一种β受体激动剂的快检试纸条及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种β受体激动剂快检试纸条及其制备方法和应用，本发明专利技术所述试纸条包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸和胶板，其中，结合垫包括结合垫和彩色微球与β受体激动剂偶联物，本发明专利技术的试纸条具有体积小、质量轻、便于携带、分析速度快、操作步骤简单等优点，打破了传统检测方法的局限性。对样本量庞大的现场快速检测提供了有力的技术支持。同时也给市场监督管理人员对于现场排查和检测带来了极大的便利。理人员对于现场排查和检测带来了极大的便利。理人员对于现场排查和检测带来了极大的便利。

【技术实现步骤摘要】
一种
β
受体激动剂的快检试纸条及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及一种定量鉴定
，尤其是涉及一种β受体激动剂的快检试纸条及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]“瘦肉精”属于β受体激动剂，对人的危害很大，主要表现为在：急性中毒时出现心悸，面颈、四肢肌肉颤动，手指震颤，足有沉感甚至不能站立，头痛、头晕、恶心、呕吐、乏力，脸部潮红，皮肤过敏性紫色丘疹。
[0003]目前食品中β受体激动剂检测的主要方法有：液质联用、质谱法、气质联用等仪器方法，仪器法虽然可以用于食品中瘦肉精含量的测定，但由于所使用的仪器设备体积过大，设备维护费用高、检测所需时间长，检测操作步骤繁琐，对于样本量大的的现场快速检测而言，这些方法就难以实现。
[0004]免疫层析法因具有操作简便、结果清晰等优点，已成为临床快速诊断领域的热点。现有的瘦肉精试纸检测产品主要是在胶体金免疫层析技术的基础上制成的胶体金免疫层析试纸等系列产品，如专利文献CN203786122U公开了一种测量精度高的瘦肉精检测试纸卡，该试纸卡的金标物结合垫上包被有抗盐酸克伦特罗偶联物、抗莱克多巴胺偶联物和抗沙丁胺醇偶联物金标抗体的混合物，现有技术(陈艺宏.β受体激动剂金标检测卡的技术研究[D].福州大学,2017.)公开了β受体激动剂金标检测卡的制备条件及样品的前处理条件进行了优化,并披露了β受体激动剂金标检测卡所需抗原抗体的制备，现有技术(姜艳彬,孙冠如,王海,等.盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制[C],2011)公开以胶体金标记盐酸克伦特罗单克隆抗体竞争性膜层析技术制成了猪尿液中盐酸克伦特罗残留检测的快速检测试纸条。
[0005]然而，目前胶体金免疫层析试纸条主要存在以下缺陷：1、胶体金显色单一，通常只能显示单一的红色，2、胶体金粒径不易控制，很难根据试纸的需要调整粒径的大小；3、胶体金标记过程中需要用到强还原剂，对人体健康有一定影响；4、胶体金表面没有生物活性基团，与抗体的结合完全靠静电作用，稳定性较差；5、胶体金粒径较h是圆形，粒径较大时为椭圆形，形状不稳定。
[0006]综上所述，亟需开发一种成本低廉、操作简便、结果直观准确、灵敏度高、稳定性好的免疫层析检测方法。

技术实现思路

[0007]为了克服上述现有技术提到的问题，本专利技术目的在于提供一种β受体激动剂快检试纸条及其检测方法，本专利技术提供的试纸条成本低廉、操作简便、结果直观准确、灵敏度高、稳定性好。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0009]本专利技术第一方面提供了一种β受体激动剂快检试纸条，包括样品垫、结合垫、NC膜、
吸水纸和胶板，其中，结合垫包括结合垫和彩色微球与β受体激动剂偶联物；
[0010]所述结合垫由下步骤制备：
[0011]a、浸泡：将结合垫置于结合垫浸泡液中浸泡，取出浸泡好的结合垫烘干；
