一种胰岛素脂质体药物含量测定方法技术

本发明专利技术涉及药剂学领域，公开了一种胰岛素脂质体药物含量测定方法，其特征在于，所述方法包括(1)破膜：向所述胰岛素脂质体中加入破膜剂组合物，混匀，以及(2)采用高效液相法检测胰岛素药物含量，其中，所述破膜剂组合物包含酸和有机溶剂，所述酸选自TFA、HCl、H2SO4中的一种或一种以上，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或一种以上。本发明专利技术的胰岛素脂质体药物含量测定方法方便，易于定量分析，且对色谱柱和液相系统无损害，为亲水性蛋白多肽类药物相关制剂的准确测定奠定了基础。类药物相关制剂的准确测定奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】
一种胰岛素脂质体药物含量测定方法


[0001]本专利技术涉及药剂学领域，具体涉及一种胰岛素脂质体药物含量测定方法。

技术介绍

[0002]胰岛素作为治疗胰岛素依赖型糖尿病和重度非胰岛素依赖型糖尿病的首选药物，因受分子量大，稳定性差，生物利用度低等问题的限制，一般需注射给药，患者顺应性低，且长期频繁注射会产生诸如皮下脂肪萎缩、皮下硬结等不良反应，给病人带来极大痛苦。因此，药物研发集中在开发安全、有效的非注射方式以完全或部分替代胰岛素注射。由于胰岛素自身特点，直接经非注射途径给药几乎不吸收，可使用药剂学载体呈递提高其非注射给药生物利用度。在药剂学微粒载体中，脂质体，尤其是柔性脂质体，具有增强渗透、增加溶解度、包封率高、不良反应小等优点，且由于含有边缘活化剂，能够以完整形式穿透比自身尺寸小得多的孔道进行药物递送，成为胰岛素非注射制剂研究中有效且高效的一种载体。
[0003]可靠的分析方法是处方工艺研究的质量评价手段。目前，胰岛素脂质体中胰岛素含量测定的主要方法为取胰岛素脂质体混悬液,用胆酸钠溶液破膜后,再用氯仿萃取脂质，涡旋，混匀后离心取上清液进行测定(张莉,亓向荣,张春霞.胰岛素脂质体药物含量和包封率的测定,中国药师.2010,(03):364
‑
365；Na Zhang,Qi N.Ping,Gui H.Huang,et,al.Investigation of lectin
‑
modified insulin liposomes as carriers for oral administration,Pharmaceutical Nanotechnology,2005,294(1
‑
2):247
‑
259),该方法对胰岛素脂质体样品的前处理过程较为繁琐，耗费时间较长，且处理过程中涉及溶液的混合，从而使样品测定结果存在一定偏差。除此之外，另有文献采用胰岛素脂质体不经处理直接进液相测定，利用流动相在分析过程中对脂质体的破解进行胰岛素含量的测定(You Xu,Yiyue Guo,Yuqi Yang,et,al.Stabilization of Deformable Nanovesicles Based on Insulin
‑
Phospholipid Complex by Freeze
‑
Drying,Pharmaceutics,2019,11(10):539；张强,齐宪荣.HPLC法测定胰岛素脂质体中胰岛素的含量.中国现代应用药学,2001(06):451
‑
453)，该方法中流动相的有机成分对脂质浓度较高的脂质体的破解不彻底，采用脂质体直接进样分析，长时间易造成色谱柱以及液相系统堵塞，影响使用时限。

