ERK1/2的激活在抗衰老中的应用制造技术

本发明专利技术涉及抗衰老药物技术领域，尤其涉及ERK1/2的激活在抗衰老中的应用。本发明专利技术研究发现毛壳素(Chaetocin)的抗衰老功能依赖于ERK1/2的激活，其会激活ERK1/2，并且抑制MEK1/2的活性，ERK1/2活性的失活会抑制chaetocin的抗衰老作用；并且进一步研究发现，经典的ERK1/2信号通路激活剂EGF、PDGF、PMA不具备抗衰老作用，这表明chaetocin激活的是非经典的ERK1/2信号通路。本发明专利技术提供的ERK1/2靶点可用于早老症、衰老、心血管疾病、组织器官纤维化、脱发、骨质疏松、衰老炎症等相关疾病的药物研发，对于抗衰老药物的筛选和研发具有重要意义。抗衰老药物的筛选和研发具有重要意义。抗衰老药物的筛选和研发具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
ERK1/2的激活在抗衰老中的应用


[0001]本专利技术涉及抗衰老药物
，尤其涉及ERK1/2的激活在抗衰老中的应用。

技术介绍

[0002]毛壳素(Chaetocin)是一种从毛壳菌中提取的天然产物。研究发现，Chaetocin能杀死癌细胞，具有抗肿瘤的作用；此外，Chaetocin还能抑制组蛋白甲基转移酶(histone methyltransferases，HMT)的活性，参与表观遗传调控。
[0003]但是尚未有研究将毛壳素(Chaetocin)和抗衰老联系在一起，也没有研究涉及Chaetocin抗衰老的具体机制和作用靶点。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术存在的问题，本专利技术提供ERK1/2的激活在抗衰老中的应用。
[0005]第一方面，本专利技术提供ERK1/2的激活在抗衰老中的应用。
[0006]本专利技术进一步提供ERK1/2的激活在筛选抗衰老药物中的应用。
[0007]本专利技术进一步提供ERK1/2的激活在抗衰老药物研发中的应用。
[0008]进一步地，所述抗衰老包括：
[0009]抗早老症、衰老、心血管疾病、组织器官纤维化、脱发、骨质疏松或衰老炎症中的一种或多种。
[0010]进一步地，所述ERK1/2的激活为：
[0011]在ERK1/2激活的同时，MER1/2的活性被抑制。进一步地，所述ERK1/2的激活为被毛壳素激活。
[0012]进一步地，所述ERK1/2的激活为：毛壳素通过激活ERK1/2，抑制MER1/2的活性，抑制衰老。
[0013]进一步地，所述抑制衰老为：使得蛋白progerin从细胞核膜定位转移至细胞核内定位。
[0014]第二方面，本专利技术提供一种筛选抗衰老药物的方法，包括：
[0015]采用待筛选药物处理衰老细胞；若所述衰老细胞中ERK1/2活性被激活、MEK1/2活性被抑制，则判断所述待筛选药物具备抗衰老能力。
[0016]进一步地，所述衰老细胞为过表达了蛋白progerin的衰老细胞模型。
[0017]第三方面，本专利技术提供一种提高抗衰老药物的抗衰老活性的方法，包括：
[0018]在使用抗衰老药物的同时，提高ERK1/2活性、抑制MEK1/2活性。本专利技术具备如下有益效果：
[0019]本专利技术提供了一种具备抗衰老效果的药物毛壳素的作用靶点，即chaetocin的抗衰老功能依赖于ERK1/2的激活，chaetocin会激活ERK1/2，并且抑制MEK1/2的活性，ERK1/2活性的失活会抑制chaetocin的抗衰老作用；经典的ERK1/2信号通路激活剂EGF、PDGF、PMA不具备抗衰老作用，chaetocin通过激活非经典的ERK1/2信号通路，促使蛋白progerin在细
胞核内的重定位，起到抗衰老效果。本专利技术提供的ERK1/2靶点的相关机制(激活ERK1/2活性，并且抑制MEK1/2活性)可用于早老症、衰老、心血管疾病、组织器官纤维化、脱发、骨质疏松、衰老炎症等相关疾病的药物研发，对于抗衰老药物的筛选和研发具有重要意义
附图说明
[0020]图1为本专利技术实施例1提供的激酶抑制剂对GFP
‑
progerin在核内定位的影响统计结果。
[0021]图2为本专利技术实施例1提供的ERK1/2的抑制对chaetocin引起的GFP
‑
progerin在核内定位的影响；其中，绿色荧光代表早老蛋白GFP
