一种限制性内切酶与纳米孔检测结合对DNA的甲基化方法技术

本发明专利技术公开了一种限制性内切酶与纳米孔检测结合对DNA的甲基化方法，其包括如下步骤：用SEPT9片段作为甲基化分析片段，将SEPT9嵌入PUC57中得到PCST9DNA；对PCST9DNA进行甲基化处理，得到甲基化处理后的PCST9DNA；将甲基化处理后的PCST9DNA以及未甲基化的PCST9DNA进行双内切酶消化，经过甲基化处理的PCST9DNA无法被HhaI和BstUI内切酶识别而保持完整的DNA双链，未甲基化的PCST9DNA则被HhaI和BstUI内切酶识别并完全消化；对甲基化处理后的PCST9DNA通过聚合酶链反应扩增出双链DNA产物；用玻璃管纳米孔传感器对双链DNA产物进行分析。分析。分析。

【技术实现步骤摘要】
一种限制性内切酶与纳米孔检测结合对DNA的甲基化方法


[0001]本专利技术涉及DNA甲基化领域，具体涉及一种限制性内切酶与纳米孔检测结合对DNA的甲基化方法。

技术介绍

[0002]DNA甲基化是通过不改变基因序列而引起遗传变化的最重要的表观遗传修饰之一1。通常DNA甲基化的发生比较常见的是在胞嘧啶
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鸟嘌呤二核苷酸CPG岛中胞嘧啶5位碳原子上，而异常的DNA甲基化也是早期癌症发生的标志2。故DNA甲基化分析已成为癌症诊断和治疗监测中最有前景的生物标志之一3，DNA甲基化分析也得到了越来越多的研究，其中应用较广泛的DNA甲基化分析方法包括亚硫酸盐处理法4和甲基化敏感限制性内切酶分析法5。亚硫酸氢钠处理法是DNA甲基化分析方法中被认为是DNA甲基化分析的金标准，它依赖于亚硫酸氢钠将未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不变6。该法可以区分甲基化胞嘧啶和胞嘧啶，也有较高的灵敏度，但它在亚硫酸氢钠转换时可能会导致DNA降解从而使得DNA浓度降低7。在此方法的基础上，通过如滚环扩增8(RCA)、超支化滚环扩增9(HRCA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种限制性内切酶与纳米孔检测结合对DNA的甲基化方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步：用SEPT9片段作为甲基化分析片段，并将SEPT9嵌入PUC57中，得到PCST9DNA；第二步：对PCST9DNA进行甲基化处理，得到甲基化处理后的PCST9DNA；第三步：将甲基化处理后的PCST9DNA以及未甲基化的PCST9DNA进行双内切酶消化，经过甲基化处理的PCST9DNA无法被HhaI和BstUI内切酶识别而保持完整的DNA双链，未甲基化的PCST9DNA则被HhaI和BstUI内切酶识别并完全消化；第四步：对甲基化处理后的PCST9DNA通过聚合酶链反应扩增出双链DNA产物；第五步：用玻璃管纳米孔传感器对双链DNA产物进行分析。2.根据权利要求1所述的限制性内切酶与纳米孔检测结合对DNA的甲基化方法，其特征在于：所述第三步中的双内切酶消化包括以下内容：将足够数量的甲基化与未甲基化PCST9DNA各自加入到20μL包含1
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【专利技术属性】
技术研发人员：王家海，陈兰芳，
申请(专利权)人：广州大学，
类型：发明
国别省市：