[0012]b、彩色微球活化：取彩色微球，超声，取超声好的彩色微球200μL加MES溶液混合均匀，离心、弃上清液，重复2次后再加入MES溶液混合均匀、超声；
[0013]用上述MES溶液配制浓度5～20mol/L的NHS溶液，取NHS溶液加入超声好的彩色微球中，再用纯水配制EDC，EDC溶液的浓度为10～20mol/L，取EDC溶液1～5μL加入到上述彩色微球中，用锡箔纸包裹避光摇床反应5～30min，为活化后的彩色微球；
[0014]c、彩色微球和β受体激动剂抗体偶联物的制备：取1μg/μL的β受体激动剂抗体1～5μL加入活化后的彩色微球中混合均匀，避光摇床反应0.5～3h，加入5～15μL的0.05～3mol/L的乙醇胺溶液混合均匀，避光摇床反应后离心，弃上清夜，用300～1000μL的微球稀释液混合均匀，超声5min，避光摇床反应1h，离心,弃上清液，用100～300μL的微球稀释液混合均匀、超声，形成均匀的β受体激动剂抗体
‑
彩色微球溶液，将溶液置于在2～8℃下保存；
[0015]所述β受体激动剂抗体的可以取1μL、1.5μL、2μL、2.5μL、3μL、3.5μL、4μL、4.5μL或 5μL；
[0016]d、喷金和烘干：取出步骤c制备的溶液，加入喷金稀释液稀释，稀释后用碳酸钾调节 pH为8～9.5，在步骤a制备的结合垫上进行喷金，将喷金后的结合垫37～48℃烘烤1～1.5h；
[0017]优选的，所述结合垫37℃烘烤1.5h；
[0018]优选的，所述步骤d中用碳酸钾调节pH为9；
[0019]所述结合垫浸泡液为pH＝7～7.5的0.03～0.05mol/L的Tris
‑
HCL缓冲溶液，其中包含3～5％的海藻糖、0.3～0.5％BSA、0.05～0.1％吐温；
[0020]优选的，所述结合垫浸泡液为pH＝7.4的0.05mol/L的Tris
‑
HCL缓冲溶液，其中包含5％的海藻糖、0.5％BSA、0.1％吐温；
[0021]其中，所述β受体激动剂抗体为异丙喘宁抗体、氯丙那林抗体、西马特罗抗体、特布他林抗体、妥布特罗抗体、西布特罗抗体、沙丁胺醇抗体、齐帕特罗抗体、克伦特罗抗体、莱克多巴胺抗体、非诺特罗抗体、马布特罗抗体、溴代克伦特罗抗体、马贲特罗抗体、苯乙醇胺 A抗体、溴布特罗中的一种或多种；
[0022]所述微球稀释液为：0.01～0.02mol/LPBS和0.5～1.2％BSA；
[0023]优选的，所述微球稀释液为0.01mol/LPBS和1％BSA；
[0024]优选的，所述β受体激动剂抗体
‑
彩色微球溶液的中的β受体激动剂抗体浓度为1～5μL/mL；
[0025]所述喷金使用的稀释液的组成为：0.02％硼酸，0.2％PEG20000，0.02％防腐剂，10％海藻糖，0.25％吐温，1％BSA。
[0026]所述喷金的量为6～9.9μL/cm，优选为6μL/cm。
[0027]所述6μL/cm为每厘米喷金步骤d中所述的加入喷金液、用碳酸钾调节的溶液6μL。
[0028]步骤b中，所述MES溶液的pH选自4～5，优选为4.5～5；
[0029]本专利技术中，所述MES溶液pH影响微球与抗体的结合，当pH为4.5～5时，微球与抗体结合效果最佳。
[0030]进一步的，所述β受体激动剂抗体量为2～5μL/mL；
[0031]比如，所述β受体激动剂抗体量可以为2、3、4、5μL/mL；
[0032]进一步的，所述彩色微球的粒径为100～300nm，
[0033]比如，所述彩色微球的粒径可以为100、200、300nm，优选为300nm。
[0034]进一步的，所述的样品垫为玻璃纤维材质、聚酯纤维膜；
[0035]优选为玻璃纤维膜；
[0036]所述玻璃纤维膜的厚度为0.2～0.6mm，优选为0.3～0.45mm；
