一种外泌体小非编码RNA分子标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种外泌体小非编码RNA分子标志物及其应用，属于肿瘤液体活检和分子诊断领域。所述的外泌体小非编码RNA分子标志物为tRNA

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体小非编码RNA分子标志物及其应用


[0001]本专利技术属于肿瘤液体活检和分子诊断领域，具体涉及一种外泌体小非编码RNA分子标志物及其应用。

技术介绍

[0002]癌症一直威胁着人类的健康，目前每年全世界约有700万人死于癌症，其发病隐匿，进展迅速，在出现临床症状或于医院就诊时，往往已经发展到了晚期，大多数患者在确诊后数年内死亡。在欧美发达国家的恶性肿瘤患者5年生存率为60％
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70％，而中国仅为30.9％，农村生存率更是只有城市的一半。造成肿瘤死亡率如此高的关键因素之一是缺乏早期诊断手段，使病人失去早期治疗的机会。以食管癌为例，我国是食管癌高发的国家，发病人数占世界的50％，且不同于西方国家，我国的食管癌多为鳞癌。食管癌早期无明显症状，中晚期出现吞咽梗阻，绝大多数病人就诊时已经处于晚期，错过了最佳治疗时间。而有调查证据表明相对于晚期治疗，早期治疗可使病人的5年生存率从20％
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30％提高到60％
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80％。
[0003]目前食管癌的诊断依赖于影像学和组织病理学，前者只能检测到足够大的肿瘤，而后者需要采用食管内镜或者外科手术的方法从患者身上获取肿瘤组织。上述两种手段存在诸多不足，如灵敏性差，侵入式检查往往使得患者依从性差，成本较高，检查效率低，无法大批量开展筛查、普查，而且还受到医生的技术水平以及病人的身体状况等诸多因素的影响，难以用在早期筛查。所以食管癌的早期诊断需要使用敏感性好，无创或微创，基于肿瘤特异性标志物的诊断技术。
[0004]现有的肿瘤的标志物包含DNA、RNA、蛋白质、非编码RNA等多种类型，从标志物的表现形式可分为基因突变、扩增、高表达等。近年来一些小非编码RNA逐渐被发现可作为肿瘤的标志物，如miRNA、piRNA、snoRNA、小非编码RNA、tsRNA以及一些未命名的非编码RNA等。这些不同类型的小非编码RNA在细胞内参与多种生物学调控过程，并可参与细胞间的交流、调控。研究表明，在肿瘤发生时，细胞的多种类型的小RNA表达量均会发生不同程度的改变，并参与到肿瘤进展过程或作为肿瘤发生发展的产物。tsRNA是一类产生于转运RNA(tRNA)的小RNA，越来越多的研究表明，tsRNA的表达受到时间和空间上的调控，在许多生物学过程中起重要作用。tsRNA易在氨基酸缺乏、氧化应激、低氧等应激压力刺激下，经angiogenin、RNY1、Dicer等RNA酶切割产生。由于肿瘤微环境中的营养缺乏、低氧等因素容易驱动产生tsRNA，故tsRNA是潜在的肿瘤特异性靶标。目前食管癌中还没有以tsRNA作为标志物的研究。
[0005]目前液体活检标志物的来源主要包括CTC、ctDNA和外泌体。CTC和ctDNA主要来源是血液，研究较早，但各有其局限性，CTC是实体瘤释放到外周血中的循环肿瘤细胞，ctDNA是肿瘤细胞释放到外周血中的DNA，二者虽有一定优势，但是这两种检测基因突变的方法都存在缺陷和瓶颈。ctDNA偏前端，主要通过检测突变和DNA甲基化用于癌症早期筛查，个性化用药指导和耐药性分析，但其在血浆中含量有限(10
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20ng/mL)，如何有效的富集仍是相关分析的最关键步骤和难点。CTC偏后端，主要用于癌症的实时监测，判断预后等，但也存在诸
多问题。比如目前检测方法只能找到少量肿瘤细胞，起不到指导个体化用药的目的；而且循环肿瘤细胞有很多个分型，目前检测方法只能检测到很少几个分型，漏检率高，且检测费用高。
[0006]相比于CTC和ctDNA，外泌体作为液体活检标志物的新兴载体在疾病诊断中正扮演着越来越重要的角色。外泌体可由B细胞、T细胞、树突细胞、肥大细胞、内皮细胞、成纤维细胞、间充质干细胞和肿瘤细胞等机体内几乎各种细胞分泌释放，且存在于血液、唾液、尿液、腹水、脑脊液和母乳等多种体液中，其中含有蛋白质、核酸和代谢产物等多样性内容物，与各种疾病的发生与进程密切相关。
[0007]唾液是液体诊断的重要组成部分，近年来得到了越来越多的关注，在疾病早期诊断中具有明显的作用。唾液腺血供丰富，唾液被认为是血循环的末端产物，很多血液中的分子物质也见于唾液中。唾液被称为血液的超滤液，比起血液更加纯净，去掉了血液中的很多有型成分。相较其他液体而言，唾液具有易操控，不易凝结，消除了抗凝处理对检验结果的影响。同时，唾液采集具有非侵袭性，受试者无痛苦和不适，具有可重复性，安全而廉价。另外，血液中成分复杂，来源多样，信息斑驳，在检测分析的过程中可能会引起非特异性及受到流体动力学作用的干扰，血液中的大量细胞具有数秒至数周或一个月以上的半衰期，也可能对分析结果产生影响，而唾液则不存在这些问题。总之，唾液作为液体活检标志物的来源较之其他体液具有较明显的优势。
[0008]虽然液体活检正在发展，但目前还需要完善。一是液体的种类，二是检测指标。选择合适的体液进行检测对于液体活检的临床效能至关重要，目前大部分液体活检主要以血液为检测对象，但是血液中细胞成分复杂，血液中的部分游离DNA、外泌体等来源于血细胞(如血小板)，会对检测结果造成较大影响。此外，合适的检测指标也是提高液体活检灵敏度与特异度的重要因素，液体活检指标首先要易于保存，稳定性强，不易受酶或外界因素的影响而降解，其次要有疾病特异性，可准确反应体内疾病的进展状态。
[0009]综上，现有技术往往存在以下缺点：1)目前用在临床上的ctDNA和CTC为主的检测手段，因其局限性难以做到恶性肿瘤的早期诊断；2)目前以血液为采集标本的液体活检手段除了凝血问题之外，还有一定的创伤性，给患者带来不适，存在患者依从性不好等问题，不利于实现连续监测；3)目前的检测手段缺乏足够的敏感性与特异性；4)取材不方便且不易于存放；5)操作的进行对医生要求较高。目前尚未见有能够很好地解决上述问题的技术。
[0010]目前，尚未见有将外泌体小非编码RNA分子标志物用于食管癌诊断的相关报道。

