一种新冠病毒特异性结合的复合体及载物体制造技术

本发明专利技术公开了一种新冠病毒特异性结合的复合体及载物体，复合体包括介孔二氧化硅包裹体和门控适配体，其中，介孔二氧化硅包裹体具有分布于表面的孔；所述门控适配体包括双链DNA和金纳米颗粒，所述双链DNA具有一条N蛋白适配体及一条互补链，所述金纳米颗粒连接在介孔二氧化硅包裹体与N蛋白适配体之间，且所述金纳米颗粒封堵介孔二氧化硅包裹体的孔。本发明专利技术基于N蛋白适配体与N蛋白得到特异性结合特征，可以达到对内容物的靶向输送的目的，同时还可以对内容物及外部环境进行保护，避免内容物在输送至目的区域前失效的问题，以及内容物暴露于无关环境后对无关环境本身所处状态产生负面影响。生负面影响。生负面影响。

【技术实现步骤摘要】
一种新冠病毒特异性结合的复合体及载物体


[0001]本专利技术属于生物化学
，特别涉及一种新冠病毒特异性结合的复合体及载物体。

技术介绍

[0002]2019年以来，新冠病毒(2019
‑
nCoV)肆虐以来，人们对新冠病毒的研究就一直未停止过。新冠病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)有四种主要的结构蛋白：刺突蛋白(Spike protein，S蛋白)，核衣壳蛋白(Nucleocapsid，N蛋白)，膜蛋白(Membrane protein，M蛋白)，包膜蛋白(Envelope protein，E蛋白)。S蛋白是冠状病毒非常重要的表面蛋白，与病毒的传染能力密切相关，S蛋白包含S1、S2和受体结合域(RBD)。
[0003]N蛋白(Nucleocapsid Protein)是病毒的核衣壳蛋白，它具有两个RNA结合结构域起到保护基因组的作用。同时，N蛋白相对保守，在病毒的结构蛋白中所占比例最大，感染早期机体就能产生抗N蛋白的高水平抗体。
[0004]基于现有对于新冠病毒上N蛋白的研究，如何通过基于对与N蛋白的识别来提供高现有诊断、排查或治疗的效果是十分重要的。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对现有技术的问题，提供一种新冠病毒特异性结合的复合体及载物体，具体技术方案如下：
[0006]本专利技术的新冠病毒特异性结合的复合体包括介孔二氧化硅包裹体和门控适配体。
[0007]其中，介孔二氧化硅包裹体具有分布于表面的孔；
[0008]所述门控适配体包括双链DNA和金纳米颗粒，所述双链DNA具有一条N蛋白适配体及一条互补链，所述金纳米颗粒连接在介孔二氧化硅包裹体与N蛋白适配体之间，金纳米颗粒封堵介孔二氧化硅包裹体的微孔。
[0009]N蛋白适配体一端标记有巯基，可以与金纳米颗粒结合，然后与羧基修饰的互补链杂交，形成双链DNA(ds
‑
DNA)寡核苷酸，将ds
‑
DNA与RDV负载和氨基功能化的介孔二氧化硅反应，关闭中空通道(介孔)，获得金纳米颗粒(MSNs
‑
Au)封装的介孔二氧化硅，当MSNs
‑
Au与N蛋白相互识别后，金纳米颗粒修饰的适配体与N蛋白结合离开介孔二氧化硅，打开介孔二氧化硅的中空通道。介孔二氧化硅的中空通道内可以特异性封闭一些物质，以实现这些物质的保护，避免特殊的环境对介孔二氧化硅的内容物产生不利影响或内容物对外部环境产生不利影响，例如破坏非新冠病毒所处环境的原生态环境，或者未接触到新冠病毒时，内容物部分或全部失效。
[0010]优选的，所述N蛋白适配体的DNA序列为：
[0011]5’‑
GCTGGATGTC GCTTA CGACAATATT CCTTA GGGGC
[0012]ACCGC TACAT TGACA CATCCAGC
‑
SH
‑3’
。
[0013]优选的，所述互补链的DNA序列为：
[0014]5’‑
COOH
‑
TTGTACTGGC TCATAGCTGGATGTG TCAAT GTAGC
[0015]GGTGC CCCTAAGGAA TATTG TCGTAAGCG
‑3’
。
