【技术实现步骤摘要】
一种黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子及其应用
[0001]本专利技术涉及一种黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子及应用。
技术介绍
[0002]黄曲霉毒素毒性强、危害大，是污染食品种类最多的污染物，近年总体呈现污染加重趋势，严重威胁食品安全和人民健康。黄曲霉毒素是自然界毒性最强的一类真菌毒素，其中黄曲霉毒素B1是国际癌症研究组织(International Agency for Research on Cancer,IARC)认定的I类致癌物，已引发过多起人畜群体中毒事件，成为肝癌病例高发的主要原因之一。根据近5年Web of Science检索数据统计：黄曲霉毒素污染食品及原料种类超过了110种，高居污染物首位。然而，迄今国内外仍没有黄曲霉毒素等微生物毒素污染前的分子预警研究范例，难以满足事前预警的迫切需求。
[0003]现有黄曲霉毒素预警方法主要是基于黄曲霉毒素检测技术建立，用于毒素污染水平评价或产后污染程度与消费风险评估，一旦检测发现，污染往往已经发生，难以满足事前预警与指导防控的迫切要求。欧盟食品和饲料快速预警系统(...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT
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YJFZ01，其特征在于：黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。2.鉴别体系黄曲霉毒素产毒菌产毒力的方法，基于黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT
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YJFZ01的含量检测，进行体系黄曲霉毒素产毒菌产毒力的鉴别，黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT
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YJFZ01的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。3.鉴别曲霉属黄曲霉毒素产毒菌株产黄曲霉毒素能力的应用，其特征在于：具体应用方法包括：（1）提供黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT
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YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体：（2）提供黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT
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YJFZ01的多克隆抗体；（3）待鉴别菌株的待测液的制备：待鉴别菌株培养，稀释，获得待鉴别菌株的待测液；（4）待鉴别菌株产黄曲霉毒素能力的测定：采用间接非竞争双抗体夹心法鉴别曲霉属黄曲霉毒素产毒菌株产黄曲霉毒素能力，步骤包括：酶标板中包被AFT
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YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体，洗板；加入封闭液封闭，洗板；加入待测液反应，洗板；加入AFT
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YJFZ01多克隆抗体反应，洗板；加入与黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT
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YJFZ01的特异性多克隆抗体发生结合反应的辣根过氧化物酶标记抗体，反应，洗板；加入显色液反应；加入终止液，酶标仪读取并计算结果；黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT
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YJFZ01的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的步骤（3）为：将待鉴别菌株在常规察氏培养基或者其他适宜菌株生长的培养基培养，培养的环境温度为15 ~ 35 ℃，培养时间不少于12 h后，取培养基与培养物的混合体充分匀浆，再用无菌水稀释1
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10倍，获得待鉴别菌株的待测液。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的步骤（4）为：a将上述AFT
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YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体用ELISA包被缓冲液配制0.2
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8.0 μg/mL的包被液，再加入至酶标板中，4 ℃放置过夜或者37 ℃放置不少于2 h后，去除上述酶标板中包被液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；然后，以浓度不低于1％的脱脂奶粉作为封闭液，放置室温或37 ℃封闭不少于1 h后，再弃去封闭液，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；b然后以pH接近中性的常规磷酸盐缓冲液将待测液适当稀释，加入到酶标板孔中，放置室温或37 ℃封闭不少于1 h后，弃去液体，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；c然后，以pH接近中性的常规磷酸盐缓冲液将上述AFT
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YJFZ01的多克隆抗体适当稀释，加入到酶标板孔中，放置室温或37 ℃封闭不少于1 h后，弃去液体，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；d然后，以pH接近中性的常规磷酸盐缓冲液将商业化的辣根过氧化物酶标记抗体根据需要稀释，加入到酶标板孔中，放置室温或37 ℃封闭不少于1 h后，弃去液体，再用ELISA常规洗液洗涤酶标板；e然后，先后加入ELISA常规的显色液、终止液，最后通过酶标仪读取并计算AFT
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YJFZ01含量结果。6.鉴别样品中是否存在强产毒力的黄曲霉毒素产毒菌株的应用，具体应用方法步骤如下：（1）提供黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT
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YJFZ01的纳米抗体或单克隆抗体：
（2）提供黄曲霉毒素产毒菌产毒力指示分子AFT
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YJFZ01的多克隆抗体；...
【专利技术属性】
技术研发人员：李培武，张奇，白艺珍，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：
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