一种缩短红掌组织培养周期的方法技术

本发明专利技术公开了一种缩短红掌组织培养周期的方法，属于植物组织培养技术领域。培养方法为：步骤1，将初代培养后的红掌愈伤组织接种到增殖生根联合培养基，所述增殖生根联合培养基包括植物生长调节物质6

【技术实现步骤摘要】
一种缩短红掌组织培养周期的方法


[0001]本专利技术涉及植物组织培养
，具体涉及一种缩短红掌组织培养周期的方法。

技术介绍

[0002]植物组织培养是指在无菌条件下利用人工培养基对植物组织或器官的培养，使其再生完整植株。用于组织培养的植物组织或者器官称为外植体。植物组织培养的理论依据是植物细胞全能性理论。完整的植物组织培养流程包括：初代培养，增殖培养和生根培养。根据植物品种的不同，每个培养阶段耗时约20
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40天。目前，培养周期长是红掌组织培养工厂化繁殖的瓶颈之一，缩短组培苗工厂化生产的周期是降低成本、提高经济效益的有效手段。

技术实现思路

[0003]为解决上述现有技术中红掌组织培养周期长的技术问题，本专利技术提供一种缩短红掌组织培养周期的方法。
[0004]为达到上述目的，本专利技术的技术方案提供一种缩短红掌组织培养周期的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将初代培养后的红掌愈伤组织接种到增殖生根联合培养基，所述增殖生根联合培养基中包括植物生长调节物质6
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苄氨基嘌呤(6
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BA)、苯基噻二唑基脲(TDZ)、萘乙酸(NAA)；步骤2，第一阶段，接种起至第3天或第4天，温度20
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1℃，暗培养；第二阶段，接种第4天或第5天起至第24天或第25天，温度为25
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1℃，光照强度为2000LUX；第三阶段，第25天或第26天起至第40天，温度为28
±
1℃，光照为5000～7000LUX，得到生根幼苗。
[0005]进一步地，所述增殖生根联合培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括：6
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BA：0.3mg/L、TDZ：0.2mg/L、NAA：0.5mg/L。
[0006]进一步地，所述增殖生根联合培养基还包括：琼脂粉：4.5g/L、蔗糖：20g/L。
[0007]进一步地，所述增殖生根联合培养基pH为5.8～6.0。
[0008]进一步地，所述步骤1的初代培养的培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括：6
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BA：0.5mg/L、TDZ：1.0mg/L、琼脂粉：4.5g/L、蔗糖：30g/L、椰子汁：5％，pH为5.8～6.0。
[0009]进一步地，所述步骤1的初代培养的培养温度为25
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1℃，光照强度为2000LUX，光照时间为12h/d，培养时间为25天。
[0010]进一步地，步骤1中是将红掌愈伤组织切为1.0cm
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1.0cm的小块，切面朝下，接种到增殖生根联合培养基上。
[0011]进一步地，步骤2中第二阶段和第三阶段的光照时间为14h/d。
[0012]有益效果
[0013](1)设计同一培养基的增殖和生根联合培养中各植物生长物质的最优配置，再配合梯度式的光照和温度培养，进一步提升幼苗质量和移栽成活率，切实缩短红掌组织培养
的周期，对比试验表明本专利技术的红掌愈伤组织生长良好，红掌组培苗可以不经过单独的生根培养阶段，直接进入移栽环节，缩短培养周期20
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40天，从根本上降低了工厂化生产的成本、提高了经济效益。
[0014](2)采用高光照和高温培养来缩短培养周期，红掌愈伤组织可能会失活以及增殖能力下降。本专利技术采用梯度式光照和温度，在第三阶段使用温度28
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1℃，光照5000～7000LUX瓶内炼苗，并未加重愈伤组织褐变，也未造成愈伤组织失活，推断是本专利技术的增殖生根联合培养基中物质配比起到了作用，尤其是TDZ为0.2mg/L维持了原有愈伤组织的活性，并刺激新的愈伤组织产生。将TDZ引入红掌增殖生根培养中，在确保了愈伤组织活性的基础之上，实现了红掌组培苗在同一培养基中的增殖和生根联合培养。
附图说明
[0015]图1是本专利技术实施例1的生根幼苗图；
[0016]图2是本专利技术对比例1的生根幼苗图。
具体实施方式
