一种新型DyP-type过氧化物酶基因的克隆及重组酶的染料脱色方法技术

本发明专利技术公开了一种新型DyP

【技术实现步骤摘要】
一种新型DyP
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type过氧化物酶基因的克隆及重组酶的染料脱色方法


[0001]本专利技术涉及微生物
，更具体地说，涉及一种新型DyP
‑
type过氧化物酶基因的克隆及重组酶的染料脱色方法。

技术介绍

[0002]孔雀绿属于三甲苯烷类染料，广泛用于真丝、羊毛、皮革、麻制品、陶瓷制品、棉布等的染色，并因其对鱼体寄生虫和鱼卵中霉菌等杀灭效果非常显著而在水产养殖上广泛应用。孔雀石绿具有高残留、高生物毒性和致癌、致畸、致突变等作用，威胁人体健康，造成潜在的环境危害，鉴于其生物毒性和致癌性，孔雀石绿在2002年已被全世界禁止使用，但一些地区的环境中仍存在孔雀石绿，因此孔雀石绿等三苯基甲烷类染料的脱色降解研究对于治理染料污染具有重要的理论意义和实用价值。
[0003]许多研究表明，微生物具有极高的降解有机染料的能力，目前分离到的脱色微生物主要有真菌、藻类和细菌。如Raoultella属菌株(梅嬛等2010)、绿脓假单胞菌(林少芳等2004)、无色杆菌属Achromobacter(李妮等2009)等。韩启灿等(2014)从50余种野生大型真菌中筛选到3种对孔雀石绿染料有较强脱色作用的菌株即落叶松附毛孔菌、粘小奥德蘑和皱盖囊皮菌，推测，落叶松附毛孔菌对孔雀石绿脱色的活性成分可能是漆酶。
[0004]杏鲍菇(Pleurotus eryngii)，学名刺芹侧耳，是一种常见的人工栽培食用菌，也是我国工厂化食用菌最主要种类之一。刘子璐等(2019)发现栽培杏鲍菇的菌渣具有孔雀石绿脱色能力，并且推测染料脱色效果与漆酶活性相关。
[0005]以前的报道都是推测孔雀石绿脱色的酶为漆酶，为此我们实验发现来自刺芹侧耳的一种新DyP
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type过氧化物酶可能是脱色酶，所以我们进行了相应的验证，并对其在大肠杆菌中的重组表达、纯化及鉴定。

