一种蜱虫保存液及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种蜱虫保存液及其制备方法和应用，属于生物体保存试剂技术领域。本发明专利技术提供的蜱虫保存液包含适宜量的氧钒核糖核苷复合物、青霉素、链霉素、磷酸盐、氯化钠、十二烷基硫酸钠、对羟基苯甲酸异丁酯、卵清蛋白等成分，在常温条件下即能够有效保护蜱虫虫体的完整性，以及蜱虫虫体可能携带的病原微生物的核酸稳定性，因此有利于蜱虫种类的鉴定，以及蜱虫虫体可能携带的病原微生物的鉴定。蜱虫虫体可能携带的病原微生物的鉴定。

【技术实现步骤摘要】
一种蜱虫保存液及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物体保存试剂
，具体涉及一种蜱虫保存液及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]采集蜱虫的主要目的之一是掌握当地蜱虫的分布状况，了解蜱虫的种类、数量、分布特征等；另一方面，可对蜱虫体内可能携带的病原种类进行分离鉴定，以分析可能存在的自然疫源地分布及特征，推测可能对当地人群健康产生的不利影响，并提供预防控制方案及措施。因此采集的蜱虫的个体的完整性及其可能携带的病原微生物的核酸完整性非常重要。
[0003]目前，采集蜱虫后主要的保存方式是液氮快速冻存和样本管(空的)密封保存，但这些保存方式均存在较多不足，例如：蜱虫采集基本上是在比较偏远的地区，液氮运输、保存比较困难，而且具有一定的危险性；液氮挥发比较快、在野外补充比较困难，对样本长期保存产生不利影响；蜱虫经液氮冻存，解冻后，很容易造成蜱虫盾板、假头基、口下板及须肢等部位的损坏、缺失，会对蜱虫的分类鉴定以及可能携带的病原种类的鉴定等造成影响；样本管密封保存的蜱虫样本，在保持一定的湿度条件下，蜱虫生存时间比较长，但在长时间运输过程中，由于颠簸或内环境的变化，可能会造成蜱虫死亡、腐败，导致肢体脱落、不完整，甚至可能会导致蜱虫携带的病原微生物核酸的降解等，不仅不利于蜱虫种类的鉴定，同时对蜱虫携带的病原微生物的鉴定也带来困难。因此为了便于对蜱虫进行分类鉴定以及对其可能携带的病原微生物种类进行检测鉴定，有需要开发一种可同时有效保存蜱虫虫体及其可能携带的病原微生物的保存液，然而现有技术中还未有此类保存液的报道。