技术实现思路

[0011]针对现有技术中存在的缺点与不足，本专利技术的目的在于提供一种外泌体小非编码RNA分子标志物。
[0012]本专利技术的另一目的在于提供上述外泌体小非编码RNA分子标志物的应用。
[0013]本专利技术的目的通过如下技术方案实现：
[0014]一种外泌体小非编码RNA分子标志物，所述的标志物为tRNA
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GlyGCC
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5和sRESE中的至少一种；
[0015]所述的tRNA
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GlyGCC
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5的核苷酸序列如下：
[0016]GCATGGGTGGTTCAGTGGTAGAATTT(SEQ ID NO:1)；
[0017]所述的sRESE的核苷酸序列如下：
[0018]GCATGATCTGAGTTCCTGTTTCTTCTG(SEQ ID NO:2)。
[0019]所述的外泌体优选为唾液外泌体。
[0020]所述的外泌体小非编码RNA分子标志物在制备肿瘤诊本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外泌体小非编码RNA分子标志物，其特征在于，所述的标志物为tRNA
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GlyGCC
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5和sRESE中的至少一种；所述的tRNA
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GlyGCC
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5的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述的sRESE的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。2.根据权利要求1所述的外泌体小非编码RNA分子标志物，其特征在于，所述的外泌体为唾液外泌体。3.权利要求1～2任一项所述的外泌体小非编码RNA分子标志物在制备肿瘤诊断产品中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤为恶性肿瘤。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的恶性肿瘤为食管癌。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的食管癌包括食管鳞癌。7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的肿瘤诊断产品包括肿瘤诊断试剂盒。8.一种肿瘤诊断试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1～2任一项所述的外泌体小非编...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书八页序列表一页附图三页，
申请(专利权)人：暨南大学，
类型：发明
国别省市：