苔藓假单胞菌GT31、其应用及所得防治剂制造技术

本发明专利技术提出一种苔藓假单胞菌Pseudomonas gessardii GT31、其应用及所得防治剂，属于微生物技术领域。该苔藓假单胞菌Pseudomonas gessardii GT31，保藏编号为CGMCC No.25635，于2022年09月02日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。本发明专利技术提出的苔藓假单胞菌GT31具有良好的溶解无机磷的活性以及较强的产生长素能力，在将该苔藓假单胞菌GT31用于青枯雷尔氏菌引起的青枯病的防治中时具有良好的抑制效果。制效果。制效果。

【技术实现步骤摘要】
苔藓假单胞菌GT31、其应用及所得防治剂


[0001]本专利技术涉及微生物
，尤其涉及一种苔藓假单胞菌Pseudomonas gessardii GT31、其应用及所得防治剂。

技术介绍

[0002]由青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的青枯病是最具破坏性的植物土传病害之一。随着生态农业需求的增加，防治土传病害不应完全依赖于化学肥料和农药的使用。目前已有大量研究表明植物根际微生物可以作为生防菌和促生菌用来防治植物病害和促进植物生长。以其为原料制备的微生物制剂具有环境友好、无农药残留的特点，为农业绿色发展带来积极作用，是提升植物产量和防控植物病害的有效途径。
[0003]近年来，微生物菌剂已被应用于烟草青枯病的防治中，并且取得了一定的成效。但目前使用的微生物菌剂大多为芽孢杆菌，同质化严重。事实上烟草根际存在着除芽孢杆菌外的许多种具有生防效果的细菌。因此，亟待寻找新的生防菌以丰富微生物菌剂的种类。假单胞菌广泛存在于植物根际中，多种假单胞菌被证实具有促进植物生长、防治植物病害的效果，其促生作用主要表现在具有溶磷活性、产生长素以及铁载体的能力。然而，目前并未有研究报道过苔藓假单胞菌(Pseudomonas mosselii)在防治烟草青枯病上的应用。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了一种苔藓假单胞菌Pseudomonas gessardii GT31、其应用及所得防治剂，通过对获得的苔藓假单胞菌进行促生防病能力测定，发现其具有良好的溶解无机磷的活性以及较强的产生长素能力，在将苔藓假单胞菌用于烟草青枯病的防治中时，可对青枯雷尔氏菌引起的青枯病进行有效抑制。
[0005]为了达到上述目的，本专利技术提供了一种苔藓假单胞菌Pseudomonas mosselii GT31，保藏编号为CGMCC No.25635，于2022年09月02日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。
[0006]本专利技术还提供了一种根据上述技术方案所述的苔藓假单胞菌Pseudomonas mosselii GT31在拮抗青枯雷尔氏菌Ralstonia solanacearum引起的青枯病中的应用。
[0007]作为优选，OD
600
＝0.3浓度下，接种10μL菌液，GT31产生的抑菌圈直径为1.60
±
0.05cm。
[0008]作为优选，OD
600
＝0.3浓度下，接种20μL菌液至20mL含有0.01％色氨酸的LB培养基中，28℃、180r/min振荡培养4d，GT31产生13.15μg/mL的生长素。
[0009]作为优选，所述苔藓假单胞菌Pseudomonas mosselii GT31在每盆接种浓度为4.5
×
107CFU/g时，对青枯雷尔氏菌引起的青枯病防治效果达到77.08％。
[0010]本专利技术还提供了一种烟草青枯病防治剂，以上述技术方案所述的苔藓假单胞菌Pseudomonas mosselii GT31为主要有效成分。
[0011]与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果在于：
[0012]本专利技术提供了一种苔藓假单胞菌Pseudomonas mosselii GT31，通过对获得的苔藓假单胞菌进行促生防病能力测定，发现其具有良好的溶解无机磷的活性以及较强的产生长素能力，并且首次提出了可将该苔藓假单胞菌用于烟草青枯病的防治中，且具有良好的抗病性，在每盆接种浓度为4.5
