一种序贯机械通气策略治疗重症哮喘的临床研究方法技术

本发明专利技术公开了一种序贯机械通气策略治疗重症哮喘的临床研究方法，首先首先重症哮喘患者lncRNABCYRN1在重型哮喘患者无创通气治疗成功组和失败组痰液中表达量的变化范围：样本收集：识别急诊室重症哮喘患者，合适时间行无创通气治疗，无创通气后72小时内观察无创通气成效，分成功组和失败组，收集相关临床指标；采样点及标记物检测：选择入急诊抢救室时及无创通气启动0、24、48、72小时为时间点，留取患者痰液标本；本发明专利技术通过提出系统研究lncRNABCYRN1在重症哮喘发生发展恶化中表达量的变化、作用和分子作用信号通路，为开发可用于重症哮喘序贯转化有创通气时机选择分子标志物和重症哮喘治疗靶点提供原创性的理论和技术依据。喘治疗靶点提供原创性的理论和技术依据。

【技术实现步骤摘要】
一种序贯机械通气策略治疗重症哮喘的临床研究方法


[0001]本专利技术涉及医疗
，具体为一种序贯机械通气策略治疗重症哮喘的临床研究方法。

技术介绍

[0002]重症哮喘主要病理生理学改变主要AHR、炎症和气道重塑；气道重塑包括气道上皮完整性的破坏、网状基底膜(RBM)增厚、细胞外基质沉积、新生血管形成、ASM细胞增生肥大、杯状细胞化生、粘液腺增生，严重的气道重塑将导致不可逆转的气流受限，与多种细胞参与、信号传导通路等密切相关。近年研究表明，EOS、IL
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4、IL
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5、IL
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13、纤维细胞因子TGF
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β、VitD等可促进ASM增厚，IL
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33促进RBM增厚，IL
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17促进ICAM
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1表达及诱导成纤维细胞分泌大量炎症因子，YKL
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40刺激成纤维细胞与I型胶原结合调节胶原纤维的生成，PMN与TH17细胞、IL
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17、IL
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8、MPO、NE、MMP<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种序贯机械通气策略治疗重症哮喘的临床研究方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤1：重症哮喘患者lncRNA BCYRN1在重型哮喘患者无创通气治疗成功组和失败组痰液中表达量的变化范围：样本收集：识别急诊室重症哮喘患者，合适时间行无创通气治疗，无创通气后72小时内观察无创通气成效，分成功组和失败组，收集相关临床指标；采样点及标记物检测：选择入急诊抢救室时及无创通气启动0、24、48、72小时为时间点，留取患者痰液标本，利用mRNA表达谱芯片技术、RT
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PCR等技术获得成功组及失败组中lncRNA BCYRN1的表达量变化，聚类分析及GO pathway分析差异表达lncRNA BCYRN1，确定重症哮喘恶化的lncRNA BCYRN1表达情况；在扩大样本的成功组和失败组中验证芯片的筛选结果，进一步确定lncRNA BCYRN1在成功组和失败组中的表达情况，统计学分析特异性生物标记物lncRNA BCYRN1表达失调与重型哮喘序贯转化有创通气时机预测的关系；步骤2：特异性生物标记物lncRNA BCYRN1对肺气管平滑肌细胞生物学行为的影响：克隆特异性生物标记物lncRNA BCYRN1基因，构建过表达载体，转染肺气管平滑肌细胞株，在体外细胞学水平，观察特异性lncRNA BCYRN1对肺气管平滑肌细胞的生长增殖、细胞周期、凋亡、迁移侵袭的影响；在动物水平，观察特异性lncRNA BCYRN1对大鼠体内肺气管平滑肌细胞生长增殖和侵袭迁移的影响；针对特异性lncRNA BCYRN1，设计高效特异性siRNA或者shRNA序列，转染肺气管平滑肌细胞株，在体外细胞学水平，观察特异性siRNA或者shRNA对肺气管平滑肌细胞的生长增殖、细胞周期、凋亡、迁移侵袭的影响；在动物水平，观察特异性lncRNA BCYRN1沉默表达对大鼠体内肺气管平滑肌细胞生长增殖和侵袭迁移的影响；步骤3：肺气管平滑肌特异性lncRNA BCYRN1影响肺气管平滑肌细胞增殖和迁移的信号通路研究：采用染色质免疫沉淀、免疫荧光原位杂交等手段寻找与特异性lncRNA BCYRN1存在直接相互作用蛋白，深入探讨特异性lncRNA对下游分子调控的机理；利用高通量蛋白芯片及免疫组化方法检测信号通路相关分子的蛋白表达水平及磷酸化水平，包括细胞凋亡相关分子(Akt、Bcl
