本发明专利技术涉及植物生理活性物质制备技术领域，公开了一种天然芸苔素类似物HOBR的制备方法，该方法包括步骤：(a)切碎薄叶碎米蕨以形成薄叶碎米蕨碎料；(b)将薄叶碎米蕨碎料辐照处理，辐照剂量为0.01～0.3kGy；(c)将经过辐照的薄叶碎米蕨碎料加浸提剂浸提，得到含有HOBR的浸提液；(d)将HOBR浸提液经纯化精制，很容易获得HOBR纯品。本发明专利技术的原材料来源广泛，取材与种植都十分方便，从而降低了提取芸苔素类似物HOBR原料成本，且薄叶碎米蕨仅含HOBR一种芸苔素，而不含有其它芸苔素类似活性物质，降低了后期纯化处理的成本，并便于实现制造过程的工业化，本技术方案属于清洁、安全、环保的天然产物开发技术方案。物开发技术方案。物开发技术方案。
【技术实现步骤摘要】
一种天然芸苔素类似物HOBR的制备方法
[0001]本专利技术涉及天然植物生理活性物质制备
，本专利技术涉及一种天然芸苔素类似物HOBR的制备方法。
技术介绍
[0002]芸苔素内酯(Brassinolide，BL)是20世纪70年代从自然界分离鉴定的一系列内源性植物生长调节剂的总称。1970年美国科学家Mitchell等人首次从芸苔属植物油菜花粉中提取出了一种生物活性极高的物质，同时发现该物质能够促进豆苗的生长。1978年英国科学家Mandava等人精制油菜素后，同样也得到这种具有高生物活性的物质。1979年Grove等人从40kg油菜花粉中提取到4mg结晶，经过分离提纯并鉴定其分子结构后将其命名为芸苔素内酯。
[0003]自1979年Grove等从油菜花粉提取物中鉴定出芸苔素内酯(Brassinolide，BL)化学结构以来，近43年科学家们先后从植物材料中检测或分离到60余种具有与芸苔素内酯结构相关的类似化合物以及大约15种相关的生物合成前体，这些物质统称为芸苔素甾醇类物质(Brassinosteroids，BRs)，它们存在于6科26种藻类中，2科2种苔藓植物中，8科15种蕨类植物中，4科6种裸子植物中，被子植物35科74种。研究表明芸苔素甾醇类物质有些具有与芸苔素内酯(Brassinolide，BL)相似的生物活性或其它生理活性作用。概括起来主要包括以下几方面的生理效应：
①
调节维管组织分化，促进茎部生长，促进叶片发育，增强光合效率；
②
促进侧根和根毛的发育；
③
可提高植物雄性器官育性，促进种子灌浆和果实成熟，促进种子萌发；
④
调节植物体内氧化代谢，提高植物对水分、温度、盐分、重金属等多种非生物胁迫的适应性；
⑤
促进植物对矿质养分的吸收，提高植物营养物质利用效率；因此，芸苔素甾醇参与调节植物生长多个生理过程，对植物生长发育具有重要作用。
[0004](20R,22R)
‑
2β,3β,14,20,22,25
‑
hexahydroxy
‑
5β
‑
cholestan
‑6‑
one，中文化学名称为(20R,22R)
‑
2β,3β,14,20,22,25
‑
六羟基
‑
5β
‑
胆甾
‑6‑
酮(14
‑
羟基芸苔素甾醇，如图18所示)，化学通用名称为14
‑
hydroxylatedbrassinosteroid(HOBR)，CASNo.为457603
‑
63
‑
3，是较早发现的芸苔素甾醇类似物(芸苔素类似物)，目前，中国农业农村部已批准该化合物用于农业大田生产，以促进作物生长，提高产量。
[0005]HOBR于2002年首次通过化学合成获得，但收率较低，分离纯化较困难。中国专利CN103214546B公开了从油菜花粉中分离含有该化合物的多种芸苔素类似物混合物的提取技术方案，但该方案制备的不是HOBR工业纯品，同时油菜属于国家保护的粮油作物，且花粉数量有限，采集成本高。
[0006]薄叶碎米蕨(Cheilanthestenuifolia(Burm.f.)Sw.是中国蕨科、碎米蕨属蕨类植物。广泛分布于中国广东、海南、广西、云南、湖南南部、江西、福建。也广布于热带亚洲其他各地，以及波利尼西亚、澳大利亚等地。生长在海拔50
‑
1000米的溪旁、田边或林下石上。薄叶碎米蕨分布广泛，生长快速，生物量较大，人工种植容易，因此具有广泛的应用价值。
[0007]因此，针对上述现有技术的缺点，现提出一种天然芸苔素类似物HOBR工业纯品的
制备方法，能提取出薄叶碎米蕨(如图17所示)中的芸苔素类似物HOBR工业纯品，无需以粮油作物为原材料，经济价值更高，更符合国家建设资源节约型社会、保障国家粮食安全的战略选择，且本方法操作简便，环境污染小，有利于实现清洁、安全的产业化制备。
技术实现思路
