重组链球菌及其构建方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种重组链球菌及其构建方法与应用，涉及基因编辑技术领域。本发明专利技术采用同源重组技术敲除了猪败血性链球菌弱毒株ST

【技术实现步骤摘要】
重组链球菌及其构建方法与应用


[0001]本专利技术涉及基因编辑
，尤其涉及一种重组链球菌及其构建方法与应用。

技术介绍

[0002]猪圆环病毒Ⅲ型(Porcinecircovirus 3，PCV3)是圆环病毒科圆环病毒属的一种无囊膜、共价闭环单股负链DNA病毒(ssDNA)，是目前为止发现的所有动物病毒中最小的之一。2016年前，全球范围内仅发现PCV1和PCV2两个基因型。其中，PCV1被认为是猪肾细胞PK
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15污染物，但不产生细胞病变效应，对猪无致病性。PCV2是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)主要病原，与猪皮炎和肾病综合征(PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、繁殖障碍、增生性坏死性肺炎(PNP)和肠炎等疾病密切相关，均为猪圆环病毒相关疾病 (PCVAD)。2015年6月，美国北卡罗来纳州某商品化猪场暴发PDNS疫情，与历史平均值相比，该猪场母猪死亡率升高10.2％、受孕率下降0.6％。患病母猪厌食、皮肤呈现多灶性丘疹、斑点和浅表性皮炎，所产胎儿(包括弱胎、死胎、木乃伊胎)具有相似临床症状。Pal本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于敲除猪败血性链球菌中hasB基因的引物，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.1～4所示。2.用于敲除猪败血性链球菌中hasB基因的质粒的构建方法，其特征在于，包括：提取猪败血性链球菌的基因组DNA，采用如权利要求1所述的引物扩增hasB上下同源臂片段；将hasB上下同源臂片段连接至载体pG
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host5中，即得到pG
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host5ΔhasB质粒。3.敲除hasB基因的猪败血性链球菌的构建方法，其特征在于，包括采用如权利要求2所述的构建方法所构建的质粒转染猪败血性链球菌。4.一种重组链球菌的构建方法，其特征在于，包括：构建敲除hasB基因的猪败血性链球菌；构建包含有敲除hasB基因的猪败血性链球菌中Szp基因上下同源臂片段和猪圆环病毒3型的Cap蛋白的编码序列的重组载体；将所述重组载体转化至所述敲除hasB基因的猪败血性链球菌中进行同源重组。5.如权利要求2、3或4所述的构建方法，其特征在于，所述猪败血性链球菌为ST
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弱毒菌株。6.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述猪圆环病毒3型的Cap蛋白的编码序列如SEQ ID No.5所示。7.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述构建包含有敲除hasB基因的猪败血性链球菌中Szp基因上下...

【专利技术属性】
技术研发人员：付强，夏怡，徐建琦，赵贤杰，郭健锋，林梓华，胡俊冶，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：