【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于MAPT调节的寡核苷酸
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年3月18日提交的美国临时申请序列号62/991,405和2020年8月27日提交的美国临时申请序列号63/071,106的权益，其全部公开内容通过引用并入本文。
专利
[0003]本公开涉及新型MAPT靶向序列、新型分支寡核苷酸以及用于治疗和预防MAPT相关的神经变性的新方法。
技术介绍
[0004]微管相关蛋白τ(tau)由位于染色体17q21上的MAPT基因编码，并在整个中枢神经系统中表达。τ蛋白在脑细胞中微管的组装和稳定中发挥作用。微管对于维持细胞完整性、促进细胞内和细胞之间的运输以及细胞分裂是必不可少的。因此，微管对于轴突运输和维持细胞的结构完整性很重要。τ蛋白位于神经元内，主要位于轴突内。τ蛋白也存在于其他神经元细胞中，诸如星形胶质细胞和少突胶质细胞，其中它执行类似的功能。
[0005]MAPT的突变导致额颞叶痴呆伴帕金森症和进行性核上性麻痹。MAPT的突变和过度磷酸化τ蛋白与阿尔茨海默病(Alzhei...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含有义链和反义链的双链(dsRNA)分子，其中所述反义链包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列。2.如权利要求1所述的dsRNA，其中所述反义链包含与SEQ ID NO:14
‑
33、299和302中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列。3.如权利要求1所述的dsRNA，其包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295的MAPT核酸序列的至少10、11、12或13个连续核苷酸的互补性。4.如权利要求1或3所述的dsRNA，其包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295的MAPT核酸序列的至多3个错配。5.如权利要求1所述的dsRNA，其包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295的MAPT核酸序列的完全互补性。6.如权利要求1
‑
5中任一项所述的dsRNA，其中所述反义链包含约15个核苷酸至25个核苷酸的长度。7.如权利要求1
‑
6中任一项所述的dsRNA，其中所述有义链包含约15个核苷酸至25个核苷酸的长度。8.如权利要求1
‑
7中任一项所述的dsRNA，其中所述反义链为20个核苷酸的长度。9.如权利要求1
‑
7中任一项所述的dsRNA，其中所述反义链为21个核苷酸的长度。10.如权利要求1
‑
7中任一项所述的dsRNA，其中所述反义链为22个核苷酸的长度。11.如权利要求1
‑
10中任一项所述的dsRNA，其中所述有义链为15个核苷酸的长度。12.如权利要求1
‑
10中任一项所述的dsRNA，其中所述有义链为16个核苷酸的长度。13.如权利要求1
‑
10中任一项所述的dsRNA，其中所述有义链为18个核苷酸的长度。14.如权利要求1
‑
10中任一项所述的dsRNA，其中所述有义链为20个核苷酸的长度。15.如权利要求1
‑
14中任一项所述的dsRNA，其包含15个碱基对至20个碱基对的双链区域。16.如权利要求1
‑
15中任一项所述的dsRNA，其包含15个碱基对的双链区域。17.如权利要求1
‑
15中任一项所述的dsRNA，其包含16个碱基对的双链区域。18.如权利要求1
‑
15中任一项所述的dsRNA，其包含18个碱基对的双链区域。19.如权利要求1
‑
15中任一项所述的dsRNA，其包含20个碱基对的双链区域。20.如权利要求1
‑
19中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含平末端。21.如权利要求1
‑
20中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少一个单链核苷酸突出端。22.如权利要求21所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含约2个核苷酸至5个核苷酸的单链核苷酸突出端。23.如权利要求21所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含2个核苷酸的单链核苷酸突出端。24.如权利要求21所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含5个核苷酸的单链核苷酸突出端。25.如权利要求1
‑
24中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含天然存在的核苷酸。26.如权利要求1
‑
24中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少一种修饰的核苷酸。27.如权利要求26所述的dsRNA，其中所述修饰的核苷酸包括2'
‑
O
‑
甲基修饰的核苷酸、
2'
‑
脱氧
‑
2'
‑
氟修饰的核苷酸、2'
‑
脱氧修饰的核苷酸、锁定的核苷酸、脱碱基核苷酸、2'
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氨基修饰的核苷酸、2'
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烷基修饰的核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然碱基的核苷酸或其混合物。28.如权利要求1
‑
27中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少一个修饰的核苷酸间键。29.如权利要求28所述的dsRNA，其中所述修饰的核苷酸间键包含硫代磷酸酯核苷酸间键。30.如权利要求1
‑
29中任一项所述的dsRNA，其包含4
‑
