本发明专利技术利用临床用于检测肝储备功能的吲哚菁绿技术，根据其在具有肝细胞分化的细胞内有吸收，在正常肝组织代谢速度快于肝细胞癌的特点，在术后离体标本，显色荧光不同，而坏死区因为无肝细胞分化的正常或肿瘤成分，荧光无显色。创新性将该项技术，利用荧光在正常肝、肝细胞癌及坏死区的不同显像特点，应用于靶免新辅助或转化治疗后的肝细胞癌手术标本的坏死区识别，有利于临床和病理医生初步判断治疗反应，尤其有利于病理医生在荧光显像图的引导下，对大肝癌、巨块型肝癌快速精确病理取材。巨块型肝癌快速精确病理取材。
【技术实现步骤摘要】
吲哚菁绿荧光显像引导靶免治疗后肝细胞癌标本快速病理取材的方法
技术介绍
[0001]在我国，肝癌是男性第四常见恶性肿瘤，60岁前男性最常诊断且排名男性致死首位的恶性肿瘤。原发性肝癌80％以上为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)由于HCC发病隐匿，早期临床症状不明显，而我国由于乙型肝炎病毒感染患者基数大，HCC的发病率高，且约64％患者发现时已是中国肝癌分期的Ⅱ或Ⅲ期，即已处于疾病中晚期，部分患者失去手术机会，预后较差，五年内术后复发率为60
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70％，Ⅲ期患者5年生存率不足20％(Chen W,Zheng R,Baade PD,et al.Cancer statistics in China,2015.CA Cancer J Clin.2016Mar
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Apr；66(2):115
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132.；Xu XF,Xing H,Han J,et al.Risk Factors,Patterns,and Outcomes of Late Recurrence After Liver Resection for Hepatocellular Carcinoma:A Multicenter Study From China.JAMA Surg.2019Mar 1；154(3):209
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217.；夏永祥,张峰,李相成,等.原发性肝癌10 966例外科治疗分析.中华外科杂志,2021,01:6
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17.)。
[0002]近年来，免疫检查点抑制剂联合抗血管分子靶向药物(以下简称“靶免治疗”)一线治疗晚期HCC取得突破性进展，改变了HCC治疗格局，随着新辅助和转化治疗临床试验的开展，越来越多的晚期HCC有望靶免治疗后接受手术治疗。有临床研究显示靶免治疗的有效率(达到主要和完全病理缓解率)可达到40％至66.6％(Ahmed OK,et al.2020ASCO[C].Poster 4599；Sun HC,et al.ASCO 2020[C].Publication e16690)。对于切除标本的病理学评价是早期评估治疗效果以及预测预后的唯一窗口，靶免治疗疗效的主要体现就是肿瘤体积缩小，大片的坏死，伴有纤维化、出现及淋巴细胞反应等，有时也会由于出血囊性变等出现肿瘤体积变大。靶免治疗后肝癌切除标本的病理学评价仍处于探索起步阶段，多需参考借鉴已开展相关研究较多的肿瘤类型(如肺癌，Travis WD,Dacic S,Wistuba I,et al.IASLC Multidisciplinary Recommendations for Pathologic Assessment of Lung Cancer Resection Specimens After Neoadjuvant Therapy.J Thorac Oncol.2020May；15(5):709
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740.)。由于靶免治疗后的晚期HCC体积较大，国内外指南或共识推荐的“7点”基线取材法不能满足较大瘤体的充分取材。另外靶免治疗后的治疗反应一般会出现片状坏死，病理医师受到坏死区与分化差的HCC不易辨别、残留活性肿瘤组织较少及经验不足所限，在对材块选取时存在不能精准判断活性瘤组织区域的困难，如何在大片坏死的肿瘤组织中辨认出存活的肿瘤细胞，准确充分取材是目前病理学评价治疗反应的关键环节(Zhao HT,Cai JQ.Chinese expert consensus on neoadjuvant and conversion therapies for hepatocellular carcinoma.World J Gastroenterol.2021Dec 21；27(47):8069
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8080.)。
[0003]目前使用的HCC病理取材方法基于患者有无接受治疗可分为两种(原发性肝癌诊疗指南(2022年版).肝癌电子杂志,2022,01:1