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2、p53和Bax等)；细胞增殖相关分子(mTOR和p70 S6K)；侵袭转移相关分子(MMP
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14、MMP
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9T、opoisomerase 2A、Osteopintin、Rb；统计学分析上述蛋白表达水平或磷酸化水平差异分子，阐明lncRNA BCYRN1影响肺气管平滑肌细胞增殖和迁移的信号通路；步骤4：药物对人体TH1细胞因子和TH2细胞因子的影响：取重症患者血液化验，得到CD4+细胞，根据CD4+T细胞其分泌细胞因子的功能不同，将CD4+T细胞其分泌细胞因子分为Th1和Th2两亚群，进而得到Th1和Th2两种细胞因子，获取TH1和TH2细胞因子后，此时患者的TH1和TH2的细胞因子处于失衡状态；通过使用茶碱、乙二胺复合盐、益生菌、甲基、氯苯甲酰基、苯氧基、金黄色葡萄球菌和卡他奈瑟菌肺炎双球菌混合液对失衡状态下的TH1和TH2细胞因子进行培养；处于失衡状态的下的TH1和TH2细胞因子在混合液中进行培养过程中，由益生菌提供营养物质，茶碱、乙二胺复合盐与甲基、氯苯甲酰基、苯氧基和金黄色葡萄球菌与卡他奈瑟菌肺炎双球菌，逐步对失衡状态下的TH1和TH2细胞因子进行修复调合；
随时间的延长，TH1和TH2细胞因子，逐步在混合液的培育中发生变化，失衡的Th2细胞因子逐步得到修复和TH1构建产生变化，最终低于TH1细胞因子的TH2细胞因子和TH1处于平衡状态，进而得到平衡状态下的TH1和TH2细胞因子。2.根据权利要求1所述的一种序贯机械通气策略治疗重症哮喘的临床研究方法，其特征在于：在步骤1中，样本收集包括，研究对象：所有病人均签署了知情同意书，入急诊抢救室的重症哮喘患者且72小时内需无创通气支持，不少于500例；临床资料：患者入急诊室后完成病史采集及收集临床各项指标，包括心电监护结果、呼吸参数、生化检验、影像学、生命体征变化；首日完成APACHEII评分、LIPS评分、SOFA评分；纳入标准：呼吸频率不少于25次/分，出现缺氧症状(胸闷、紫绀、端坐呼纳入标准、排除及剔除标准吸等)，入急诊抢救室起72小时内需无创通气治疗；排除标准：入抢救室已气管插管，明确存在无创通气禁忌症，神志昏迷或严重创伤，剔除标准：72小时内未接受无创通气治疗，启动无创通气72小时内自动离院或放弃治疗；研究分组及时间点：研究分组分为A/B组，无创通气维持72小时以上或顺利脱机为A组，无创通气无法维持72小时序贯改为有创通气为B组；时间点的选择分别为入急诊抢救室0小时、启动无创通气后0小时、24小时、48小时、72小时；标本收集及分析：在上述时间点，每名患者留取痰液及动脉血气标本，采样点与动脉血气时间一致，样本离心留取血清，放置
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80℃冰箱保存待测，标本每季度收集完毕后，送至深圳市依托单位中心实验室完成生物标记物检测，采用ELISA进行定量测定生物标记物；上述时间点同时检测血气、PCT、NT
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proBNP；临床指标收集：首要观察点为72小时内无创序贯为有创通气，次要观察无创通气启动时间、紧急插管时间、脱机时间(无创)、呼吸通气时间、7天及28天死亡率、总住院时间；启动无创/有创通气后0小时、24小时、48小时及72小时的呼吸动力学参数(潮气量/呼吸频率/动态顺应性/弹性阻力/平台压/峰压)；统计学分析：将lncRNA BCYRN1监测数值、血气、PCT、NT
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proBNP和APACHEII评分、LIPS评分、呼吸支持参数纳入统计分析，72小时内无创通气失败序贯成有创通气为金标准，获得每项指标最佳的CUT OFF值，并验证该CUT OFF值的阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)；logistic回归分析采用先进行二项式logistic回归分析法，将获得组间差异P＜0.05指标进行多因素logistic回归分析，筛选特异性预警因素。3.根据权利要求1所述的一种序贯机械通气策略治疗重症哮喘的临床研究方法，其特征在于：在步骤2中，特异性生物标记物lncRNA BCYRN1对肺气管平滑肌细胞生物学行为的影响，包括，特异性lncRNA BCYRN1靶向表达肺气管平滑肌细胞模型的建立：用肺气管平滑肌细胞系作为研究模型，利...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒敏，梁永胜，郭江华，吴文滔，
申请(专利权)人：华中科技大学协和深圳医院，
类型：发明
国别省市：