一种草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变检测方法及应用技术

本发明专利技术基于环介导等温扩增技术（LAMP）建立一种草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变快速检测方法，属于害虫抗药性分子检测和草地贪夜蛾综合防治范畴。本发明专利技术检测方法通过在草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V位点分别设计2对特异性引物，进行LAMP扩增，根据反应产物颜色判定是否为草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变个体。该方法稳定性高、耗时短、操作简便、灵敏度高，适合田间快速检测草地贪夜蛾对有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂抗药性的分子检测，为草地贪夜蛾综合防治提供了决策依据。策依据。策依据。

【技术实现步骤摘要】
一种草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变检测方法及应用


[0001]本专利技术属于生物检测方法领域，具体是涉及一种草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变分子快速检测方法，用于草地贪夜蛾对作用于乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase, AChE）的有机磷和氨基甲酸酯类杀虫剂抗性靶标突变的高灵敏快速分子检测。

技术介绍

[0002]草地贪夜蛾是2018年联合国粮农组织向全球发布预警的重要农业害虫，具有迁飞速度快、繁殖能力强、暴食为害重、防治难度大等特点。该虫于2019年1月在我国云南发现入侵，迅速扩散到我国26个省，并在我国云南、广东和海南等华南地区定殖，周年繁殖为害。草地贪夜蛾寄主范围广，可为害水稻、玉米、小麦、高粱、甘蔗、马铃薯、花生等350余种作物，迁入我国后主要为害玉米，对我国的玉米生产和粮食安全造成了严重威胁。2020年9月15日，农业农村部《一类农作物病虫害名录》公布，草地贪夜蛾因造成巨大农业损失入选虫害名录。
[0003]目前化学防治依然是控制草地贪夜蛾为害的最快速和有效手段，长期过度的依本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于环介导等温扩增技术（LAMP）对草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变检测的引物组合，其特征在于，所述引物组合包括内引物FIP/BIP和外引物F3/B3，所述内引物FIP/BIP序列分别为:FIP
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A201S：TCGATAGAGGTGACAATAAATGCAAAACATTATTCGGTGAGTCGT（SEQ ID NO.1）BIP
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A201S： AACTTGTTCTCTCAGGCGATAATGTCAAAATGCTTTCTTCTCTTGA（SEQ ID NO.2）FIP
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F290V：GCTCATCTAGGAACGAACCATCTAGGAACTCTTGGTATTTGTGAAG（SEQ ID NO.5）BIP
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F290V：TACCCGCTCGATCATTAGCAGTAGTAACCTTCCTCCGTATT（SEQ ID NO.6）所述外引物F3/B3序列分别为:F3
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A201S：TACTTCGGAGGAAACCCG（SEQ ID NO.3）B3
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A201S：TTCTGCTAATCGGATGCC（SEQ ID NO.4）F3
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F290V：GATGAACTAGTCAATAATGAATGG（SEQ ID NO.7）B3
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F290V：CCTTGGGGAATAACTCAGT（SEQ ID NO.8）。2.一种基于环介导等温扩增技术（LAMP）对草地贪夜蛾乙酰胆碱酯酶A201S和F290V突变检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：（1）提取草地贪夜蛾幼虫或成虫基因组DNA，制备gDNA模板；（2）在反应容器中建立LAMP反应体系，包括LAMP反应液、特异性引物，gDNA模板，并补充无菌水；（3）将LAMP反应体系放入恒温容器中进行恒温孵育反应；（4）结果判定：反应结束后，反应液不变色的样品为非突变体，反应液变色的样品为突变体；其中所述特异性引物包括内引物FIP/BIP和外引物F3/B3，所述内引物FIP/BIP序列分别为:FIP
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A201S：TCGATAGAGGTGACAATAAATGCAAAACATTATTCGGTGAGTCGT（SEQ ID NO.1）BIP
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A201S： AACTTGTTCTCTCAGGCGATAATGTCAAAATGCTTTCTTCTCTTGA（SEQ ID NO.2）FIP
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F290V：GCTCATCTAGGAACGAACCATCTAGGAACTCTTGGTATTTGTGAAG（SEQ ID NO....

【专利技术属性】
技术研发人员：盛成旺，卢静波，沈伟宏，廖敏，蒋兴川，操海群，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：