用于非小细胞肺癌CYFRA21-1检测的电化学免疫传感器及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种用于非小细胞肺癌CYFRA21

【技术实现步骤摘要】
用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器及检测方法


[0001]本专利技术涉及电化学检测
，具体涉及以金纳米粒子修饰的锆基金属有机框架、CYFRA21
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1电化学免疫传感器的制备方法及检测方法。

技术介绍

[0002]原发性支气管肺癌（Primary bronchial lung cancer）简称肺癌（Lung Cancer），是指原发于气管、支气管和肺的恶性肿瘤。据流行病学调查研究显示，肺癌是全球发病率和病死率最高的恶性肿瘤，多好发于男性，且发病率和病死率均居首位；而在女性人群中，其发病率仅次于乳腺癌居第2位，病死率仍位居首位。肺癌根据其分化程度、形态特征和生物学特点主要分为小细胞肺癌（small cell lung cancer, SCLC）和非小细胞肺癌（non
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small cell lung cancer, NSCLC）两种主要亚型。而大约85%的肺癌被归类为非小细胞肺癌(NSCLC)，主要包括鳞状细胞癌(SCC)、肺腺癌(LAD)和大细胞癌(LCC)。肺癌是所有癌症中死亡率最高的，且肺癌的预后很差，由于75％的患者在就诊时已是晚期，故三年生存率低于20％。因此，针对非小细胞肺癌采取有效的早期诊断方法具有重要意义。
[0003]目前，检测 NSCLC的方法主要包括基因诊断、放射性核素扫描 、计算机断层扫描（CT）、磁共振成像（MRI）和正电子发射断层扫描（PET）、超声内镜检查纵隔镜、胸腔镜的检查痰细胞学检查等。然而，这些方法通常需要专门的大型仪器、专业的操作人员、高费用和长时间，这限制了在初级医疗机构和发展中国家对NSCLC的早期诊断。因此，需要寻找一种快速、简便和经济的方法辅助诊断肺癌，提高肺癌的确诊率。
[0004]研究发现，细胞角蛋白片段19抗原21
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1 CYFRA21
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1在非小细胞肺癌早期诊断中具有临床意义。在血清CYFRA21
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1水平＞3.3 ng/mL即可诊断为NSCLC。电化学免疫传感器是利用抗原和抗体间的高度特异性结合的原理，将免疫分析法和电化学传感技术相结合构建而成的一项新方法，因为传感器具有灵敏度高、分析速度快、操作简便、低成本、低能耗等特点，被广泛应用于临床诊断领域。现今，基于免疫分析法结合免疫传感器的研制成为检测肿瘤标志物的技术。大量研究用于研发操作简便易行的传感器。寻求一种更加简便，灵敏度更高，选择性更好的检测方法仍然是现代医学检验和生物医学研究领域的研究热点。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器。
[0006]除特殊说明外，本专利技术所述份数均为重量份，所述百分比均为质量百分比。
[0007]为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器，其特征在于，所述构建用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器的方法为：将MB/PEI溶液滴加到清洁的玻碳电极表面上，室温干燥后再将KB/PEI
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AuNPs分散液滴加到电极
表面，室温干燥，将Ab1滴加在电极上，4
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5℃冰箱过夜孵育12
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13h；用DEPC水冲洗干净后滴加1% 牛血清蛋白（BSA）溶液4
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5℃孵育40
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45 min；最后将获得的电极用DEPC水冲洗干净后，滴加PCN222(Fe)/AuNPs/Ab2信号探针溶液于室温孵育1
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2h，即得到用于CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器；所述PCN222(Fe)/AuNPs/Ab2信号探针溶液的制备方法为：向PCN222(Fe)/AuNPs分散液中加入的CYFRA21
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1的多克隆抗体Ab2，冰浴搅拌 12
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13 h形成复合物，离心和洗涤后将复合物重新溶解在PBS溶液中，形成PCN222(Fe)/AuNPs/Ab2信号探针溶液；所述PCN222(Fe)/AuNPs分散液的制备方法为：PCN222(Fe)溶解于超纯水中，超声至分散均匀，加入AuNPs，置于搅拌器上常温搅拌4
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5 h，离心、洗涤，再将沉淀物分散在超纯水中，得到PCN222(Fe)/AuNPs分散液；所述PCN222(Fe) 的制备方法为：DMF中加入氯化锆、冰醋酸和H2O，再加入Fe
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TCPP，室温下保持磁力搅拌10
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12分钟，将得到的溶液转移到反应釜中，然后在120
‑
130 ℃下反应18
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20小时；然后在10000
‑
12000转/分的条件下离心10
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12分钟，然后用乙醇洗涤，60℃烘箱中干燥，得到棕色的粉末为PCN222(Fe)；所述KB/PEI
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AuNPs的基底材料分散液的制备方法为：将AuNPs溶液加入到KB/PEI分散液中，然后在室温下搅拌4
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5 h，离心、洗涤，再将沉淀物分散在超纯水中，得到KB/PEI
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AuNPs的基底材料分散液；所述KB/PEI溶液的制备方法为: 将KB加入超纯水中，超声溶解后加入1%的PEI溶液，磁力搅拌4
