中，检测的是人血液中或者是人血浆中羟丙基β环糊精的含量，而血液中的红细胞、存在的胆固醇、微量元素、蛋白质等物质在血液采集及进行检测分析的过程中会对分析结果造成影响。
[0018]在一种优选的实施方式中，所述标准曲线样品溶液由空白血浆和标准曲线工作溶液混匀形成，所述标准曲线样品溶液中空白血浆和标准曲线工作溶液的体积比为19:1。
[0019]在一种优选的实施方式中，所述样品前处理的具体方法如下：
[0020]S01取96孔板加入样品，再加入内标工作溶液和沉淀剂，振荡；
[0021]S02 4℃下离心，将离心后的上清液取出，加入新的96孔板中；
[0022]S03氮气吹干，加入体积浓度20％的甲醇水溶液复溶，振荡；
[0023]S04上机检测。
[0024]在一种优选的实施方式中，所述样品为标准曲线样品溶液，所述沉淀剂为甲醇。
[0025]申请人在实验过程中发现，先把空白血浆、羟丙基
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环糊精的标准曲线工作液等溶液混合均匀后，再进行样品的前处理，可以降低前处理过程中待测物质(羟丙基
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环糊精)的损失，降低血浆样品中羟丙基
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环糊精含量的检测下限，提高最终检测结果的灵敏度、准确度。申请人推测可能的原因是，羟丙基
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环糊精作为包合材料，容易与血浆中的物质如蛋白质等结合或包合，在经过蛋白沉淀的前处理过程中，会降低血浆中原有羟丙基
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环糊精的含量，造成最终羟丙基
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环糊精检测含量的降低，影响检测结果的灵敏度、准确度；而若先在前处理之前，在空白血浆中加入羟丙基
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环糊精的标准曲线工作液等溶液，再进行样品的前处理，可以避免空白血浆因自身的蛋白沉淀造成的羟丙基
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环糊精实际检测结果过低的现象，降低血浆样品中羟丙基
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环糊精含量的检测下限，避免出现样品中检测不出羟丙基
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环糊精的现象，提高检测结果的灵敏度、准确度。
[0026]在一种优选的实施方式中，所述沉淀剂的加入量与样品的加入量的体积比为(15
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20)：1。
[0027]在一种优选的实施方式中，所述液相色谱的色谱条件如下：流动相A选自甲酸纯水溶液、乙腈纯水溶液、乙酸纯水溶液、纯化水中的至少一种；流动相B选自甲酸
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甲醇溶液、甲醇纯水溶液、甲醇溶液、纯化水中的至少一种。
[0028]在一种优选的实施方式中，所述流动相A为甲酸纯水溶液，甲酸纯水溶液中甲酸含量为0.1％(v/v)；所述流动相B为甲酸
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甲醇溶液，甲酸
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甲醇溶液中甲酸含量为0.1％(v/v)。
[0029]在一种优选的实施方式中，所述液相色谱的洗脱条件如下：
[0030]0.00min，流量0.3mL/min，流动相A与流动相B的体积比19:1；
[0031]0.60min，流量0.3mL/min，流动相A与流动相B的体积比19:1；
[0032]0.61min，流量0.3mL/min，流动相A与流动相B的体积比1:4；
[0033]2.00min，流量0.3mL/min，流动相A与流动相B的体积比1:4；
[0034]2.01min，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种液质联用测定人血浆中羟丙基β环糊精含量的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)制备工作溶液；(2)样品前处理；(3)采用液相色谱
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质谱联用方法进行检测；所述样品为空白血浆。2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述步骤(1)中工作溶液包括羟丙基β环糊精储备溶液、内标物储备溶液、标准曲线工作溶液、质控样品工作溶液、内标物工作溶液、标准曲线样品溶液、质控样品溶液、定量限样品溶液、沉淀剂。3.根据权利要求2所述的分析方法，其特征在于，所述内标物储备溶液为酸枣仁皂苷B储备溶液。4.根据权利要求2所述的分析方法，其特征在于，所述质控样品工作溶液用来检测包括萃取回收率、基质效应、基质稳定性、准确度、精密度。5.根据权利要求2所述的分析方法，其特征在于，所述标准曲线样品溶液由空白血浆和标准曲线工作溶液混匀形成，所述标准曲线样品溶液中空白血浆和标准曲线工作溶液的体积比为19:1。6.根据权利要求2所述的分析方法，其特征在于，所述样品前处理的具体方法如下：S01取96孔板加入样品，再加入内标工作溶液和沉淀剂，振荡；S02 4℃下离心，将离心后的上清液取出，加入新的96孔板中；S03氮气吹干，加入体积浓度20％...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵磊，向志雄，胡聪，秦秋明，
申请(专利权)人：上海微谱医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：