褪黑素在制备抑制替加环素耐药菌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，特别是涉及褪黑素在制备抑制替加环素耐药菌的药物中的应用。本发明专利技术提供了褪黑素在制备抑制替加环素耐药菌的药物中的应用。本发明专利技术提供的本应用揭示了当将褪黑素与替加环素联合用药时具有协同作用，能够显著提高对耐药菌的抑菌效果，且效果优于各自单独用药。本发明专利技术为研究内源性物质与抗生素联合用药对耐药菌的逆转提供了方向。向。向。

【技术实现步骤摘要】
褪黑素在制备抑制替加环素耐药菌的药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，特别是涉及褪黑素在制备抑制TmexCD1
‑
ToprJ1外排泵介导的替加环素耐药菌的药物中的应用。

技术介绍

[0002]褪黑素是一种由必需氨基酸色氨酸分子经过一系列生化反应而合成的一种广泛在于动物、植物、细菌等中的一种内源性物质。褪黑素在人体内主要由松果体在正常的光暗条件下控制合成并分泌的，能够向机体传递昼夜循环信号。褪黑素也是一种良好的抗氧化剂，能清除机体的自由基，在生物体中发挥着重要的抗氧化损伤作用。
[0003]替加环素是第一个被批准用于临床治疗的新型甘氨酰环素类抗生素，也是继米诺环素后研制开发的第三代四环素类抗生素，并于2005年获得美国FDA批准进入美国市场。替加环素抗菌谱广，对大多数革兰阴性菌(变形杆菌属和铜绿假单胞菌除外)和革兰阳性菌都表现出良好的抗菌活性。替加环素已被认为是治疗多重耐药革兰氏阴性菌感染的“最后一道防线”之一。作为一种具有广谱抗菌活性的甘氨酰环素类抗生素，替加环素可以克服肠杆菌科中主动外排泵或核糖体保护介导的四环素耐药性。然而，随着替加环素在临床上的广泛应用，尤其是对CRKP的临床应用增加，关于替加环素耐药肠杆菌的报道越来越多。2020年由质粒编码的RND外排泵基因簇tmexCD1
‑
toprJ1首次被报道，该耐药基因簇可导致菌株对四环素类药物(包括替加环素和埃拉瓦环素)产生耐药性，并可以降低菌株对多种临床重要抗菌药物的敏感性。
[0004]寻找一种能够抑制TmexCD1
‑
ToprJ1外排泵功能的佐剂与替加环素联合应用，提高替加环素在菌体内的浓度，以恢复菌株对替加环素的敏感性是一种可行有效的策略。已经有许多研究人员通过化学合成或者从天然产物中筛选的方法，寻找到了一些具有抑制外排泵功能的物质，其在体外试验中和抗菌药物联合使用可以明显增强抗菌药物的活性。然而现有的外排泵抑制剂由于存在着安全性和特异性等问题导致难以应用于临床，所以现有技术仍在寻找新的安全有效的外排泵抑制剂。

