抗原纳米颗粒及其制备方法和疫苗制备应用技术

本发明专利技术提供了一种抗原纳米颗粒及其制备方法和疫苗制备应用，涉及生物技术领域。本发明专利技术提供的抗原纳米颗粒包括抗原和聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐

【技术实现步骤摘要】
抗原纳米颗粒及其制备方法和疫苗制备应用


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其是涉及一种抗原纳米颗粒及其制备方法和疫苗制备应用。

技术介绍

[0002]艾滋病是由感染人类免疫缺陷病毒引起的一种重大传染病，该病毒攻击人体免疫系统，主要杀伤在人体免疫系统中起重要作用的CD4
+
辅助T淋巴细胞，导致免疫缺陷，从而削弱人体对许多感染和某些癌症的防御能力，最终导致死亡。自1985年发现第一例艾滋病病毒感染者以来，新感染人数逐年上升，且死亡率高，凸显了现今艾滋病预防和治疗面临的巨大压力和困境。
[0003]目前，针对艾滋病尚未开发出有效的疫苗，尽管高效抗逆转录病毒治疗可以有效抑制HIV
‑
1复制，并成功应用于临床治疗，但是HIV
‑
1感染潜伏特性导致抗病毒药物无法彻底清除HIV
‑
1感染者体内病毒，同时长期服药后副作用较大且容易产生耐药性。艾滋病疫苗的研发面临许多挑战，包括由病毒通过逆转录将其基因组整合到宿主细胞的染色体导致不能清除的潜伏感染、杀伤免疫系统的重要CD4
+
辅助T淋巴细胞，高度遗传变异性，不能诱导广谱中和抗体免疫反应等。虽然科学家们已试尝试过各种疫苗研究的方法，但仍未研制出成功的艾滋病疫苗。近来国际上获得的几种类似天然状态的三聚体如SOSIP.664、NFL trimer、UFO trimer等能够分别在豚鼠、家兔和猴体内产生自体2层次毒株的中和反应。这表明天然Env结构在诱导广谱中和反应中发挥了重要作用。/>[0004]然而，目前HIV包膜蛋白三聚体疫苗设计存在如下缺点：
[0005]1.需要长时间、多次免疫才能诱导一定水平中和抗体滴度；
[0006]2.依赖免疫佐剂增强免疫反应；
[0007]3.无法诱导高滴度的广谱中和抗体。
[0008]疫苗佐剂材料对于研发有效的疫苗具有至关重要的作用，它可以作为免疫增强剂显著提高病毒抗原的免疫原性从而提高疫苗的免疫保护功能。自上世纪20年代以来，仅有6种佐剂(铝佐剂、MF59、AS01、AS03、AS04、和CpG 1018)被批准上市，因此探索创新性的潜在佐剂分子增加病毒抗原的免疫反应性，以及延长免疫反应时间，即免疫记忆力，将有助于广谱新冠病毒疫苗以及艾滋病疫苗的研发。
[0009]有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0010]本专利技术的第一目的在于提供一种抗原纳米颗粒，该抗原纳米颗粒免疫活性高，以解决上述问题中的至少一种。
[0011]本专利技术的第二目的在于提供一种上述抗原纳米颗粒的制备方法。
[0012]本专利技术的第三目的在于提供上述抗原纳米颗粒在制备疫苗中的应用。
[0013]本专利技术的第四目的在于提供一种疫苗，以解决上述问题中的至少一种。
[0014]第一方面，本专利技术提供了一种抗原纳米颗粒，包括抗原和聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐
‑
ALT
‑1‑
十八碳烯)，所述抗原与聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐
‑
ALT
‑1‑
十八碳烯)反应结合。
[0015]作为进一步技术方案，所述抗原包括病毒蛋白、肿瘤疫苗蛋白或阿尔滋海默疫苗蛋白中的至少一种；
[0016]优选地，所述病毒蛋白包括HIV疫苗蛋白、乙肝病毒蛋白、新冠病毒蛋白或流感病毒蛋白；
[0017]优选地，所述HIV疫苗蛋白包括HIV包膜蛋白三聚体；
[0018]优选地，所述HIV包膜蛋白三聚体包括SOSIP.664、NFL trimer或UFO trimer中的至少一种。
[0019]作为进一步技术方案，所述聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐
‑
ALT
‑1‑
十八碳烯)的制备方法包括：将mPEG
‑
NH2和PMHC
18
反应制备得到聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐
‑
ALT
‑1‑
十八碳烯)。
[0020]作为进一步技术方案，所述mPEG
‑
NH2的分子量为2000
‑
5000Da；
[0021]优选地，所述PMHC
18
