本发明专利技术涉及土壤污染诊断技术领域，尤其是指一种利用土壤蚯蚓生物标志物诊断土壤污染情况的方法，包括以下步骤：S1，人工养殖蚯蚓；S2，称取待诊断的土壤，均分为四等分标记为1、2、3、4号待测组；S3，提取红正蚓的溶酶体、陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本作为对照样本进行保存备用；S4，红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓分别放入1、2、3号待测组的土壤中，并将三种蚯蚓共同放入4号待测组土壤中；S5，再次提取每一条红正蚓的溶酶体、陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本，分析记录数据；S5，对土壤污染情况进行判断。本发明专利技术同时采用红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓分别检测土壤中各种不同的污染情况进行分析测定。测土壤中各种不同的污染情况进行分析测定。
【技术实现步骤摘要】
一种利用土壤蚯蚓生物标志物诊断土壤污染情况的方法
[0001]本专利技术涉及土壤污染诊断
，尤其是指一种利用土壤蚯蚓生物标志物诊断土壤污染情况的方法。
技术介绍
[0002]陆栖无脊椎动物的生理代谢状况及生命活动在一定程度上反映了土壤的生态功能,因此可以应用于土壤生态功能评价研究以及对土壤污染状况和环境质量判定。蚯蚓作为土壤中生物量最多的动物,在有机质的降解﹑营养循环和土壤形成中有重要的作用,同时蚯蚓通过加速C的分解,影响生态系统碳分配,还能直接或间接控制植物群落组成,推动植物群落的演替剔。在生态系统食物链中,蚯蚓是陆生生物与土壤生物之间传递污染物的桥梁,是环境有毒物质一种非常重要的非靶标陆生土壤生物,被认为是监测土壤污染最合适的生物,因而常用来评价农药等污染物对生态系统的安全性,以及作为指示生物用来进行生态毒理学试验和对土壤生态环境进行监测等R
‑
9。
技术实现思路
[0003]本专利技术要解决的技术问题是提供一种利用土壤蚯蚓生物标志物诊断土壤污染情况的方法，同时采用红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓分别检测土壤中各种不同的污染情况进行分析测定。
[0004]为了解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0005]一种利用土壤蚯蚓生物标志物诊断土壤污染情况的方法，包括以下步骤：
[0006]S1，人工养殖蚯蚓：选择蚯蚓的品种为红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓；
[0007]S2，称取待诊断的土壤，均分为四等分标记为1、2、3、4号待测组，调整土壤含水量；
[0008]S3，提取红正蚓的溶酶体、陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本作为对照样本进行保存备用；
[0009]S4，选择数量相同的红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓分别放入1、2、3号待测组的土壤中，再选择数量相同三种蚯蚓共同放入4号待测组土壤中；
[0010]S5，从1、2、3、4号待测组的土壤中分离出各种蚯蚓，再次提取每一条红正蚓的溶酶体、陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本，检测红正蚓的溶酶体中性红保持时间，并与对照样本进行比较，记录数据；检测陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本的损伤情况与对照样本进行比较，记录数据；
[0011]S5，计算红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓各组数据的平均值，对土壤污染情况进行判断。
[0012]优选地，所述红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓在20
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25℃的环境中用牛粪或者猪粪为食物进行培养15
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20天。
[0013]优选地，采用乙草胺和Se处理红正蚓，观察溶酶体中性红保持时间。
[0014]优选地，陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本采用蚯蚓腹腔细胞的DNA。
[0015]优选地，陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本的损伤情况采用彗星实验分析法进行分析。
[0016]本专利技术的有益效果：
[0017]同时采用红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓分别检测土壤中各种不同的污染情况进行分析测定，红正蚓的溶酶体中性红保持时间用于监测土壤的Zn、Cd、Ni和Pb等重金属的早期污染情况，而陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA损伤情况能精确的反应土壤污染的遗传毒性，便于及时对土壤进行修复治理。
具体实施方式
[0018]为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本专利技术作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本专利技术的限定。
[0019]实施例1
[0020]S1，人工养殖蚯蚓：选择蚯蚓的品种为红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓，在20
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25℃的环境中用牛粪或者猪粪为食物进行培养15
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20天；
[0021]S2，称取待诊断的土壤，均分为四等分标记为1、2、3、4号待测组，每份重量500g，调整土壤含水量为30
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50％；
[0022]S3，选取3条红正蚓采用乙草胺和Se处理后提取溶酶体记录溶酶体中性红保持时间作为对照样本记录保存，分别选取3条陆正蚓和赤子爱胜蚓分别提取其腹腔细胞DNA样本作为对照样本进行保存备用；
[0023]S4，选择红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓各9条分别放入1、2、3号待测组的土壤中，再选择三种蚯蚓各3条共同放入4号待测组土壤中；
[0024]S5，从1、2、3、4号待测组的土壤中分离出各种蚯蚓，再次提取每一条红正蚓的溶酶体、陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本，检测红正蚓的溶酶体中性红保持时间，并与对照样本进行比较，记录数据；检测陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本的损伤情况与对照样本进行比较，记录数据；
[0025]S5，计算红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓各组数据的平均值，对土壤污染情况进行判断。
[0026]本实施例中的所有技术特征均可根据实际需要而进行外观修改。
[0027]上述实施例为本专利技术较佳的实现方案，除此之外，本专利技术还可以其它方式实现，在不脱离本技术方案构思的前提下任何显而易见的替换均在本专利技术的保护范围之内。
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种利用土壤蚯蚓生物标志物诊断土壤污染情况的方法，其特征在于：包括以下步骤：S1，人工养殖蚯蚓：选择蚯蚓的品种为红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓；S2，称取待诊断的土壤，均分为四等分标记为1、2、3、4号待测组，调整土壤含水量；S3，提取红正蚓的溶酶体、陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本作为对照样本进行保存备用；S4，选择数量相同的红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜蚓分别放入1、2、3号待测组的土壤中，再选择数量相同三种蚯蚓共同放入4号待测组土壤中；S5，从1、2、3、4号待测组的土壤中分离出各种蚯蚓，再次提取每一条红正蚓的溶酶体、陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本，检测红正蚓的溶酶体中性红保持时间，并与对照样本进行比较，记录数据；检测陆正蚓和赤子爱胜蚓的DNA样本的损伤情况与对照样本进行比较，记录数据；S5，计算红正蚓、陆正蚓和赤子爱胜...
【专利技术属性】
技术研发人员：陶晔，林芹，查富蓉，查富星，龙欢，
申请(专利权)人：上海凌恩生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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