一种衰老SH-SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种衰老SH

【技术实现步骤摘要】
一种衰老SH
‑
SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别是涉及一种衰老SH
‑
SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]氧糖剥夺/再复氧(Oxygen glucose deprivation/reoxygenation，OGD/R)损伤的人神经母瘤细胞(SH
‑
SY5Y)模型可以模拟体内的脑缺血再灌注期间损伤病理过程，己成为离体水平研究脑缺血损伤机制及药物作用的重要手段。通过控制OGD暴露的持续时间，可以观察不同时间节点的病理状况；运用各种分子生物学技术，可以靶向地分析某一功能分子与药物作用的关系。
[0003]现有研究表明脑缺血再灌注损伤具有增龄性差异，那么，在细胞水平上研究药物的神经保护作用就不宜用一般的SH
‑
SY5Y细胞OGD/R模型。因此亟需建立一个衰老SH
‑
SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型，以模拟老龄脑缺血缺氧损伤过程的病理生理过程。
[0004]D
‑
半乳糖(D
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galactose，D
‑
gal)一种细胞衰老诱导剂。正常浓度的D
‑
gal在体内肝脏转化为葡萄糖，而较高浓度的D
‑
gal，可经半乳糖氧化酶催化，产生过氧化氢和醛糖，由此大量的ROS进而引起蛋白质和脂质过氧化，也可造成线粒体损伤和功能紊乱，引起能量代谢障碍，最终导致细胞衰老。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种衰老SH
‑
SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型及其构建方法和应用，以解决上述现有技术存在的问题，本专利技术成功构建了一个衰老细胞OGD/R模型，该模型可以模拟老龄脑缺血缺氧损伤过程的病理生理过程，为后续研究药物的神经保护作用奠定了基础。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种衰老SH
‑
SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型的构建方法，包括以下步骤：
[0008](1)利用D
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半乳糖使SH
‑
SY5Y细胞致衰老，构建得到衰老SH
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SY5Y细胞；
[0009](2)所述衰老SH
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SY5Y细胞先经过缺糖缺氧处理，再经复氧处理，得到所述衰老SH
‑
SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型。
[0010]进一步地，在步骤(1)中，所述D
‑
半乳糖的使用浓度为100mM。
[0011]进一步地，所述D
‑
半乳糖的致衰老时间为48h。
[0012]进一步地，在步骤(2)中，所述缺糖缺氧处理具体为：将步骤(1)得到的衰老SH
‑
SY5Y细胞置于无糖DMEM培养液中，通入99.9％高纯度氮气后密封培养。
[0013]进一步地，通入99.9％高纯度氮气时，流速为1L/min，通入时间为5min。
[0014]进一步地，所述密封培养的时间为1h。
[0015]进一步地，在步骤(2)中，所述复氧处理的时间为24h。
[0016]本专利技术还提供一种根据上述的构建方法构建得到的衰老SH
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SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型。
[0017]本专利技术还提供上述的衰老SH
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SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型在筛选神经保护药物中的应用。
[0018]本专利技术公开了以下技术效果：
[0019]本专利技术首先用CCK8法确定D
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gal作用SH
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SY5Y细胞诱导衰老的浓度和时间，用细胞活力、细胞周期、细胞增殖检测以及SA
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β
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Gal染色法验证细胞衰老，在此基础上用D
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gal致衰老SH
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SY5Y细胞建立OGD/R模型，以CCK8法确定衰老细胞OGD和复氧时间，最终确定衰老SH
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SY5Y细胞OGD/R模型构建中采用100mM D
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gal致衰老48h后OGD 1h和复氧24h模式。本专利技术成功构建了SH
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SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型，该模型可以模拟老龄脑缺血缺氧损伤过程的病理生理过程，为后续研究药物的神经保护作用奠定了基础。
附图说明
[0020]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0021]图1为显微镜下观察不同浓度D
‑
gal作用SH
‑
SY5Y细胞48h后形态变化(100
×
)；其中，A：Control组，B：25mM组，C：50mM组，D：100mM组，E：200mM组，F：400mM组，图中黑色箭头所示为神经细胞间隙增宽，细胞形态改变；A
‑
F中标尺均为100μM；
[0022]图2为不同D
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gal浓度梯度下处理SH
‑
SY5Y细胞48h后细胞活性情况；****表示p<0.001；
[0023]图3为不同D
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gal浓度梯度下β
‑
半乳糖苷酶染色(
×
400)；其中，A
‑
F分别为Control组、25mM组、50mM组、100mM组、200mM组和400mM组的β
‑
半乳糖苷酶染色图，G为数据统计染色细胞的阳性率；*p<0.05；**p<0.01；
[0024]图4为不同D
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gal浓度梯度下Edu染色图(
×
400)；其中，A表示细胞增殖图，B表示数据统计增殖细胞比率；*p<0.05；**p<0.01；A中标尺均为100μM；
[0025]图5为流式细胞仪检测不同D
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gal浓度梯度下的细胞周期；
[0026]图6为不同缺糖缺氧时间细胞存活率的比较，***p<0.005，****p<0.001。
具体实施方式
[0027]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0028]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种衰老SH
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SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)利用D
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半乳糖使SH
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SY5Y细胞致衰老，构建得到衰老SH
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SY5Y细胞；(2)所述衰老SH
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SY5Y细胞先经过缺糖缺氧处理，再经复氧处理，得到所述衰老SH
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SY5Y细胞氧糖剥夺再灌注模型。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述D
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半乳糖的使用浓度为100mM。3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述D
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半乳糖的致衰老时间为48h。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋嫦月，韦文芳，乃坚业，
申请(专利权)人：南宁市第四人民医院，
类型：发明
国别省市：