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22.)：
①
未接受术前治疗：采用“7点”基线取材法，分别在肿瘤的时钟位12点、3点、6点和9点位置上于癌与癌旁肝组织交界处取材(每个位置至少1块)；在肿瘤中心区至少取材1块；对距肿瘤边缘≤1cm(近癌旁)和>1cm(远癌旁)
范围内的肝组织分别取材1块。对于单个肿瘤最大直径≤3cm的肿瘤，应全部取材。
②
接受过术前新辅助或转化治疗的标本：准确测量肿瘤三维径线，≤3cm肿瘤全部取材，＞3cm肿瘤每隔0.5cm
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1cm切开肿瘤，仔细观察切面性状与质地，选择不同性状与质地的肿瘤组织；镜下观察后若未发现肿瘤残存，无论大小，则需对肿瘤全部取材。在实际工作中，从取材到制片再到病理医生的显微镜下观察需要至少三天的时间，再加上取材块数多，制片和阅片的时间更长。如果患者存在病理完全缓解的可能，就需要进行二次取材，时间上将大大拖后，而且根据肿瘤的体积，取材块数需要大约几十至上百不等，患者还要对免疫组化、甚至分子检测等付费，如果患者的瘤体积较大，术前靶免治疗反应又很好的情况下，患者可能需要支付上万元的病理费用，增加了病理科的耗材，延长了患者的病理报告时限。这对于即将推出的DRG单病种收费政策将是占比很高的支出，不利于HCC单病种的推行。
[0004]当前，靶免治疗中晚期HCC显示出较好的结果前景，大约一半患者预计达到主要病理缓解以上的疗效，这将是对病理评估的一大挑战。如能预先判断瘤床区是否有残存活性肿瘤组织将会大大减少上述消耗和患者的费用。目前术前CT或MRI等影像学资料仅能大致判断肿瘤位置和大小，无法对于是否有残存活性瘤细胞、坏死区域占比等病理关注的问题提供具体信息。吲哚菁绿(indocyanine green，ICG)是一种近红外荧光染料，可被波长范围在750～810nm的光所激发，发射波长840nm左右的近红外光，经过特殊的接收装置则可显示荧光或彩色荧光(方驰华,LU Qiping,LAUWanyee.计算机辅助联合吲哚菁绿分子荧光影像技术在肝脏肿瘤诊断和手术导航中的应用指南(2019版)(英文).南方医科大学学报,2019,10:1127
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1140.；FAN Z,ZONG J,LAU W Y,et al.Indocyanine green and its nanosynthetic particles for the diagnosis and treatment of hepatocellular carcinoma.Am J Transl Res,2020,12(6):2344
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2352.)。在医学上，ICG做为诊断用药，因其可经肝脏代谢，临床广泛应用于肝脏储备功能检查和肝有效血流量检测。当肝脏出现癌灶、肝硬化结节及炎性改变等时，相对于周围正常肝脏组织的快速排泄，病灶处ICG滞留，而持续呈现荧光(ISHIZAWA T,FUKUSHIMA N,SHIBAHARA J,et al.Real
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基于吲哚菁绿荧光显像引导靶免治疗后肝细胞癌标本快速病理取材的方法，包括如下步骤：对来自患有肝细胞癌肿瘤的患者有肝组织标本，在荧光腹腔镜探头的照射下，根据肉眼观察是否存在荧光，病理医生结合肿瘤的切面性状，在根据国家推荐指南的规范化取材的前提下，利用荧光显像进行更加精准高效的病理取材，荧光区判定是肿瘤，无荧光区判定为坏死；其中，所述患者在术前7
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10天静脉注射吲哚菁绿；所述肝组织样本是根据术中切除患者的肝细胞癌瘤块及周围区段的肝组织，且沿肿瘤最大面剖开离体的标本。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光腹腔镜是欧谱曼迪，4K高清荧光，且探头与切面的距离20
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40cm。3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，通过荧光腹腔镜探头照射后于显像仪屏幕上保存图片，标注肿瘤的大切面及周围肝组织是否有荧光。4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所切取的标本于半小时内完成预处理：沿肿瘤已剖开的最大面，每隔1cm平行多切面切开...
【专利技术属性】
技术研发人员：鲁海珍，王宏光，赵宏，郑波，蒙轩，杨惠茹，
申请(专利权)人：中国医学科学院肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：
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