16个硫代磷酸酯核苷酸间键。31.如权利要求1
‑
29中任一项所述的dsRNA，其包含8
‑
13个硫代磷酸酯核苷酸间键。32.如权利要求1
‑
28中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少一种式I修饰的核苷酸间键：其中：B是碱基配对部分；W选自由O、OCH2、OCH、CH2和CH组成的组；X选自由卤代基、羟基和C1‑6烷氧基组成的组；Y选自由O
‑
、OH、OR、NH
‑
、NH2、S
‑
和SH组成的组；Z选自由O和CH2组成的组；R是保护基；并且是任选的双键。33.如权利要求1
‑
32中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少80％的化学修饰的核苷酸。34.如权利要求1
‑
33中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA是完全化学修饰的。35.如权利要求1
‑
33中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少70％的2'
‑
O
‑
甲基核苷酸修饰。36.如权利要求1
‑
33中任一项所述的dsRNA，其中所述反义链包含至少70％的2'
‑
O
‑
甲基核苷酸修饰。37.如权利要求36所述的dsRNA，其中所述反义链包含约70％至90％的2'
‑
O
‑
甲基核苷酸修饰。38.如权利要求1
‑
33中任一项所述的dsRNA，其中所述有义链包含至少65％的2'
‑
O
‑
甲
基核苷酸修饰。39.如权利要求38所述的dsRNA，其中所述有义链包含100％的2'
‑
O
‑
甲基核苷酸修饰。40.如权利要求1
‑
39中任一项所述的dsRNA，其中所述有义链包含所述反义链和所述有义链之间的一个或多个核苷酸错配。41.如权利要求40所述的dsRNA，其中所述一个或多个核苷酸错配存在于所述有义链的5'端的位置2、6和12处。42.如权利要求40所述的dsRNA，其中所述核苷酸错配存在于所述有义链的5'端的位置2、6和12处。43.如权利要求1
‑
42中任一项所述的dsRNA，其中所述反义链包含5'磷酸酯、5'
‑
烷基膦酸酯、5'亚烷基膦酸酯或5'烯基膦酸酯。44.如权利要求43所述的dsRNA，其中所述反义链包含5'乙烯基膦酸酯。45.如权利要求1所述的dsRNA，所述dsRNA包含反义链和有义链，每条链具有5'端和3'端，其中：(1)所述反义链包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列；(2)所述反义链包含交替的2'
‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸和2'
‑
氟
‑
核糖核苷酸；(3)所述反义链5'端的位置2和14处的核苷酸不是2'
‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；(4)所述反义链3'端位置1
‑
2至1
‑
7处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接；(5)所述反义链的一部分与所述有义链的一部分互补；(6)所述有义链包含交替的2'
‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸和2'
‑
氟
‑
核糖核苷酸；和(7)所述有义链5'端的位置1
‑
2处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接。46.如权利要求1所述的dsRNA，所述dsRNA包含反义链和有义链，每条链具有5'端和3'端，其中：(1)所述反义链包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列；(2)所述反义链包含至少70％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；(3)所述反义链5'端的位置14处的核苷酸不是2'
‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；(4)所述反义链3'端的位置1
‑
2至1
‑
7处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接；(5)所述反义链的一部分与所述有义链的一部分互补；(6)所述有义链包含至少70％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；和(7)所述有义链5'端的位置1
‑
2处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接。47.如权利要求1所述的dsRNA，所述dsRNA包含反义链和有义链，每条链具有5'端和3'端，其中：(1)所述反义链包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列；(2)所述反义链包含至少85％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；(3)所述反义链5'端的位置2和14处的核苷酸不是2'
‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；(4)所述反义链3'端的位置1
‑
2至1
‑
7处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连
接；(5)所述反义链的一部分与所述有义链的一部分互补；(6)所述有义链包含100％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；和(7)所述有义链5'端的位置1
‑
2处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接。48.如权利要求1所述的dsRNA，所述dsRNA包含反义链和有义链，每条链具有5'端和3'端，其中：(1)所述反义链包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列；(2)所述反义链包含至少75％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；(3)所述反义链5'端的位置4、5、6和14处的核苷酸不是2'
‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；(4)所述反义链3'端的位置1
‑
2至1
‑
7处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接；(5)所述反义链的一部分与所述有义链的一部分互补；(6)所述有义链包含100％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；和(7)所述有义链5'端的位置1
‑
2处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接。49.如权利要求1所述的dsRNA，所述dsRNA包含反义链和有义链，每条链具有5'端和3'端，其中：(1)所述反义链包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列；(2)所述反义链包含至少75％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；(3)所述反义链5'端的位置2、4、5、6和14处的核苷酸不是2'
‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；(4)所述反义链3'端的位置1
‑
2至1
‑
7处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接；(5)所述反义链的一部分与所述有义链的一部分互补；(6)所述有义链包含100％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；和(7)所述有义链5'端的位置1
‑
2处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接。50.如权利要求1所述的dsRNA，所述dsRNA包含反义链和有义链，每条链具有5'端和3'端，其中：(1)所述反义链包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列；(2)所述反义链包含至少75％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；(3)所述反义链5'端的位置2、6、14和16处的核苷酸不是2'
‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；(4)所述反义链3'端的位置1
‑
2至1
‑
7处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接；(5)所述反义链的一部分与所述有义链的一部分互补；(6)所述有义链包含至少65％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；(7)所述有义链3'端的位置7、9、10和11处的核苷酸不是2'
‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；和(8)所述有义链5'端的位置1
‑
2处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接。51.如权利要求1所述的dsRNA，所述dsRNA包含反义链和有义链，每条链具有5'端和3'
端，其中：(1)所述反义链包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列；(2)所述反义链包含至少75％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；(3)所述反义链5'端的位置2和14处的核苷酸不是2'
‑
甲氧基
‑
核糖核苷酸；(4)所述反义链3'端的位置1
‑
2至1
‑
7处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接；(5)所述反义链的一部分与所述有义链的一部分互补；(6)所述有义链包含至少75％的2'
‑
O
‑
甲基修饰；(7)所述有义链3'端的位置7、10和11处的核苷酸不是2'
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甲氧基
‑
核糖核苷酸；和(8)所述有义链5'端的位置1
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2处的核苷酸通过硫代磷酸酯核苷酸间键相互连接。52.如权利要求1
‑
51中任一项所述的dsRNA，其中功能部分连接到所述反义链的5'端和/或3'端。53.如权利要求1
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51中任一项所述的dsRNA，其中功能部分连接到所述有义链的5'端和/或3'端。54.如权利要求1
‑
51中任一项所述的dsRNA，其中功能部分连接到所述有义链的3'端。55.如权利要求52
‑
54中任一项所述的dsRNA，其中所述功能部分包括疏水部分。56.如权利要求55所述的dsRNA，其中所述疏水部分选自由以下组成的组：脂肪酸、类固醇、开环类固醇、脂质、神经节苷脂、核苷类似物、内源性大麻素、维生素及其混合物。57.如权利要求56所述的dsRNA，其中所述类固醇选自由胆固醇和石胆酸(LCA)组成的组。58.如权利要求56所述的dsRNA，其中所述脂肪酸选自由二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)和二十二碳烯酸(DCA)组成的组。59.如权利要求56所述的dsRNA，其中所述维生素选自由胆碱、维生素A、维生素E、其衍生物及其代谢物组成的组。60.如权利要求59所述的dsRNA，其中所述维生素选自由视黄酸和琥珀酸α
‑
生育酚组成的组。61.如权利要求54
‑
