一种用于检测生物药中葡聚糖硫酸钠盐含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测生物药中葡聚糖硫酸钠盐含量的方法。该方法包括检测标曲溶液制备、标准曲线绘制、样品待测溶液制备、及上样检测。本发明专利技术首创将酶标仪用于生物药中葡聚糖硫酸钠盐含量的测定，样品中的葡聚糖硫酸钠盐与阳离子染色剂形成有紫外吸收的复合物，通过酶标仪在特定波长的紫外光下测定其吸光度，依据吸光度与葡聚糖硫酸钠盐的定量关系推算出样品中的葡聚糖硫酸钠盐的含量。该方法不需要分离蛋白质等繁琐的前处理过程，操作简单，快捷高效，可同时检测多组样品，还可同时对同一样品进行重复检测，不同样品的检测过程不会互相干扰，分析效率高、准确度和精密度高、稳定性好，具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测生物药中葡聚糖硫酸钠盐含量的方法


[0001]本专利技术涉及一种用于检测生物药中葡聚糖硫酸钠盐含量的方法，属于生物检测领域。

技术介绍

[0002]葡聚糖硫酸钠盐是葡聚糖的聚阴离子衍生物，由葡聚糖与氯磺酸酯化而产生。在生物药生产过程中，平均分子量为8000Da的葡聚糖硫酸钠盐可以被添加到细胞中培养，以抑制蛋白质与细胞的结合，增加细胞生长和增殖效率。然而，研究显示，对一组兔子每日服用20mg/Kg葡聚糖硫酸钠盐两周会造成全身毒性作用，因此在生物药纯化开发过程中，必须拥有准确高效的检测方法检测生物药中残留的葡聚糖硫酸钠盐水平，以确保葡聚糖硫酸钠盐已被清除。
[0003]目前，对葡聚糖硫酸钠盐的常用检测方法是液相色谱法，但液相色谱法不适合定量检测蛋白质产品中的葡聚糖硫酸钠盐含量。葡聚糖硫酸钠盐与蛋白质结合，单独通过色谱技术分离是不可行的。若要去除蛋白质再进行检测，则过程会极其繁琐，而且该检测过程容易污染液相管路，可能造成下个样品检测结果不准确等问题。
[0004]因此，有必要开发一种新型的葡聚糖硫酸钠盐的含量检测方法，从而本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于检测生物药中葡聚糖硫酸钠盐含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、配制多组梯度浓度的葡聚糖硫酸钠盐溶液，得到多组标曲溶液，取所述多组标曲溶液各1000μL，分别加入同浓度的阳离子染料溶液1000μL，充分混匀，得到多组检测标曲溶液；S2、将所述多组检测标曲溶液分别接种于酶标板，每孔100μL，重复若干孔，选定对应的波长，用酶标仪检测所述多组检测标曲溶液的吸光度值，分别计算每组所述检测标曲溶液的平均吸光度值，以每组所述检测标曲溶液的平均吸光度值为纵坐标，每组所述标曲溶液浓度为横坐标建立标准曲线；S3、配制要检测的生物药的样品溶液，取1000μL样品溶液，加入所述阳离子染料溶液1000μL，充分混匀，得到样品待测溶液；S4、将所述样品待测溶液接种于酶标板，每孔100μL，重复若干孔，选定所述波长，用酶标仪检测所述样品待测溶液的吸光度值，计算所述待测样品溶液的平均吸光度值，从所述标准曲线上读取所述样品溶液的浓度值。2.如权利要求1所述的用于检测生物药中葡聚糖硫酸钠盐含量的方法，其特征在于，所述多组梯度浓度的葡聚糖硫酸钠盐溶液相邻浓度差值为2～8μg/mL。3.如权利要求2所述的用于检测生物药中葡聚糖硫酸钠盐含量的方法，其特征在于，所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张益，蔡文龙，李佩奇，
申请(专利权)人：江苏艾苏莱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：