的分子量为30000
‑
50000Da；
[0022]优选地，所述mPEG
‑
NH2和PMHC
18
的摩尔比为1:8
‑
1:12，优选为1:10；
[0023]优选地，所述mPEG
‑
NH2和PMHC
18
反应为在有机溶剂中进行，所述有机溶剂包括二氯甲烷；
[0024]优选地，所述mPEG
‑
NH2和PMHC
18
反应的条件包括在200
‑
300rpm的转速下搅拌20
‑
28h；
[0025]优选地，所述mPEG
‑
NH2和PMHC
18
反应的催化剂包括1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐和三乙胺；
[0026]优选地，所述mPEG
‑
NH2和PMHC
18
反应结束后还包括纯化步骤；
[0027]优选地，所述纯化步骤包括采用截留分子量为14kDa的透析袋透析。
[0028]第二方面，本专利技术提供了一种抗原纳米颗粒的制备方法，包括如下步骤：a.将聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐
‑
ALT
‑1‑
十八碳烯)溶于水，制备得到混悬液；
[0029]b.将a步骤的混悬液滴加至抗原溶液中，混合后制备得到抗原纳米颗粒。
[0030]作为进一步技术方案，a步骤中，所述混悬液中还包括助溶剂；
[0031]优选地，所述助溶剂包括二甲基亚砜。
[0032]作为进一步技术方案，所述聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐
‑
ALT
‑1‑
十八碳烯)和抗原的质量比4:1
‑
6:1，优选为5:1；
[0033]优选地，所述抗原溶液的浓度为0.8
‑
1.2mg/mL。
[0034]作为进一步技术方案，b步骤中，所述混合包括在200
‑
300rpm的转速下搅拌1.6
‑
2.4h；
[0035]优选地，b步骤中，所述混合后还包括纯化步骤；
[0036]优选地，当所述抗原为HIV包膜蛋白三聚体时，所述纯化步骤包括采用截留分子量为100kDa的透析袋透析。
[0037]第三方面，本专利技术提供了上述抗原纳米颗粒在制备疫苗中的应用。
[0038]第四方面，本专利技术提供了一种疫苗，包括上述抗原纳米颗粒和佐剂；
[0039]优选地，所述佐剂为AS03本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗原纳米颗粒，其特征在于，包括抗原和聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐
‑
ALT
‑1‑
十八碳烯)，所述抗原与聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐
‑
ALT
‑1‑
十八碳烯)反应结合。2.根据权利要求1所述的抗原纳米颗粒，其特征在于，所述抗原包括病毒蛋白、肿瘤疫苗蛋白或阿尔滋海默疫苗蛋白中的至少一种；优选地，所述病毒蛋白包括HIV疫苗蛋白、乙肝病毒蛋白、新冠病毒蛋白或流感病毒蛋白；优选地，所述HIV疫苗蛋白包括HIV包膜蛋白三聚体；优选地，所述HIV包膜蛋白三聚体包括SOSIP.664、NFL trimer或UFO trimer中的至少一种。3.根据权利要求1所述的抗原纳米颗粒，其特征在于，所述聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐
‑
ALT
‑1‑
十八碳烯)的制备方法包括：将mPEG
‑
NH2和PMHC
18
反应制备得到聚乙二醇接枝的聚(马来酸酐
‑
ALT
‑1‑
十八碳烯)。4.根据权利要求3所述的抗原纳米颗粒，其特征在于，所述mPEG
‑
NH2的分子量为2000
‑
5000Da；优选地，所述PMHC
18
的分子量为30000
‑
50000Da；优选地，所述mPEG
‑
NH2和PMHC
18
的摩尔比为1:8
‑
1:12，优选为1:10；优选地，所述mPEG
‑
NH2和PMHC
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反应为在有机溶剂中进行，所述有机溶剂包括二氯甲烷；优选地，所述mPEG
‑
NH2和PMHC
18
反应的条件包括在200
‑
300rpm的转速下搅拌20
‑
28h；优选地，所述mPEG
‑
N...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书二页说明书九页附图三页，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：