60中任一项所述的dsRNA，其中所述功能部分通过连接子来连接至所述反义链和/或有义链。62.如权利要求61所述的dsRNA，其中所述连接子包括二价或三价连接子。63.如权利要求62所述的dsRNA，其中所述二价或三价连接子选自由以下组成的组：
其中n为1、2、3、4或5。64.如权利要求61或62所述的dsRNA，其中所述连接子包含乙二醇链、烷基链、肽、RNA、DNA、磷酸二酯、硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、酰胺、氨基甲酸酯或其组合。65.如权利要求62或63所述的dsRNA，其中当所述连接子为三价连接子时，所述连接子进一步连接磷酸二酯或磷酸二酯衍生物。66.如权利要求65所述的dsRNA，其中所述磷酸二酯或磷酸二酯衍生物选自由以下组成的组：的组：的组：以及其中X是O、S或BH3。67.如权利要求1
‑
66中任一项所述的dsRNA，其中所述有义链3'端的位置1和2处的核苷酸，以及所述反义链5'端的位置1和2处的核苷酸，通过硫代磷酸酯键与相邻的核糖核苷酸连接。68.一种用于抑制生物体中τ蛋白(MAPT)基因表达的药物组合物，其包含如权利要求1
‑
67中任一项所述的dsRNA和药学上可接受的载体。69.如权利要求68所述的药物组合物，其中所述dsRNA将所述MAPT基因的表达抑制至少50％。70.如权利要求68所述的药物组合物，其中所述dsRNA将所述MAPT基因的表达抑制至少80％。71.一种用于抑制细胞中MAPT基因表达的方法，所述方法包括：(a)将如权利要求1
‑
67中任一项所述的双链核糖核酸(dsRNA)引入所述细胞中；和(b)将步骤(a)中产生的所述细胞保持足够的时间以获得所述MAPT基因的mRNA转录物
的降解，从而抑制所述细胞中所述MAPT基因的表达。72.一种治疗或控制神经退行性疾病的方法，其包括向需要这种治疗或控制的患者施用治疗有效量的如权利要求1
‑
67中任一项所述的所述dsRNA。73.如权利要求72所述的方法，其中将所述dsRNA施用于所述患者的大脑。74.如权利要求72所述的方法，其中所述dsRNA通过脑室内(ICV)注射、纹状体内(IS)注射、静脉内(IV)注射、皮下(SQ)注射或其组合施用。75.如权利要求72所述的方法，其中施用所述dsRNA导致海马、纹状体、皮质、小脑、丘脑、下丘脑和脊髓中的一个或多个中的MAPT基因mRNA减少。76.如权利要求71
‑
75中任一项所述的方法，其中所述dsRNA将所述MAPT基因的表达抑制至少50％。77.如权利要求71
‑
75中任一项所述的方法，其中所述dsRNA将所述MAPT基因的表达抑制至少80％。78.一种包含可操作地连接至编码dsRNA分子的核苷酸序列的调控序列的载体，所述dsRNA分子与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补。79.如权利要求78所述的载体，其中所述RNA分子将所述MAPT基因的表达抑制至少30％。80.如权利要求78所述的载体，其中所述RNA分子将所述MAPT基因的表达抑制至少50％。81.如权利要求78所述的载体，其中所述RNA分子将所述MAPT基因的表达抑制至少80％。82.如权利要求78所述的载体，其中所述dsRNA包含有义链和反义链，其中所述反义链包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列。83.一种包含如权利要求78
‑
82中任一项所述的载体的细胞。84.一种重组腺相关病毒(rAAV)，其包含如权利要求78
‑
82中任一项所述的载体和AAV衣壳。85.一种分支RNA化合物，其包含彼此共价结合的如权利要求1
‑
67中任一项所述的dsRNA分子中的两种或更多种。86.如权利要求85所述的分支RNA化合物，其中所述dsRNA分子通过连接子、间隔子或分支点彼此共价结合。87.一种分支RNA化合物，其包括：两个或多个RNA分子，其具有15至35个核苷酸的长度，和与MAPT mRNA基本上互补的序列，其中所述两个RNA分子通过一个或多个独立地选自连接子、间隔子和分支点的部分相互连接。88.如权利要求87所述的分支RNA化合物，其包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列。89.如权利要求87所述的分支RNA化合物，其包含与SEQ ID NO:14
‑
33、299和302中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列。90.如权利要求87
‑
89中任一项所述的分支RNA化合物，其中所述RNA分子包含ssRNA和
dsRNA中的一种或两种。91.如权利要求87
‑
89中任一项所述的分支RNA化合物，其中所述RNA分子包含反义寡核苷酸。92.如权利要求87
‑
91中任一项所述的分支RNA化合物，其中每个RNA分子包含15至25个核苷酸的长度。93.如权利要求87
‑
89中任一项所述的分支RNA化合物，其中每个RNA分子包括包含有义链和反义链的dsRNA，其中每个反义链独立地包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列基本上互补的序列。94.如权利要求93所述的分支RNA化合物，其包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列的至少10、11、12或13个连续核苷酸的互补性。95.如权利要求93所述的分支RNA化合物，其中每个RNA分子包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列的不多于3个错配。96.如权利要求93所述的分支RNA化合物，其包含与SEQ ID NO:1
‑
13、292和295中任一个的MAPT核酸序列的完全互补性。97.如权利要求93
‑
96中任一项所述的分支RNA化合物，其中所述反义链包含具有SEQ ID NO:34
‑
46中任一个的核酸序列的部分。98.如权利要求93
‑
97中任一项所述的分支RNA化合物，其中所述反义链和/或有义链包含约15个核苷酸至25个核苷酸的长度。99.如权利要求93
‑
98中任一项所述的分支RNA化合物，其中所述反义链为20个核苷酸的长度...
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