[0017]TDZ具有极强的细胞分裂活性，细胞分化活性相对较低，因此常用于植物愈伤组织的诱导，一般不用于增殖和生根培养。本专利技术中将TDZ引入红掌增殖和生根培养中，在确保愈伤组织活性的基础之上，实现了红掌组培苗在同一培养基中的增殖和生根联合培养。鉴于增殖和生根同瓶培养效果，为进一步提升幼苗质量和移栽成活率，切实缩短红掌组织培养的周期，结合大田炼苗启示，将红掌大田炼苗的试验条件引入到组培苗中，确定梯度式光照和温度培养。
[0018]本专利技术的增殖生根联合培养基包括植物生长调节物质6
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BA、TDZ、NAA，增殖生根培养基还包括以1/2MS培养基为基本培养基，其中，琼脂粉：4.5g/L、蔗糖：20g/L，pH：5.8
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6.0。本专利技术进行最佳植物生长物质配置试验，植物生长调节物质6
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BA、TDZ、NAA的9种不同配置如表1所示，标记为T1至T9。
[0019]表1增殖生根联合培养基中植物生长调节物质配置
[0020][0021][0022]试验具体步骤为：在超净工作台上，以30天左右叶龄的红掌健壮叶柄为外植体，消毒处理后对其进行初代培养，在初代培养中，初代培养的培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括6
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BA：0.5mg/L、TDZ：1.0mg/L、琼脂粉：4.5g/L、蔗糖：30g/L、椰子汁：5％，pH：5.8
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6.0；培养温度为25℃，光照强度为2000LUX，光照时间为12h/d，培养时间为25天；在超净工
作台上，将初代培养后的红掌愈伤组织切为约1.0cm
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1.0cm小块，切面朝下，分别接种到不同的增殖生根联合培养基上，采用培养温度为25℃，光照强度为2000LUX，光照时间为14h/d，每一种增殖生根联合培养基处理接种外植体100个，重复3次，接种40d统计每100块外植体中生根幼苗的平均数量和愈伤组织体积增量并记录愈伤组织及幼苗生长状态，结果如表2所示。
[0023]愈伤组织体积增量是培养40天愈伤组织体积减去接种时愈伤组织体积。愈伤组织体积的测试方法是在超净工作台上，用排水法测量每100块外植体的体积增量，取多次试验的平均值。
[0024]表2不同增殖生根联合培养基上生根幼苗数量及生长状态
[0025][0026]注：Duncan's显著性检验，不同字母表示在0.01水平下差异显著。
[0027]根据表2的试验结果可知：不同植物生长物质配置对红掌愈伤组织及幼苗的生长发育有着极其显著的影响，且在不同植物生长物质配置的培养基上愈伤组织及幼苗的生长状态有很大差异。
[0028]从生根幼苗数量分析：T1至T9的各个处理中，随着植物生长调节物质配置的变化，生根幼苗的数量总体呈现先上升后下降的变化趋势，且各处理之间差异极显著；各处理中T1处理生根幼苗数量最低，T5处理生根幼苗数量高达152本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种缩短红掌组织培养周期的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1，将初代培养后的红掌愈伤组织接种到增殖生根联合培养基，所述增殖生根培养基中包括植物生长调节物质6
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苄氨基嘌呤、苯基噻二唑基脲、萘乙酸；步骤2，温度和光照培养：第一阶段，接种起至第3天或第4天，温度20
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1℃，暗培养；第二阶段，接种第4天起或第5天起至第24天或第25天，温度为25
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1℃，光照强度为2000LUX；第三阶段，第25天起或第26天起至第40天，温度为28
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1℃，光照为5000～7000LUX，得到生根幼苗。2.根据权利要求1所述的缩短红掌组织培养周期的方法，其特征在于，所述增殖生根联合培养基以1/2MS培养基为基本培养基，还包括：6
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苄氨基嘌呤：0.3mg/L、苯基噻二唑基脲：0.2mg/L、萘乙酸：0.5mg/L。3.根据权利要求2所述的缩短红掌组织培养周期的方法，其特征在于，所述增殖生根联合培养基还包括：琼脂粉：4.5g...

【专利技术属性】
技术研发人员：庄乾兴，卢绪娟，袁王睿，邓乔轩，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：