×
107CFU/g时，对青枯雷尔氏菌引起的青枯病防治效果达到77.08％。该苔藓假单胞菌的获得能够丰富现有微生物制剂的种类，既解决了长期使用化学药品对环境的污染以及对病原菌产生的抗药性，又克服了目前微生物菌剂同质化比较严重的问题。
附图说明
[0013]图1为本专利技术实施例提供的苔藓假单胞菌GT31与其他模式菌株的系统进化关系示意图；
[0014]图2为本专利技术实施例提供的苔藓假单胞菌GT31在NA培养基上菌落形态示意图；
[0015]图3为本专利技术实施例提供的不同菌株溶解无机磷和产铁载体能力测定示意图；
[0016]图4为本专利技术实施例提供的不同菌株产生长素能力测定示意图；
[0017]图5为本专利技术实施例提供的不同菌株对青枯雷尔氏菌RS10的抑制效果测定示意图；
[0018]图6为本专利技术实施例提供的不同菌株对烟草青枯病的防控效果示意图。
具体实施方式
[0019]下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0020]实施例1土壤样品采集
[0021]2020年7月从贵州遵义烟区发病烟田中采集了健康烟草根际土，将整株烟株带根挖出，抖落非根际土，将根及附着的根际土壤放入无菌自封袋，低温运回实验室进行菌株分离培养。
[0022]实施例2苔藓假单胞菌的筛选
[0023]2.1试剂：
[0024]LB固体培养基(g/L)：胰蛋白胨10.0，酵母提取物5.0，氯化钠10.0，琼脂粉20.0。
[0025]NB培养基(g/L)：蛋白胨10.0，牛肉膏3.0，氯化钠5.0，琼脂粉20.0。
[0026]PKO无机磷培养基(g/L)：葡萄糖10.0，(NH4)2SO
4 0.5，MgSO4·
7H2O 0.1，NaCl 0.2，KCl 0.2，FeSO4·
7H2O 0.003，MnSO4·
4H2O 0.03，Ca3(PO4)
2 5.0，酵母粉0.5，琼脂20.0。
[0027]蒙金娜有机磷培养基(g/L)：：葡萄糖10.0，MnSO4·
4H2O 0.03，FeSO4·
7H2O0.03，CaCO
3 5.0，(NH4)2SO
4 0.5，NaCl 0.3，KCl 0.3，蛋黄卵磷脂0.2，酵母粉0.4，琼脂20.0。
[0028]改良CAS琼脂培养基：购自北京酷来搏科技有限公司。
[0029]燕麦培养基(g/L)：燕麦30.0，琼脂20.0。
[0030]谷子培养基：谷子100g，煮至2/3开花，滤干水份。
[0031]其它生化试剂及普通化学试剂均为进口或国产分析纯。
[0032]2.2细菌的分离培养：
[0033]在无菌环境中称取采集到的1.0g烟草根际土加入9mL无菌生理盐水中，振荡混匀，吸取100μL上清液加入到900μL生理盐水中，梯度稀释至10
‑4。分别吸取10
‑2‑
10
‑4浓度的稀释液100μL涂布于LB固体培养基上。在28℃下恒温培养3d，根据菌落颜色、形态、表面光滑度等挑取不同的单菌落，经2
‑
3次划线纯本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.苔藓假单胞菌Pseudomonas mosselii GT31，其特征在于，保藏编号为CGMCC No.25635，于2022年09月02日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心。2.如权利要求1所述的苔藓假单胞菌Pseudomonas mosselii GT31在拮抗青枯雷尔氏菌Ralstonia solanacearum引起的青枯病中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，OD
600
＝0.3浓度下，接种10μL菌液，GT31产生的抑菌圈直径为1.60
±
0.05cm。4.根据权利要求2所述的应用，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏志林，朱迪，高贵，袁源，赵栋霖，郭亚利，张成省，戴辉，韩佩良，穆青，常洪斌，罗富方，
申请(专利权)人：中国农业科学院烟草研究所，
类型：发明
国别省市：