[0016]优选的，介孔二氧化硅包裹体的表面具有氨基，氨基是对介孔二氧化硅包裹体进行的功能性修饰。
[0017]优选的，所述复合体的介孔二氧化硅包裹体内包含有内容物，内容物以复合体为载体达到针对新冠病毒的靶向目的，例如内容物可以治疗的药物、检测的试剂等。
[0018]本专利技术的有益效果为：本专利技术基于N蛋白适配体与N蛋白得到特异性结合特征，设计出特异性结合的复合体，可以达到对内容物的靶向输送的目的，同时还可以对内容物及外部环境进行保护，避免内容物在输送至目的区域前失效的问题，以及内容物暴露于无关环境后对无关环境本身所处状态产生负面影响。
附图说明
[0019]图1为MSN
‑
Au与N蛋白特异性结合的模型示意图；
[0020]图2为ds
‑
DNA的琼脂糖凝胶电泳图；
[0021]图3为介孔二氧化硅的透射电镜图像(A和B)，氮气吸附解吸等温线(C)和孔隙尺寸分布(D)，MSNs
‑
HN2的红外图像(E)，氨基标准曲线的荧光定量检测(F)；
[0022]图4为介孔二氧化硅的扫描电镜图像；
[0023]图5为RDV的三维原理图；
[0024]图6为固体MSN和MSN
‑
NH2的粉末x射线图；
[0025]图7为不同浓度RDV的紫外
‑
可见光谱(A)以及UV
‑
vis强度与RDV浓度的相关性(B)；
[0026]图8为RDV浓度的紫外
‑
可见吸收图(A)，MSN
‑
Au的TEM图像(B)，以及MSN
‑
Au与N蛋白结合后的TEM图像(C)；
[0027]图9为在没有N蛋白、存在2μM N蛋白及RDV负载金纳米颗粒修饰的介孔二氧化硅的情况下，从MSN
‑
Au释放RDV的时间的优化；
[0028]图10为N蛋白适配体对目标蛋白的选择性；
[0029]图11为干扰物质和N蛋白分别与MSN
‑
Au溶液反应后，RDV在溶液中的紫外
‑
可见吸收峰；
[0030]图12为志愿者的基本特征；
[0031]图13为在相同浓度和相同体积的MSN
‑
Au溶液中加入含有不同浓度的N蛋白的全血，得到了RDV的紫外吸收峰；
[0032]图14为不同浓度N蛋白与MSN
‑
Au结合的紫外
‑
可见光谱(A)以及RDV的紫外
‑
可见度与N蛋白浓度的相关性(B)；
[0033]图15为人血液样本中N蛋白诱导的RDV信号的恢复结果(n＝3)。
具体实施方式
[0034]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本专利技术技术方案进行清楚、完整地描述。
[0035]瑞德西韦(Remdesivir)，是一种核苷类似物，具有抗病毒活性，在HAE细胞中，对SARS
‑
CoV和MERS
‑
CoV的EC50值为74nM，在延迟脑肿瘤细胞中，对鼠肝炎病毒的EC50值为
30nM。
[0036]目前，瑞德西韦(RDV)已被临床证明对治疗SARS
‑
CoV
‑
2有效。然而，不确定的副作用使得在减少药物的同时，确保治愈效果的使用很重要。2020年5月7日，日本批准了美国吉利德科技公司研发的瑞德西韦作为国内首款新冠肺炎治疗药物，将被用于重症患者治疗。202本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新冠病毒特异性结合的复合体，其特征在于，具有：介孔二氧化硅包裹体，具有分布于表面的孔；门控适配体，所述门控适配体包括双链DNA和金纳米颗粒，所述双链DNA具有一条N蛋白适配体及一条互补链，所述金纳米颗粒连接在介孔二氧化硅包裹体与N蛋白适配体之间，且所述金纳米颗粒封堵介孔二氧化硅包裹体的孔。2.根据权利要求1所述的一种新冠病毒特异性结合的复合体，其特征在于，所述N蛋白适配体的DNA序列为：5
’‑
GCTGG ATGTC GCTTA CGACAATATT CCTTA GGGGCACCGC TACAT TGACA CATCC AGC
‑
SH

【专利技术属性】
技术研发人员：张欣，张晓辉，
申请(专利权)人：张欣，
类型：发明
国别省市：