技术实现思路

[0004]本专利技术人在研究过程中发现可用含特定酸与特定有机溶剂的组合物对胰岛素脂质体进行破膜处理。基于此，本专利技术解决的技术问题是提供一种胰岛素脂质体中药物含量测定方法。
[0005]为解决本专利技术的技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：
[0006]本专利技术提供了一种胰岛素脂质体中药物含量测定方法，其特征在于，所述方法包括(1)破膜：向所述胰岛素脂质体中加入破膜剂组合物，混匀，以及(2)采用高效液相法检测胰岛素药物含量，其中，所述破膜剂组合物包含酸和有机溶剂，所述酸选自TFA、HCl、H2SO4中的一种或一种以上，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或一种以上。
[0007]在本专利技术的一种实施方式中，所述的胰岛素选自天然胰岛素、猪胰岛素、牛胰岛素、重组人胰岛素及各类中、长效胰岛素中至少一种；所述的脂质材料选自天然磷脂、合成磷脂、胆甾醇、胆酸及其盐类中至少一种。
[0008]在本专利技术的一种实施方式中，本专利技术所述胰岛素脂质体包括由胰岛素和脂质直接制备得到的脂质体，和/或由胰岛素磷脂复合物和脂质制备得到的脂质体，胰岛素磷脂复合物中磷脂可选为天然磷脂或合成磷脂中的至少一种。
[0009]可选地，所述脂质体为含有表面活性剂的柔性脂质体。
[0010]可选地，所述胰岛素脂质体通过以下方法中的任意一种制备：
[0011](1)胰岛素磷脂复合物的制备
[0012]参照专利“一种胰岛素的脂质复合物及其制备方法和制剂”(申请号CN201110196733.3)中的溶剂挥发法制备胰岛素磷脂复合物；
[0013](2)胰岛素磷脂复合物柔性脂质体的制备，可选自以下方法中的任一种：
[0014]方法(A):将胰岛素磷脂复合物和表面活性剂溶于有机溶剂，挥除溶剂，干燥得薄膜，水化薄膜即得。具体而言，将(1)所制备的胰岛素磷脂复合物和表面活性剂，一同溶解于有机溶剂中，挥除溶剂，干燥得薄膜；薄膜水化：取水性介质适量，加入到干燥后的薄膜中，在一定温度下，水化一定时间，经匀化制备得到“脂质体溶液”，即得胰岛素磷脂复合物柔性脂质体；
[0015]方法(B):将胰岛素磷脂复合物溶于有机溶剂，挥除溶剂，干燥得薄膜，用溶有表面活性剂的水性介质水化薄膜即得。具体而言，将(1)所制备的胰岛素磷脂复合物，溶解于有机溶剂中，挥除溶剂，干燥得薄膜；薄膜水化：将表面活性剂溶解于适量的水性介质中，加入到干燥后的薄膜中，在一定温度下，水化一定时间，经匀化得到“脂质体溶液”，即得胰岛素磷脂复合物柔性脂质体；
[0016]方法(C):将胰岛素磷脂复合物和表面活性剂溶于有机溶剂，加入水性介质，匀化处理使之成乳，去除有机溶剂，即得。具体而言，取(1)所制备的胰岛素磷脂复合物及表面活性剂，一同溶解于有机溶剂中，然后加入水性介质，匀化处理使之成乳，减压旋蒸除去有机溶剂，得“脂质体溶液”，即得胰岛素磷脂复合物柔性脂质体；
[0017]方法(D):将胰岛素磷脂复合物溶于有机溶剂，将其与溶有表面活性剂的水性介质混合匀化处理使之成乳，去除有机溶剂，即得。具体而言，取(1)所制备的胰岛素磷脂复合物溶解于有机溶剂中，然后将表面活性剂溶解于水性介质中，两者混合匀化处理使之成乳，减压旋蒸除去有机溶剂，得“脂质体溶液”，即得胰岛素磷脂复合物柔性脂质体。
[0018](3)胰岛素普通柔性脂质体的制备
[0019]将(2)中的胰岛素磷脂复合物替换为胰岛素进行胰岛素普通柔性脂质体的制备。
[0020](4)胰岛素磷脂复合物普通脂质体的制备
[0021]将胰岛素磷脂复合物和脂质材料溶于有机溶剂，挥除溶剂，干燥得薄膜，水化薄膜即得。具体而言，将(1)所制备的胰岛素磷脂复合物和脂质材料，一同溶解于有机溶剂中，挥除溶剂，干燥得薄膜；薄膜水化：取水性介质适量，加入到干燥后的薄膜中，在一定温度下，水化一定时间，经匀化制备得到“脂质体溶液”，即得胰岛素磷脂复合物普通脂质体。
[0022](5)胰岛素普通脂质体的制备
[0023]将胰岛素和脂质材料溶于有机溶剂，挥除溶剂，干燥得薄膜，水化薄膜即得。具体
而言，将胰岛素和脂质材料，一同溶解于有机溶剂中，挥除溶剂本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胰岛素脂质体药物含量测定方法，其特征在于，所述方法包括(1)破膜：向所述胰岛素脂质体中加入破膜剂组合物，混匀，以及(2)采用高效液相法检测胰岛素药物含量，其中，所述破膜剂组合物包含酸和有机溶剂，所述酸选自TFA、HCl、H2SO4中的一种或一种以上，所述有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或一种以上。2.根据权利要求1所述的胰岛素脂质体药物含量测定方法，其特征在于，所述胰岛素脂质体中胰岛素药物重量含量为0.004～2％，脂质重量含量为0.012～50％。3.根据权利要求2所述的胰岛素脂质体药物含量测定方法，其特征在于，所述胰岛素脂质体与所述破膜剂组合物的体积比为1:(5～50)。4.根据权利要求3所述的胰岛素脂质体药物含量测定方法，其特征在于，所述破膜剂组合物中的有机溶剂的重量百分数为75％～100％，优选90％～100...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玉玲，夏学军，孟盈盈，郭奕月，杨玉琪，邹媛媛，
申请(专利权)人：中国医学科学院药物研究所，
类型：发明
国别省市：