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5 h后，用超纯水离心、洗涤两次后，得到分散均匀的KB/PEI溶液。
[0008]所述AuNPs的制备方法为：将1% HAuCl4溶液加入至超纯水中煮沸，然后加入1% 柠檬酸三钠溶液继续煮沸15分钟，冷却后用超纯水恢复至原体积得透明的酒红色溶液即为纳米金 (AuNPs)。
[0009]一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器，其特征在于，所述构建用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器的方法包括如下步骤：（1）信号探针的制备；1）PCN222(Fe)：在2mL DMF中加入10 mg氯化锆、240 μL冰醋酸和50 μL H2O；然后，加入10 mg的Fe
‑
TCPP，在室温下保持磁力搅拌10分钟；将得到的溶液转移到反应釜中，然后在120℃下加热反应18小时；在10000转/分的条件下离心10分钟，然后用乙醇洗涤3次，最后在60摄氏度烘箱中干燥，得到棕色的粉末；2）AuNPs的制备：将1 mL 1% HAuCl4溶液加入至100 mL超纯水中煮沸，然后迅速加入2.5 mL 1% 柠檬酸三钠溶液继续煮沸15分钟，冷却后用超纯水恢复至原体积得透明的酒红色溶液即为纳米金 (AuNPs)；3）PCN222(Fe)/AuNPs：取1 mg步骤1）制备的PCN222(Fe)溶解于1mL超纯水中，超声至分散均匀后加入500 ul步骤2）制备本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器，其特征在于，所述构建用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器的方法为：将MB/PEI溶液滴加到清洁的玻碳电极表面上，室温干燥后再将KB/PEI
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AuNPs分散液滴加到电极表面，室温干燥，将Ab1滴加在电极上，4
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5℃冰箱过夜孵育12
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13h；用DEPC水冲洗干净后滴加1％牛血清蛋白(BSA)溶液4
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5℃孵育40
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45min；最后将获得的电极用DEPC水冲洗干净后，滴加PCN222(Fe)/AuNPs/Ab2信号探针溶液于室温孵育1
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2h，即得到用于CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器；所述PCN222(Fe)/AuNPs/Ab2信号探针溶液的制备方法为：向PCN222(Fe)/AuNPs分散液中加入的CYFRA21
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1的多克隆抗体Ab2，冰浴搅拌12
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13h形成复合物，离心和洗涤后将复合物重新溶解在PBS溶液中，形成PCN222(Fe)/AuNPs/Ab2信号探针溶液；所述PCN222(Fe)/AuNPs分散液的制备方法为：PCN222(Fe)溶解于超纯水中，超声至分散均匀，加入AuNPs，置于搅拌器上常温搅拌4
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5h，离心、洗涤，再将沉淀物分散在超纯水中，得到PCN222(Fe)/AuNPs分散液；所述PCN222(Fe)的制备方法为：DMF中加入氯化锆、冰醋酸和H2O，再加入Fe
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TCPP，室温下保持磁力搅拌10
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12分钟，将得到的溶液转移到反应釜中，然后在120
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130℃下反应18
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20小时；然后在10000
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12000转/分的条件下离心10
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12分钟，然后用乙醇洗涤，60℃烘箱中干燥，得到棕色的粉末为PCN222(Fe)；所述KB/PEI
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AuNPs的基底材料分散液的制备方法为：将AuNPs溶液加入到KB/PEI分散液中，然后在室温下搅拌4
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5h，离心、洗涤，再将沉淀物分散在超纯水中，得到KB/PEI
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AuNPs的基底材料分散液；所述KB/PEI溶液的制备方法为:将KB加入超纯水中，超声溶解后加入1％的PEI溶液，磁力搅拌4
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5h后，用超纯水离心、洗涤两次后，得到分散均匀的KB/PEI溶液。2.如权利要求1所述的电化学免疫传感器，其特征在于，所述AuNPs的制备方法为：将1％HAuCl4溶液加入至超纯水中煮沸，然后加入1％柠檬酸三钠溶液继续煮沸15分钟，冷却后用超纯水恢复至原体积得透明的酒红色溶液即为纳米金(AuNPs)。3.如权利要求1所述的电化学免疫传感器，其特征在于，所述MB/PEI溶液的制备方法为:将MB加入超纯水中，超声至分散均匀后加入1％的PEI溶液，磁力搅拌2h后得到分散均匀的MB/PEI溶液。4.一种用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器，其特征在于，所述构建用于非小细胞肺癌CYFRA21
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1检测的电化学免疫传感器的方法包括如下步骤：(1)信号探针的制备；1)PCN222(Fe)：在2mL DMF中加入10mg氯化锆、240μL冰醋酸和50μL H2O；然后，加入10mg的Fe
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TCPP，在室温下保持磁力搅拌10分钟；将得到的溶液转移到反应釜中，然后在120℃下加热反应18小时；在10000转/分的条件下离心10分钟，然后用乙醇洗涤3次，最后在60摄氏度烘箱中干燥，得到棕色的粉末；2)AuNPs的制备：将1mL 1％HAuCl4溶液加入至100m...

【专利技术属性】
技术研发人员：白丽娟，符琳，卿敏，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：