‑
progerin，红色荧光代表核纤层蛋白lamin B1，蓝色荧光代表染色质。
[0022]图3为本专利技术实施例1提供的chaetocin激活非经典的ERK1/2信号通路的结果；其中，β
‑
actin代表内参，pERK1/2、pMEK分别代表激活的ERK1/2、MEK，ERK1/2、MEK分别代表总水平的ERK1/2、MEK。
[0023]图4为本专利技术实施例1提供的经典的ERK1/2信号通路对GFP
‑
progerin定位的影响。
具体实施方式
[0024]以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。
[0025]实施例1
[0026]本专利技术前期研究发现毛壳素(Chaetocin)具有抗衰老效果，并且会改变早老蛋白progerin的细胞定位，使其从细胞核膜定位变为细胞核内定位。本专利技术进一步基于Chaetocin的抗衰老作用进行靶点筛选，流程如下：
[0027]1、接种细胞
[0028]将GFP
‑
progerin衰老细胞传代到10cm培养皿中，并加入10ml培养基，然后放在含有5％CO2的细胞培养箱中进行培养。待细胞密度达到90
‑
100％时，吸掉培养皿中的培养基，用磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗2次，每次2mL；然后吸掉PBS，加入1mL浓度为0.25％的胰酶，双手反复晃动培养皿，使胰酶均匀浸润培养皿底部；最后放在含有5％CO2的细胞培养箱中，37℃消化1
‑
2min；取出消化的细胞，往培养皿中加入0.5mL培养基，终止消化；然后用移液器反复吹吸，将细胞吹匀，并转移到1.5mL离心管中，1000rpm/min离心4min；吸掉上清，加入1mL培养基，轻轻反复吹吸，将细胞混匀，并接种到96孔板中培养。
[0029]本专利技术采用的GFP
‑
progerin衰老细胞模型为采用慢病毒载体，通过在原代人皮肤成纤维细胞过表达蛋白progerin得到，蛋白progerin的编码序列如SEQ ID NO.1所示。
[0030]2、药物处理
[0031]待GFP
‑
progerin衰老细胞密度达到60
‑
80％时，分别向96孔板的单孔中加入chaetocin和小分子抑制剂，放回培养箱中，处理12
‑
48小时。
[0032]3、高通量筛选
[0033]将处理后的GFP
‑
progerin衰老细胞放在高内涵荧光显微镜上进行观察，并捕获大视野的荧光图。筛选96孔板中GFP
‑
progerin核内定位减少的单孔，其对应的小分子抑制剂靶点即为chaetocin的作用靶点。
[0034]所需培养基如下：
[0035]培养基：高糖Dulbecco
’
s modified Eagle medium(DMEM)+5
‑
20％胎牛血清+100U/mL青霉素+100μg/mL链霉素。
[0036]所用抑制剂包括：ERK1/2抑制剂FR180204、MEK1/2抑制剂U0126、MEK抑制剂PD0325901、CDK1抑制剂RO3306、CDKs抑制剂Roscovitine、PKC抑制剂Go6983和PKA抑制剂KT5720。
[0037]所用ERK1/2激活剂包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ERK1/2的激活在抗衰老中的应用。2.ERK1/2的激活在筛选抗衰老药物中的应用。3.ERK1/2的激活在抗衰老药物研发中的应用。4.根据权利要求1
‑
3任一项所述的应用，其特征在于，所述抗衰老包括：抗早老症、衰老、心血管疾病、组织器官纤维化、脱发、骨质疏松或衰老炎症中的一种或多种。5.根据权利要求1
‑
3任一项所述的应用，其特征在于，所述ERK1/2的激活为：在ERK1/2激活的同时，MER1/2的活性被抑制。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述ERK1/2的激活为被毛壳素激活。7.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：张传茂，王向阳，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：