一种蜂房活性成分的制备和分析方法技术

本发明专利技术公开了一种蜂房活性成分的制备和分析方法，首先将蜂房晾干后打粉，进行有机溶剂提取；然后提取物进行有机溶剂萃取；对萃取物分离，分离纯化，得到单体化合物并经核磁共振鉴定结构。通过DPPH自由基清除实验和LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症NO抑制实验，检测出具有抗氧化活性和抗炎活性的化合物；采用高效液相色谱分析了黄脚胡蜂酯部位的指纹图谱并开发了活性成分的分析方法，评估了不同蜂房与黄脚胡蜂蜂房的成分相似度。以酰胺类化合物为蜂房质量控制成分，对虎贞清风胶囊进行质量分析。本发明专利技术开发了蜂房的抗氧化和消炎镇痛活性成分的制备与分析方法，可应用于蜂房质量分析和预防、治疗痛风性关节炎的药物开发。治疗痛风性关节炎的药物开发。治疗痛风性关节炎的药物开发。

【技术实现步骤摘要】
一种蜂房活性成分的制备和分析方法


[0001]本专利技术属于医药领域，涉及一种蜂房中活性成分的制备和分析方法。

技术介绍

[0002]蜂房是胡蜂科昆虫果马蜂Polistes olivaceous(DeGeer)、日本长脚胡蜂Polistes japonicus Saussure或异腹胡蜂Parapolybia varia Fabricius等的巢。中医上可以入药，常与其他中药配伍，具有祛风除湿，消炎镇痛等功效，主要应用于治疗龋齿牙痛，痤疮和乳腺炎等疾病。现代研究表明蜂房中含有黄酮类、酰胺类、萜类以及高级脂肪酸成分，药理实验证明蜂房提取物具有消炎止痛、抗栓通脉、止痒消肿和抗肿瘤等生物活性。
[0003]蜂房具有悠久的药用历史，《神农本草经》中，谓之“味苦平，主惊痫瘈疭，寒热邪气，癫疾，鬼精，蛊毒肠痔”等。目前，根据蜂房的药用活性，对蜂房已进行了大量的研究，开发出了虎贞清风胶囊、肺心夏治胶囊、麝香风湿片、慈丹胶囊和香鹿益阳胶囊等药物；中国专利CN109722354A公布了一种蜂房提取物抑菌皂及其制备方法，对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和铜绿假单胞菌均有抑制作用。中国专利CN113679742A公开了一种蜂房醇提物的制备方法及应用，该醇提物具有降尿酸的作用，可用于预防、治疗高尿酸血症和痛风。中国专利CN106806477A公开了一种治疗风湿骨痛的蜂房煎液的制备方法，对风湿骨痛，关节痛、腰腿痛具有治疗效果，可应用于相关药物开发；中国专利CN104474207A公开了一种含有野蜂房的治疗扭伤的中药组合物的制备方法和应用，对扭伤患者具有低剂量、高活性的治疗效果，且副作用小；中国专利CN105560521A公开一种三黄蜂房治疗疔疮的中药组合物的制备方法，该中药组合物具有止痛消散、拔毒提脓的功效。蜂房含有丰富的活性成分，已对蜂房的活性提取物进行了大量的开发，但对于蜂房有效成分的开发还不够深入，质量研究还不够全面。为了进一步对蜂房中的活性成分进行开发，研究活性单体化合物的制备和分析方法，将为蜂房质量分析和药物研发提供参考。