[0008]鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术所要解决的技术问题是克服现有HOBR(14
‑
羟基芸苔素甾醇)制备技术方案的原材料不足和难以标准化大量生产的瓶颈问题，提供一种原材料易得，操作简便，环境污染小，有利于实现清洁、安全的产业化制备的技术方案。
[0009]为实现上述目的及其他相关目的：
[0010]本专利技术第一方面，提供一种天然芸苔素类似物HOBR的制备方法，包括以下步骤：
[0011](a)切碎薄叶碎米蕨以形成薄叶碎米蕨碎料；
[0012](b)将薄叶碎米蕨碎料辐照处理，辐照剂量为0.01～0.3kGy；
[0013](c)将经过辐照的薄叶碎米蕨碎料加浸提剂浸提，得到含有天然芸苔素类似物HOBR的浸提液。
[0014]在本专利技术一种实施方案中，所述步骤(b)中的辐照为
60
Co所产生的γ射线，辐照时间为1～48h。
[0015]在本专利技术一种实施方案中，所述步骤(c)中浸提剂包括柠檬酸盐缓冲溶液和有机溶剂；
[0016]所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙酸、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、石油醚中的一种或多种。在本专利技术一种实施方案中，一种天然芸苔素类似物HOBR的制备方法，还包括如下步骤：
[0017](d)：步骤(c)中得到的浸提液经负压回收有机溶剂后得到浓缩液，再加入萃取剂萃取，重复萃取3
‑
4次，收集有机相；
[0018](e)：步骤(d)得到的有机相，经负压浓缩回收萃取剂后得到混合物，再加入无水硅胶，得到硅胶混合料；
[0019](f)：将步骤(e)得到的硅胶混合料，采用硅胶层析柱过柱，梯度洗脱分离杂质，得到含有HOBR的洗脱液，再经负压浓缩，回收全部有机溶剂，得到HOBR固体粗品。
[0020]在本专利技术一种实施方案中，步骤(d)中所述萃取剂为二氯甲烷、乙酸乙酯中的至少一种。
[0021]在本专利技术一种实施方案中，步骤(f)中所述梯度洗脱采用的溶剂为乙酸乙酯、石油醚、甲醇、乙醇中的至少一种。
[0022]在本专利技术一种实施方案中，一种天然芸苔素类似物HOBR的制备方法，还包括步骤(g)；
[0023](g)：将步骤(f)得到的HOBR固体粗品，重结晶，得到HOBR纯品。
[0024]在本专利技术一种实施方案中，所述重结晶溶剂选自甲醇、乙醇、乙酸乙酯或石油醚中的至少一种。
[0025]在本专利技术一种实施方案中，所述重结晶溶剂选自体积比为5
‑
15:1的甲醇与乙酸乙酯混合溶液；或
[0026]所述重结晶溶剂选自体积比为5
‑
20:1的乙醇与乙酸乙酯混合溶液；或
[0027]所述重结晶溶剂选自体积比为1:0.5
‑
5的甲醇与乙醇混合溶液。...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种天然芸苔素类似物HOBR的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)切碎薄叶碎米蕨以形成薄叶碎米蕨碎料；(b)将薄叶碎米蕨碎料辐照处理，辐照剂量为0.01～0.3kGy；(c)将经过辐照的薄叶碎米蕨碎料加浸提剂浸提，得到含有天然芸苔素类似物HOBR的浸提液。2.根据权利要求1所述一种天然芸苔素类似物HOBR的制备方法，其特征在于，所述步骤(b)中的辐照为
60
Co所产生的γ射线，辐照时间为1～48h。3.根据权利要求1所述一种天然芸苔素类似物HOBR的制备方法，其特征在于，所述步骤(c)中浸提剂包括柠檬酸盐缓冲溶液和有机溶剂；所述有机溶剂为甲醇、乙醇、乙酸、丙酮、乙腈、乙酸乙酯、石油醚中的一种或多种。4.根据权利要求3所述一种天然芸苔素类似物HOBR的制备方法，其特征在于，还包括如下步骤：(d)步骤(c)中得到的浸提液经负压回收有机溶剂后得到浓缩液，再加入萃取剂萃取，重复萃取3
‑
4次，收集有机相；(e)步骤(d)得到的有机相，经负压浓缩回收萃取剂后得到混合物，再加入无水硅胶，得到硅胶混合料；(f)将步骤(e)得到的硅胶混合料，采用硅胶层析柱过柱，梯度...
【专利技术属性】
技术研发人员：夏中梅，侯勇，王强锋，王海涛，胡甦，曾诚，曾显斌，
申请(专利权)人：四川省兰月科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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