技术实现思路

[0004]针对现有技术中存在的问题的一个或多个，本专利技术的一个方面提供一种蜱虫保存液，其包含以下浓度(在保存液中的终浓度)的成分：
[0005][0006][0007]在一些实施方式中，所述蜱虫保存液的pH值为7.2
‑
7.6。
[0008]本专利技术另一方面提供一种用于制备蜱虫保存液的组合物，包含以下成分：
[0009][0010]本专利技术再一方面提供一种蜱虫保存液的制备方法，其包括：按照各成分的浓度将所需量的氧钒核糖核苷复合物、青霉素、链霉素、卵清蛋白、十二烷基硫酸钠、对羟基苯甲酸异丁酯、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氯化钠溶解于纯水中，并定容，得到所述蜱虫保存液。
[0011]在一些实施方式中，在蜱虫保存液的制备方法中，在将各成分溶于纯水中后，还包括将获得的溶液的pH值调节为7.2
‑
7.6的步骤。
[0012]在一些实施方式中，在蜱虫保存液的制备方法中，在定容后，还包括对定容后的溶液进行过滤的步骤；优选地，采用0.22μm滤膜对所述定容后的溶液进行过滤。
[0013]本专利技术另一方面还提供一种生物样本(例如蜱虫)的保存和运输方法，其包括将采集的生物样本置于盛放有上述的蜱虫保存液或由上述的组合物制备的保存液的塑料管中并加盖封存后保存和/或运输。
[0014]在一些实施方式中，在常温条件下，所述生物样本在所述盛放有保存液的塑料管中的保存时间长达10天以上，优选长达20天以上，更有选长达30天以上。
[0015]本专利技术再一方面还提供一种对野外采集的蜱虫和/或其携带的病原微生物进行鉴定的方法，其包括以下步骤：
[0016]1)将野外采集的蜱虫置于盛放有上述的蜱虫保存液或由上述的组合物制备的保存液的塑料管中并加盖封存后，保存并运输至检验实验室；
[0017]2)在检验实验室中将蜱虫从塑料管中取出，以对所述蜱虫和/或其携带的病原微生物进行鉴定。
[0018]在一些实施方式中，所述病原微生物包括立克次体、无形体、蜱传脑炎病毒、西尼罗病毒、乙型脑炎病毒、大别山病毒、或其组合。
[0019]基于以上技术方案提供的蜱虫保存液包含适宜量的氧钒核糖核苷复合物、青霉素、链霉素、磷酸盐、氯化钠、十二烷基硫酸钠(SDS)、对羟基苯甲酸异丁酯、卵清蛋白(OVA) 等成分，其中氧钒核糖核苷复合物、SDS作为核酸酶抑制剂，可以防止蜱虫体内可能携带的病原微生物核酸的降解；磷酸盐作为缓冲液，可以保持保存液的pH值稳定，并防止蜱虫体内可能携带的病原的低渗膨胀或高渗皱缩死亡；对羟基苯甲酸异丁酯作为防腐剂，可以防止蜱虫样本的腐蚀、变质等；卵清蛋白(OVA)作为蛋白保存剂，可以防止蜱虫虫体和病原微生物结构的破坏；青霉素、链霉素作为抑菌剂，可以防止病原菌或杂菌的生长。以上多种成分共同作用，从而实现对蜱虫虫体及其可能携带的病原微生物的良好保存效果，能够保证采
集的蜱虫虫体的完整，而且可以长期保存，并可有效保证蜱虫虫体可能携带的病原微生物的核酸稳定性，因此有利于后续的蜱虫种类鉴定、蜱虫虫体可能携带的病原微生物的鉴定，而且可以采用常温方式保存和运输样本，节约成本。
具体实施方式
[0020]本专利技术旨在提供一种能够对蜱虫虫体及其可能携带的病原微生物提供良好保存效果的保存液，并提供了该保存液的制备方法及其使用方法。
[0021]通过以下具体实施例详细说明本专利技术。
[0022]实施例中描述到的各种生物材料的取得途径仅是提供一种实验获取的途径以达到具体公开的目的，不应成为对本专利技术生物材料来源的限制。事实上，所用到的生物材料的来源是广泛的，任何不违反法律和道德伦理能够获取的生物材料都可以按照实施例中的提示替换使用。
[0023]实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，实施例将有助于理解本专利技术，但不应作为对本
技术实现思路
的限制。
[0024]实施例1：蜱虫保存液的制备
[0025]专利技术人基于对蜱虫虫体及其体内和/或体外可能携带的病原微生物的深入研究，确定了保存液中几种重要功能成分，包括：
[0026]核酸酶抑制剂：用于防止蜱虫体内可能携带的病原微生物核酸的降解；
[0027]防腐剂：用于防止蜱虫样本的腐蚀、变质；
[0028]蛋白保存剂：用于防止蜱虫虫体和病原微生物结构的破坏；
[0029]抑菌剂：用于防止病原菌或杂菌的生长；
[0030]稳定剂：用于保持pH值稳定，以及防止蜱虫体内可能携带的病原的低渗膨胀或高渗皱缩死亡。
[0031]基于以上考虑，专利技术人综合各功能成分之间的协调与组配可能性，制备了众多配方的保存液，并从中确定出适宜的蜱虫保存液配方。下表1示出了其中部分配方(配方1
‑
7)的保存液。表1保存液的制备过程如下：
[0032]1)按照下表1所述的配方中的成分准确称取所需量的氧钒核糖核苷复合物(Sigma
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Aldrich)、青霉素、链霉素、卵清蛋白、十二烷基硫酸钠、对羟基苯甲酸异丁酯、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、异硫氰酸胍、牛血清白蛋白、山梨酸钾，溶于800ml纯水中，充分混匀；
[0033]2)用NaOH(0.01M)或稀HCl调整步骤1)所得溶液的pH值为7.4；
[0034]3)将步骤2)已调节pH值的溶液加入1000ml本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蜱虫保存液，其包含以下浓度(在保存液中的终浓度)的成分：2.根据权利要求1所述的蜱虫保存液，其pH值为7.2
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7.6。3.一种用于制备蜱虫保存液的组合物，包含以下成分：4.权利要求1或2所述的蜱虫保存液的制备方法，其包括：按照各成分的浓度将所需量的氧钒核糖核苷复合物、青霉素、链霉素、卵清蛋白、十二烷基硫酸钠、对羟基苯甲酸异丁酯、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠和氯化钠溶解于纯水中，并定容，得到所述蜱虫保存液。5.根据权利要求4所述的制备方法，其在将各成分溶于纯水中后，还包括将获得的溶液的pH值调节为7.2
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7.6的步骤。6.根据权利要求4或5所述的制备方法，其在定容后，还包括对定容后的溶液进行过滤的步骤；优选地，采用0.22μm滤膜对所述定容后的溶液进行过滤。7.一种生物样本的保存和运输方法，其包括将采集的生物样本置于盛放有权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：任立松，郑金来，潘毅平，李天增，李龙凯，王志强，安洪勇，李伟，刘冬冬，郑敏，张卉，郝金宝，李丽燕，独军政，
申请(专利权)人：北京标驰泽惠生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：