技术实现思路

[0005]为了解决上述问题，本专利技术提供了一种褪黑素在制备抑制替加环素耐药菌的药物中的应用的技术方案。本专利技术提供的应用及相关的研究表明褪黑素与替加环素联用以后通过多种机制协同抑制携带TmexCD1
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ToprJ1外排泵替加环素耐药的肺炎克雷伯菌的活性。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
[0007]本专利技术提供了褪黑素在制备抑制TmexCD1
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ToprJ1外排泵介导的替加环素耐药菌的药物中的应用。
[0008]本专利技术还提供了褪黑素在制备治疗TmexCD1
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ToprJ1外排泵介导的替加环素耐药菌引起感染的药物中的应用。
[0009]本专利技术还提供了褪黑素联合替加环素在制备用于治疗耐药菌感染的药物中的应
用。
[0010]本专利技术还提供了褪黑素联合替加环素在制备用于杀灭替加环素耐药的肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumonia)的药物中的应用。在本专利技术中，所述肺炎克雷伯菌优选为携带TmexCD1
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ToprJ1外排泵的替加环素耐药肺炎克雷伯菌。
[0011]本专利技术还提供了褪黑素联合替加环素在制备抑制细菌生物被膜形成的药物中的应用。
[0012]本专利技术还提供了褪黑素联合替加环素在制备破坏细菌外膜完整性和/或细菌外膜通透性和/或PMF中的膜电位的药物中的应用。
[0013]本专利技术提供了一种抗菌药物组合物，所述抗菌药物组合物包括四环素类药物替加环素和褪黑素。
[0014]优选的，所述褪黑素的用量≥4mg/mL；所述替加环素的用量≥4μg/mL。
[0015]优选的，以重量份计，所述褪黑素与替加环素的重量比为(1000～2000):(1～4)；进一步优选为2000:(1～4)。
[0016]为了消除替加环素的耐药性，本专利技术通过微量肉汤棋盘法实验筛选出对替加环素耐药肺炎克雷伯菌有抑制作用的组合。结果表明，褪黑素与替加环素联合用药时，对替加环素耐药菌在体外有显著的抑制作用，且效果优于各自单独用药，因而替加环素与褪黑素联合用药时具有明显的协同作用。每种物质在组合物中的相对用量大大减少，进而减少可能的不良反应和副作用，提高用药安全性，同时还可以增加患者服用的依从性，从而保证疗效。本专利技术为解决替加环素日趋严重的耐药问题提供了新的研究思路和研发方向。
附图说明
[0017]图1为褪黑素与替加环素联用对替加环素耐药肺炎克雷伯菌FIC指数分布图；
[0018]图2为褪黑素与替加环素联合用药下肺炎克雷伯菌的生长曲线；
[0019]图3为褪黑素作用下罗丹明的荧光强度；
[0020]图4为褪黑素作用下肺炎克雷伯菌的膜电位。
具体实施方式
[0021]下文中涉及使用的试剂或器械未注明具体技术或条件者，则按照常规实验条件进行，未明确说明有试剂公司说明书的，则按照说明书所建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0022]1、菌种与抗生素
[0023]TmexCD1
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ToprJ1外排泵介导的替加环素耐药肺炎克雷伯菌。
[0024]质控菌株大肠杆菌(ATCC25922)(购于中国兽医药品监察所)。
[0025]市售褪黑素，替加环素，二者均为纯品。
[0026]2、棋盘法药敏实验
[0027]采用棋盘微量稀释法以各药对应菌种的2、1、1/2、1/4、1/8、1/16MIC浓度在96孔反应板上分别按纵列和横列进行联合，接种菌量为1
×
105CFU/mL，37℃孵育18～20h后观察结果，每组试验至少重复三次。
[0028]操作步骤如下：首先分别将褪黑素和替加环素用MH肉汤按照倍比稀释的方法配制
成8、4、2、1、1/2、1/4
×
MIC浓度，然后在96孔板的第1～6列的前6排依次加入50
ì
L稀释好浓度的替加环素，在第1～6排的前6列依次加入50
ì
L稀释好浓度的褪黑素，如此最终联合后的药物浓度为2～1/16MIC。第7排为替加环素的单药对照，第8列为褪黑素的单药对照，均加入100
ì
L稀释好浓度的药液。然后每一孔均加入100
ì
L稀释好的菌液，第7排、列交叉孔为菌液组的阳性对照。以FICI的计算结果作为联合药敏试验的判断依据。FICI＝FIC
a
+FIC
b
＝MIC
ab
/MIC
a
+MIC
ba
/MIC
b
，其中MIC
a
，MIC
b
分别是a和b单独用药时的MIC值，MIC
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.褪黑素在制备抑制TmexCD1
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ToprJ1外排泵介导的替加环素耐药菌的药物中的应用。2.褪黑素在制备治疗TmexCD1
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ToprJ1外排泵介导的替加环素耐药菌引起感染的药物中的应用。3.褪黑素联合替加环素在制备用于治疗耐药菌感染的药物中的应用。4.褪黑素联合替加环素在制备用于杀灭替加环素耐药的肺炎克雷伯菌的药物中的应用。5.褪黑素联合替加环素在制备抑制细菌生物被膜形成的药物中的应用。6.褪黑素联合替加环素在制备破坏细菌外膜完整性和/或细菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓明，王丽平，刘挺，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：