技术实现思路

[0004]本专利技术公开了一种蜂房中活性成分的制备和分析方法，具体为蜂房中抗氧化活性和抗炎活性成分的制备和分析方法。
[0005]本专利技术的采用的方法如下：
[0006]一种蜂房活性成分的制备方法，包括以下步骤：
[0007](1)取晾干的蜂房，采用有机溶剂结合超声提取，收集提取液经浓缩得到提取物；
[0008](2)将提取物用有机溶剂萃取，收集浓缩得到萃取物；
[0009](3)运用活性指导，采用柱色谱层析、高效液相制备纯化得到活性化合物。
[0010]进一步地，
[0011]在所述步骤(1)中，首先需要将晾干的蜂房粉碎后过20目药筛，然后加入8倍体积的有机溶剂50％甲醇水溶液进行浸泡24h后超声1h，共提取三次，浓缩后得到提取物。
[0012]进一步地，
[0013]在所述步骤(2)中，将提取物溶于8倍重量的纯水中，用有机溶剂乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯萃取部位和水部位。
[0014]进一步地，
[0015]对所述步骤(3)中获得的活性化合物进行DPPH清除实验和LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症NO抑制实验，检测出具有抗氧化活性和抗炎活性的化合物。
[0016]进一步地，
[0017]检测出的具有抗氧化活性和抗炎活性的化合物1
‑
5，分别为：山奈酚(1)，槲皮素(2)，
[0018]trans
‑2‑
(3',4'
‑
dihydroxyphenyl)
‑3‑
acetylamino
‑7‑
(N
‑
acetyl
‑
2"
‑
aminoethyl)
‑
1,4
‑
ben zodioxane(3)，
[0019]trans
‑2‑
(3',4'
‑
dihydroxyphenyl)
‑3‑
acetylamino
‑6‑
(N
‑
acetyl
‑
2"
‑
aminoethyl)
‑
1,4
‑
ben zodioxane(4)，
[0020]trans
‑2‑
(3',4'
‑
dihydroxyphenyl)
‑3‑
acetylamino
‑7‑
(N
‑
acetyl
‑
2"
‑
aminoethylene)
‑
1,4
‑
benzodioxane(5)；
[0021]化合物1
‑
5的结构式分别为：
[0022][0023]一种蜂房活性成分的分析方法，包括以下步骤：
[0024](1)取晾干的蜂房，采用有机溶剂结合超声提取，收集提取液经浓缩得到提取物；
[0025](2)将提取物用有机溶剂萃取，收集浓缩得到萃取物；
[0026](3)运用活性指导，采用柱色谱层析、高效液相制备纯化得到活性化合物；
[0027](4)结合不同蜂房的特征成分和蜂房代表性药物虎贞清风胶囊的有效成分，建立蜂房的HPLC质量分析方法。
[0028]进一步地，
[0029]在所述步骤(1)中，首先需要将晾干的蜂房粉碎后过20目药筛，然后加入8倍体积的有机溶剂50％甲醇水溶液进行浸泡24h后超声1h，共提取三次，浓缩后得到提取物。
[0030]进一步地，
[0031]在所述步骤(2)中，将提取物溶于8倍重量的纯水中，用有机溶剂乙酸乙酯进行萃
取，得到乙酸乙酯萃取部位和水部位。
[0032]进一步地，
[0033]对所述步骤(3)中获得的活性化合物进行DPPH清除实验和LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症NO抑制实验，检测出具有抗氧化活性和抗炎活性的化合物1
‑
5，经核磁共振鉴定分别为：山奈酚(1)，槲皮素(2)，
[0034]trans
‑2‑
(3',4'
‑
dihydroxyphenyl)
‑3‑
acetylamino
‑7‑
(N
‑
acetyl
‑
2"
‑
aminoethyl)
‑
1,4
‑
ben zodioxane(3)，
[0035]trans
‑2‑
(3',4'
‑
dihydroxyphenyl)
‑3‑
acetylamino
‑6‑
(N
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种蜂房活性成分的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取晾干的蜂房，采用有机溶剂结合超声提取，收集提取液经浓缩得到提取物；(2)将提取物用有机溶剂萃取，收集浓缩得到萃取物；(3)运用活性指导，采用柱色谱层析、高效液相制备纯化得到活性化合物。2.根据权利要求1所述的蜂房活性成分的制备方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，首先需要将晾干的蜂房粉碎后过20目药筛，然后加入8倍体积的有机溶剂50％甲醇水溶液进行浸泡24h后超声1h，共提取三次，浓缩后得到提取物。3.根据权利要求1所述的蜂房活性成分的制备方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，将提取物溶于8倍重量的纯水中，用有机溶剂乙酸乙酯进行萃取，得到乙酸乙酯萃取部位和水部位。4.根据权利要求1所述的蜂房活性成分的制备方法，其特征在于，对所述步骤(3)中获得的活性化合物进行DPPH清除实验和LPS诱导的RAW 264.7细胞炎症NO抑制实验，检测出具有抗氧化活性和抗炎活性的化合物。5.根据权利要求1所述的蜂房活性成分的制备方法，其特征在于，步骤(3)中所述活性化合物分别为：山奈酚(1)，槲皮素(2)，trans
‑2‑
(3',4'
‑
dihydroxyphenyl)
‑3‑
acetylamino
‑7‑
(N
‑
acetyl
‑
2"
‑
aminoethyl)
‑
1,4
‑
ben zodioxane(3)，trans
‑2‑
(3',4'
‑
dihydroxyphenyl)
‑3‑
acetylamino
‑6‑
(N
‑
acetyl
‑
2"
‑
aminoethyl)
‑
1,4
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ben zodioxane(4)，trans
‑2‑
(3',4'
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dihydroxyphenyl)
‑3‑
acetylamino
‑7‑
(N
‑
acetyl
‑
2"
‑
aminoethylene)
‑
1,4
‑
benzodioxane(5)；化合物1
‑
5的结构式分别为：6.一种蜂房活性成分的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取晾干的蜂房，采用有机溶剂结合超声提取，收集提取液经浓缩得到提取物；(2)将提取物用有机溶剂萃取，收集浓缩得到萃取物；(3)运用活性指导，采用柱色谱层析、高效液相制备纯化得到活性化合物；
(4)结合不同蜂房的特征成分和蜂房代表性药物虎贞清风胶囊的有效成分，建立蜂房的HPLC质量分析方法。7.根据权利要求6所述的蜂房活性成分...

【专利技术属性】
技术研发人员：王一飞，刘涛，曾禧铭，叶翠芳，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：