包含可辅助化疗药物高效激活免疫原性细胞死亡的大环化合物的药物组合物制造技术

本发明专利技术涉及一种包含可辅助化疗药物高效激活免疫原性细胞死亡的大环化合物的药物组合物。所述药物组合物包括至少如下式(I)的一种大环化合物和至少一种治疗癌症的药物活性物质。物质。物质。物质。

【技术实现步骤摘要】
包含可辅助化疗药物高效激活免疫原性细胞死亡的大环化合物的药物组合物


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种可辅助化疗药物高效激活免疫原性细胞死亡的大环化合物药物组合。

技术介绍

[0002]免疫原性细胞死亡(Immunogenic cell death，ICD)可原位产生癌症疫苗并引发保护性同源抗癌免疫，为癌症免疫治疗带来了光明。然而，ICD在临床上的效果却比较受限，通常具有较差的免疫原性和低反应率。这种无效的临床转化主要是由ICD诱导剂的固有局限性引起的。首先，大多数常规策略只能通过触发抗癌药物的继发性或附带作用来产生ICD相关免疫原性，从而导致引发的抗肿瘤免疫反应有限。此外，细胞毒性和免疫刺激作用是ICD诱导剂的两个固有属性，因此，单纯增加ICD诱导剂的剂量可能无法提高ICD诱导剂的免疫刺激作用，且伴随有严重的副作用。因此，能够有效增强ICD相关抗肿瘤免疫反应的创新策略或新型的ICD诱导剂对于开发安全有效的基于ICD的免疫疗法至关重要。
[0003]在过去的几十年中，包括环糊精，杯芳烃，葫芦脲和柱芳烃在内的一系列大环分子在生物医学应用中受到越来越多的关注。这些大环分子通常用作药物输送中的分子容器，以提高药物溶解度，增强药物稳定性并减少副作用。然而，可作为ICD诱导剂辅助化疗药物高效激活免疫原性细胞死亡的大环化合物至今尚未发现。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的是解决传统化疗药物ICD免疫激活能力差的问题，提供一种可辅助化疗药物高效激活免疫原性细胞死亡的大环化合物药物组合的制备方法和应用。
[0005]本专利技术首次发现了一类新型杯芳烃化合物，它们可以以极高的效率驱动真正的ICD。此外，这些分子独特的大环结构还赋予了它们通过主客体相互作用与抗癌药物结合的巨大潜力。两个功能兼具一身，使得这些大环分子成为一个相当简单的“即插即用”平台，可与各种化疗药物配合，并通过激活ICD相关的抗肿瘤免疫活性来大幅度提高传统化疗药物的抗癌性能。
[0006]本专利技术的技术方案
[0007]一种包含可辅助化疗药物高效激活免疫原性细胞死亡的大环化合物的药物组合物，包括至少式(I)的一种大环化合物和至少一种药物活性物质：
[0008][0009]其中，n为4；
[0010]R1选自H；
[0011]R2选自
‑
N(CH3)3X，其X是独立地选自BF4的抗衡离子。
[0012]所述式(I)的偶氮杯芳烃化合物选自：
[0013][0014]所述药物活性物质选自以下一种或多种治疗癌症的药物：阿霉素、紫杉醇、喜树碱、羟基喜树碱、伊立替康、拓扑替康、奥沙利铂、贝洛替康或替拉替尼。
[0015]本专利技术同时提供了式(I)中所述的大环化合物CA
‑
3的制备方法，包括：
[0016]在0度条件下，向1,4
‑
氯苯氨中逐滴滴加NaNO2的水溶液，其中1,4
‑
氯苯氨和NaNO2的摩尔比为1:1，室温搅拌至产生大量固体；抽滤固体沉淀，依次用稀HBF4水溶液、乙醇和乙醚洗涤，真空干燥，得到化合物2；
[0017]随后将化合物2溶解在乙腈溶液中，并在
‑
10度逐渐加入三甲胺，其中三甲胺与化合物2的摩尔比为1.5:1；随着反应的进行，形成乳白色沉淀，上层溶液变为黄色，再次加入三甲胺，搅拌至产生大量固体；将固体沉淀抽滤，依次用乙腈和二氯甲烷洗涤，真空干燥，得到化合物3；