[0037]所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种β受体激动剂快检试纸条，其特征在于，包括样品垫、结合垫、NC膜、吸水纸和胶板，其中，结合垫包括结合垫基体和彩色微球与β受体激动剂偶联物；所述结合垫基体由下步骤制备：a、浸泡：将结合垫置于结合垫浸泡液中浸泡，取出浸泡好的结合垫烘干；b、彩色微球活化：取彩色微球，超声，取超声好的彩色微球200μL加MES溶液混合均匀，离心、弃上清液，重复2次后再加入MES溶液混合均匀、超声；用上述MES溶液配制浓度5～20mol/L的NHS溶液，取NHS溶液加入超声好的彩色微球中，再用纯水配制EDC，EDC溶液的浓度为10～20mol/L，取EDC溶液1～5μL加入到上述彩色微球中，用锡箔纸包裹避光摇床反应5～30min，为活化后的彩色微球；c、彩色微球和β受体激动剂抗体偶联物的制备：取1μg/μL的β受体激动剂抗体1～5μL加入活化后的彩色微球中混合均匀，避光摇床反应0.5～3h，加入5～15μL的0.05～3mol/L的乙醇胺溶液混合均匀，避光摇床反应后离心，弃上清夜，用300～1000μL的微球稀释液混合均匀，超声5min，避光摇床反应1h，离心,弃上清液，用100～300μL的微球稀释液混合均匀、超声，形成均匀的β受体激动剂抗体
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彩色微球溶液，将溶液置于2～8℃下保存；d、喷金和烘干：取出步骤c制备的溶液，加入喷金稀释液稀释，稀释后用碳酸钾调节pH为8～9.5，在步骤a制备的结合垫上进行喷金，将喷金后的结合垫37～48℃烘烤1～1.5h；所述结合垫浸泡液为pH＝7～7.5的0.03～0.05mol/L的Tris
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HCL缓冲溶液，其中包含质量体积比为3～5％的海藻糖、0.3～0.5％BSA、0.05～0.1％吐温；其中，所述β受体激动剂抗体选自：异丙喘宁抗体、氯丙那林抗体、西马特罗抗体、特布他林抗体、妥布特罗抗体、西布特罗抗体、沙丁胺醇抗体、齐帕特罗抗体、克伦特罗抗体、莱克多巴胺抗体、非诺特罗抗体、马布特罗抗体、溴代克伦特罗抗体、马贲特罗抗体、苯乙醇胺A抗体、溴布特罗中的一种或多种；所述微球稀释液为：0.01～0.02mol/LPBS和0.5～1.2％BSA；所述步骤c中，微球稀释液添加量为300～1000μL；所述喷金使用的稀释液组成为：0.02％硼酸、0.2％PEG20000、0.02％防腐剂、10％海藻糖、0.25％吐温和1％BSA；所述喷金的量为6～9.9μL/cm，优选为6μL/cm。2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述β受体激动剂抗体选自莱克多巴胺抗体、沙丁胺醇抗体、盐酸克伦特罗抗体。3.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述β受体激动剂抗体量为2～5μL/mL。4.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述彩色微球的粒径为100～300nm，优选为300nm。5.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于，所述的样品垫为玻璃纤维材质、聚酯纤维膜；优选为玻璃纤维膜；所述玻璃纤维膜的厚度为0.2～0.6mm，优选为0.3～0.45mm；所述玻璃纤维膜的爬速5～70mm/60s；优选的，所述玻璃纤维膜的爬速5～50mm/60s；优选的，所述的结合垫材质为玻璃纤维，吸水量为450
±
50g/m2；
所述的NC膜选自宽度为20～25mm，爬速为100～125s/4cm的NC膜；所述的吸水纸选自爬速40～180s/mm、厚度0.87～1.13mm的吸水...

【专利技术属性】
技术研发人员：李荣强，刘闯军，李星辰，罗瑞杰，贾子健，高世峰，
申请(专利权)人：河南黄淮检测科技有限公司华高生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：