生物工程去核细胞的方法和用途技术

提供了使用生物工程去核细胞治疗疾病的方法。本文还提供了包含去核细胞的组合物，其中所述去核细胞已负载有临床相关的生物分子。中所述去核细胞已负载有临床相关的生物分子。中所述去核细胞已负载有临床相关的生物分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生物工程去核细胞的方法和用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年2月7日提交的美国临时申请序列号62/971,526；2020年3月24日提交的美国临时申请序列号62/993,967；以及2020年3月25日提交的美国申请序列号62/994,598的优先权，每项均通过引用全部并入本文。
[0003]联邦资助的研究或开发
[0004]本专利技术是在政府支持下由国家卫生研究院(National Institutes of Health)授予的基金号CA182495和CA097022资助完成。政府对本专利技术拥有一定的权利。

技术介绍

[0005]当前用于基于细胞的疗法的技术和工具通常易于产生不需要且危险的副作用，如不受控制的增殖，有限工程改造能力和抗DNA免疫应答。尽管基于细胞的治疗在解决人类疾病治疗中的关键需求方面具有巨大潜力，但临床成功往往面临障碍，如细胞异质性、有限的工程改造能力、不稳定的疗效、大规模制造中质量控制或再现性差以及患者安全问题。
[0006]专利技术概述
[0007]本公开至少部分基于生物工程改造去核细胞的产生，以改善治疗功能并产生可控和安全的细胞样实体。
[0008]如下文详述并在工作实施例中举例说明的，设计用于治疗用途的生物工程改造去核细胞的方法和细胞的用途提供了优于先前基于细胞的治疗的若干益处，包括例如安全性、确定的寿命、无核编码基因转移到宿主的风险以及有效递送治疗负荷。当前要求保护的公开内容的其他优势在本文描述。
[0009]本文提供了治疗对象疾病的方法，所述方法包括：给予所述对象治疗有效量的组合物，所述组合物包含经遗传工程改造以表达外源DNA分子、外源RNA分子、外源蛋白质或外源肽中的至少一种的去核细胞。在一些实施方式中，组合物还包含治疗剂。在一些实施方式中，治疗剂包括小RNA、小分子药物、肽、病毒或其组合中的至少一种。在一些实施方式中，治疗剂包括化疗剂。
[0010]本文提供了控制对象免疫活化的方法，所述方法包括：给予所述对象去核细胞，其中所述去核细胞经遗传工程改造以活化免疫系统。在一些实施方式中，对去核细胞进行遗传工程改造以表达至少一种外源蛋白。在一些实施方式中，外源蛋白是细胞表面蛋白。在一些实施方式中，外源蛋白是免疫活化蛋白。在一些实施方式中，外源蛋白包括细胞因子、IL
‑
12、钙网蛋白、磷脂酰赖氨酸、吞噬
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猎物结合结构域、膜联蛋白1、OX40/OC40L、4
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1BB、B7家族成员或其组合。
[0011]本文提供了控制对象免疫识别的方法，所述方法包括：给予所述对象去核细胞，其中所述去核细胞经遗传工程改造以逃避免疫系统的识别。在一些实施方式中，对去核细胞进行遗传工程改造，以耗竭去核细胞的免疫识别分子。在一些实施方式中，免疫识别分子包括HLA抗原、蛋白聚糖、糖部分、胚胎抗原或其组合。在一些实施方式中，对去核细胞进行遗传工程改造以表达至少一种外源蛋白。在一些实施方式中，外源蛋白是细胞表面蛋白。在一
些实施方式中，外源蛋白是免疫逃逸蛋白。在一些实施方式中，外源蛋白包括细胞因子、IL
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1、IL
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4、IL
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6、IL
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8、IL
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10、TGF
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β、IGF
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2、VEGF、TNF
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α、CD47、HLA
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E、HLA
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G、HLA
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E/G、PD
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1、PD
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L1、TIGIT、CD112R、CTLA
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4、趋化因子、趋化因子配体1、C
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C基序趋化因子受体7、NK抑制剂受体、HLA I类特异性抑制受体、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)、NKG2A、NKG2A、淋巴细胞活化基因
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3(LAG
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3)或其组合。
[0012]本文提供了识别对象中疾病状况存在的方法，所述方法包括：给予所述对象经遗传工程改造以表达外源DNA分子、外源RNA分子、外源蛋白质或外源肽中的至少一种的去核细胞，其中所述经遗传工程改造的去核细胞识别疾病状况的存在或位置。在一些实施方式中，外源蛋白是炎症归巢受体。在一些实施方式中，炎症归巢受体将去核细胞引导至受损和/或发炎组织。
[0013]在一些实施方式中，去核细胞来源于自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、成纤维细胞和成体干细胞、间充质基质细胞(MSC)、可诱导多能干细胞或其组合。在一些实施方式中，去核细胞来源于间充质基质细胞(MSC)。