[0018]接下来将C4A在冰盐浴条件下逐渐滴加到化合物3的溶液中，DMF/吡啶/水＝1.6/1/1,v/v/v，其中苯酚和C4A与化合物3的摩尔比分别为1:1和1:4；室温搅拌4小时后，将溶液混合物蒸发至干，残余物用水与丙酮混合溶液重结晶，得到定量收率的橙红色固体CA
‑
3。
[0019]本专利技术还提供了所述的大环化合物药物组合物的制备方法。
[0020]将化合物CA
‑
3溶解在DMSO中配备3mM母液，随后，在25度超声下，将1mL预制备母液逐滴加入9mLHEPES缓冲液中；超声30分钟后，得到CA
‑
3在HEPES缓冲液的纳米组装体；随后用HEPES透析除去DMSO，储存于4度以供进一步使用。
[0021]将治疗癌症的药物阿霉素、紫杉醇、喜树碱、羟基喜树碱、伊立替康、拓扑替康、奥沙利铂、贝洛替康或替拉替尼溶分别解于PBS、DMSO、甲醇或HEPES溶液中，配置1mM药物母液
备用，然后将所述药物母液与大环化合物溶液按摩尔比1:1加入到大环化合物溶液中，震荡15分钟后，制备药物组合物，放置于4度储存备用。
[0022]本专利技术首先对构效关系进行了研究，以探索这些大环分子诱导ICD的基本结构元素，以及大环分子诱导ICD的潜在机制。此外，双侧肿瘤复发实验进一步证实大环分子诱导ICD以及引发保护性同源抗癌免疫的能力。最后，通过选择CA
‑
3以及甲氨蝶呤(MTX)作为药物组合，成功触发ICD相关的免疫反应，并显著提高了MTX的抗肿瘤作用。这些研究共同证明我们发现了一类新型的ICD诱导剂(其中最有效的为CA
‑
3)，该化合物表现出多种优势：1、可以高效诱导癌细胞ICD；2、可在体内驱动真正的ICD并引发保护性同源免疫；3、可以与多种化疗药物协同作用并通过激活ICD相关的免疫反应来提高其抗癌作用。此外，本专利技术中建立的构效关系为设计和合成更有效的可辅助化疗药物高效激活免疫原性细胞死亡的大环化合物药物组合
附图说明
[0023]图1为S
‑
2和CA
‑
3的合成示意图。
[0024]图2显示PBS,PTX,CA
‑
1,CA
‑
3,CA
‑
5和CA
‑
7处理后，细胞的表面CRT暴露情况，比例尺为25μm。
[0025]图3显示乏氧条件下不同样品处理12h后细胞的表面CRT暴露，表明CA
‑
3与药物之间具有很强的协同作用，可促进CRT在细胞表面的凋亡前暴露，比例尺为25μm。
[0026]图4中a显示PBS,PTX,CA
‑
1,CA
‑
3,CA
‑
5和CA
‑
7处理后，细胞内HMGB
‑
1的分布，b显示PBS,PTX,CA
‑
1,CA
‑
3,CA
‑
5和CA
‑
7处理后细胞外HMGB
‑
1的浓度。
[0027]图5显示PBS,PTX,CA
‑
1,CA
‑
3,CA
‑
5和CA
‑
7处理后，细胞外ATP的浓度。
[0028]图6中a显示PBS,PTX,CA
‑
1,CA
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种包含可辅助化疗药物高效激活免疫原性细胞死亡的大环化合物的药物组合物，包括至少式(I)的一种大环化合物和至少一种药物活性物质：其中，n为4；R1选自H；R2选自
‑
N(CH3)3X，X是选自BF4的抗衡离子。2.如权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物活性物质为治疗癌症的药物。3.如权利要求1
‑
2中任一项所述的药物组合物，其特征在于，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘阳，郭东升，张展展，
申请(专利权)人：南开大学，
类型：发明
国别省市：