[0014]在一些实施方式中，外源DNA分子包括单链DNA，双链DNA，寡核苷酸，质粒，细菌DNA分子或DNA病毒或其组合。在一些实施方式中，外源RNA分子包括信使RNA(mRNA)、小干扰RNA(siRNA)、微小RNA(miRNA)、短发夹RNA(shRNA)、RNA病毒或其组合。在一些实施方式中，外源蛋白包括细胞因子、生长因子、激素、抗体、酶或其组合。
[0015]在一些实施方式中，所述给药包括静脉给药、皮下给药、腹膜内给药、直肠给药、口腔给药或其组合。在一些实施方式中，给药包括瘤内给药。
[0016]在一些实施方式中，疾病包括炎症、感染、癌症、神经疾病、自身免疫病、心血管疾病、眼科疾病、骨骼疾病、代谢疾病或其组合。在一些实施方式中，癌症包括多发性骨髓瘤、胶质母细胞瘤、淋巴瘤、白血病、间皮瘤、肉瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、结肠癌或其组合。
[0017]除非另外定义，本文使用的所有技术和科学术语的意义与本专利技术所属领域普通技术人员通常所理解的相同。本文描述了本专利技术中所用的方法和材料；也可以使用本领域已知的其它合适的方法和材料。所述材料、方法和实施例都仅是说明性的，不构成限制。本文中述及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其它参考文献都通过引用其全文纳入本文。若有抵触，以本包括定义在内的本申请说明书为准。
[0018]从下文的详述、附图和所附权利要求中能够很容易地了解本专利技术的其它特征和优点。
[0019]附图简要说明
[0020]图1A是生物工程改造的去核细胞(例如胞质载体(Cargocyte))的治疗用途的工作流程示意图。
[0021]图1B和1C显示存活的hT
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MSC/工程改造的去核细胞(例如胞质载体)相对于初始群体随时间变化的百分比的图。图1B，新分离的hT
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MSC/胞质载体；图1C,hT
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MSC/胞质载体冷冻保存1个月后解冻。
[0022]图1D显示MSC/工程改造的去核细胞(例如胞质载体)在Boyden室中向指定浓度的SDF
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1α迁移2小时。柱状图表示迁移细胞与负载对照的比率。平均值
±
SEM；n＝10个来自本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.治疗对象中的疾病的方法，该方法包括：给予所述对象治疗有效量的组合物，所述组合物包含经遗传工程改造以表达外源DNA分子、外源RNA分子、外源蛋白质或外源肽中的至少一种的去核细胞。2.如权利要求1所述的方法，其中所述组合物还包含治疗剂。3.如权利要求2所述的方法，其中所述治疗剂包括小RNA、小分子药物、肽、病毒或其组合中的至少一种。4.如权利要求2所述的方法，其中所述治疗剂包括化疗剂。5.一种控制对象免疫活化的方法，所述方法包括：给予所述对象去核细胞，其中所述去核细胞经遗传工程改造以活化免疫系统。6.如权利要求5所述的方法，其中所述去核细胞经遗传工程改造以表达至少一种外源蛋白。7.如权利要求6所述的方法，其中所述外源蛋白是细胞表面蛋白。8.如权利要求7所述的方法，其中所述外源蛋白是免疫活化蛋白。9.如权利要求6
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8中任一项所述的方法，其中所述外源蛋白包括细胞因子、IL
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12、钙网蛋白、磷脂酰赖氨酸、吞噬猎物结合结构域、膜联蛋白1、OX40/OC40L、4
‑
1BB、B7家族成员或其组合。10.一种控制对象免疫识别的方法，所述方法包括：给予所述对象去核细胞，其中所述去核细胞经遗传工程改造以逃逸免疫系统的识别。11.如权利要求10所述的方法，其中所述去核细胞经遗传工程改造以耗竭所述去细胞的免疫识别分子。12.如权利要求11所述的方法，其中所述免疫识别分子包括HLA抗原、蛋白聚糖、糖部分、胚胎抗原或其组合。13.如权利要求10所述的方法，其中所述去核细胞经遗传工程改造以表达至少一种外源蛋白。14.如权利要求13所述的方法，其中所述外源蛋白是细胞表面蛋白。15.如权利要求13所述的方法，其中所述外源蛋白是免疫逃逸分子。16.如权利要求15所述的方法，其中所述外源蛋白包括细胞因子、IL
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1、IL
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4、IL
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6、IL
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8、IL
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10、TGF
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β、IGF
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2、VEGF、TNF
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α、CD47、HLA
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E、HLA
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G、HLA
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E/G、PD
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1、PD
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L1、T...

【专利技术属性】
技术研发人员：R，
申请(专利权)人：加利福尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：