技术实现思路

[0006]1.要解决的技术问题
[0007]针对现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种新型DyP
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type过氧化物酶基因的克隆及重组酶的染料脱色方法，本专利技术在实现对染料脱色的基础上，还可以提高对染料的脱色率。
[0008]2.技术方案
[0009]为解决上述问题，本专利技术采用如下的技术方案：
[0010]一种新型DyP
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type过氧化物酶基因的克隆及重组酶的染料脱色方法，以下步骤：
[0011]S1、从刺芹侧耳菌株中获得编码DyP
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type过氧化物酶基因的cDNA序列和蛋白序列；
[0012]S2、电子克隆的基因序列cDNA 1515与克隆载体pCZN1相连获得重组表达载体pCZN1
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cDNA 1515；
[0013]S3、转化到大肠杆菌细胞，异源表达获得DyP
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type过氧化物酶；
[0014]S4、用此酶对终浓度为5mg/L的孔雀石绿染料的脱色，1h后脱色率超过50％。
[0015]作为本专利技术的一种优选方案，所述S1中cDNA序列为ATGACTACACCTGCACCACCCCTCGACCTCAACAATATTCAAGGTGATATCCTCGGCGGATTGCCCAAGAAAACCGAGACCTACTTCTTCTTCGATGTTACCAACGTCGATCGATTCAAGGCCAACATGGCCCATTTCATTCCTCACGTAAAGACGTCTGCAGGAATCATCAAGGACCGCGAAGCGATTAAGGAGCACAAACGTCAGAAGTTGCCAGGCTTGGTCCCCATGGCCGCTGTCAACATTTCCTTCTCTCATCTCGGTCTTCAGAAGCTTGGAATCAACGATGACCTGAGCGATGATTCCTTTACGACTGGCCAGCGCAAGGATGCTGAAGTTCTTGGTGATCCTGGTGCTAAGAATGGTGACACTTTCACCCCAGCTTGGGAGGCCCCCTTCCTCAGGGATATCCACGGTGTCATATTTGTTGCTGGGGATTGCCATGCGTCGGTGGACAAGAAACTCCTCGAGATCAAGCTCATCTTCGGTGTTGGCACCTTACATGCTTCAATCTCCGAGGTGACCCACGTTCGCGGAGATGTCCGTCCGGGCGATGTCCACGCCCATGAACACTTCGGCTTCCTCGACGGTATCTCCAATCCTGCTGTCGACCAATTCGACCAGAACCCATTCCCAGGTCAAGATTCGATCAGGCCGGGGTTCATCCTGGCCAAGGAAAATGGAGATAGTCGCGCAGCTGCCAGACCTGATTGGGCTAAAGATGGAAGTTTCTTGACCTTCAGATACCTGTTCCAGATGGTCCCTGAGTTCGACGACTTCCTCGAGAGCAACCCCATTGTTCTACCTGGTTTATCGAGGAAGGAAGGTAGCGAGCTCCTTGGAGCTAGGATTGTAGGCCGATGGAAGAGCGGTGCGCCTATCGAGATAACTCCCCTCAAGGACGACCCGGAGCTGGCGGCCGACCCTCAAAGGAACAACGATTTCGACTTCGGCGATTCCTTAGTTCAAGGTGATCAGGCGAGGTGCCCCTTCGCCGCTCACATCCGAAAGGCGTACCCCCGCAACGATTTGGAGGGTCCCCCTTTGAACGCTGACATTGACAACCGTCGAATCATGCGCCGCGGGATTCAATTCGGCCCCGAGGTCACAATCCTGGAGCGCCTGAACAAGAAGACTCACCACGGACGCGGACTTCTATTTGTCTGCTACTCCAGCAGTATCGATGATGGCTTCCACTTCATTCAGGAATCTTGGGCCAATGCTCCGGACTTCCCAGTTAATGCTGTGACTTCGACTGGGCCCATCCCACCTTTGGAAGGCATTGTACCCGGCTTTGATGCTATCATCGGACAGAAGGTTGGTGGAGGTATCAGGCAGATTAGTGGTACCAACCCCAACGACCCCACCACGAACATCACGCTTCCGGACCAAGACTTCGTTGTTCCAAGGGGTGGAGAATATTTCTTCTCTCCGTCAATCACGGCTTTGAAGACTAAATTCGCTACTGGCGTTGCTTCTCCTGCTCCTCAGACCCAAGCTCCAATCTCTGCTTGA。
[0016]作为本专利技术的一种优选方案，所述cDNA序列中A为腺嘌呤，所述cDNA序列中T为腺嘌呤胸腺嘧啶，所述cDNA序列中C为腺嘌呤胞嘧啶，所述cDNA序列中G为腺嘌呤鸟嘌呤。
[0017]作为本专利技术的一种优选方案，所述cDNA编码蛋白序列为本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型DyP
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type过氧化物酶基因的克隆及重组酶的染料脱色方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、从刺芹侧耳菌株中获得编码DyP
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type过氧化物酶基因的cDNA序列和蛋白序列；S2、电子克隆的基因序列cDNA 1515与克隆载体pCZN1相连获得重组表达载体pCZN1
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cDNA 1515；S3、转化到大肠杆菌细胞，异源表达获得DyP
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type过氧化物酶；S4、用此酶对终浓度为5mg/L的孔雀石绿染料的脱色，1h后脱色率超过50％。2.根据权利要求1所述的一种新型DyP
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type过氧化物酶基因的克隆及重组酶的染料脱色方法，其特征在于，所述S1中cDNA序列为ATGACTACACCTGCACCACCCCTCGACCTCAACAATATTCAAGGTGATATCCTCGGCGGATTGCCCAAGAAAACCGAGACCTACTTCTTCTTCGATGTTACCAACGTCGATCGATTCAAGGCCAACATGGCCCATTTCATTCCTCACGTAAAGACGTCTGCAGGAATCATCAAGGACCGCGAAGCGATTAAGGAGCACAAACGTCAGAAGTTGCCAGGCTTGGTCCCCATGGCCGCTGTCAACATTTCCTTCTCTCATCTCGGTCTTCAGAAGCTTGGAATCAACGATGACCTGAGCGATGATTCCTTTACGACTGGCCAGCGCAAGGATGCTGAAGTTCTTGGTGATCCTGGTGCTAAGAATGGTGACACTTTCACCCCAGCTTGGGAGGCCCCCTTCCTCAGGGATATCCACGGTGTCATATTTGTTGCTGGGGATTGCCATGCGTCGGTGGACAAGAAACTCCTCGAGATCAAGCTCATCTTCGGTGTTGGCACCTTACATGCTTCAATCTCCGAGGTGACCCACGTTCGCGGAGATGTCCGTCCGGGCGATGTCCACGCCCATGAACACTTCGGCTTCCTCGACGGTATCTCCAATCCTGCTGTCGACCAATTCGACCAGAACCCATTCCCAGGTCAAGATTCGATCAGGCCGGGGTTCATCCTGGCCAAGGAAAATGGAGATAGTCGCGCAGCTGCCAGACCTGATTGGGCTAAAGATGGAAGTTTCTTGACCTTCAGATACCTGTTCCAGATGGTCCCTGAGTTCGACGACTTCCTCGAGAGCAACCCCATTGTTCTACCTGGTTTATCGAGGAAGGAAGGTAGCGAGCTCCTTGGAGCTAGGATTGTAGGCCGATGGAAGAGCGGTGCGCCTATCGAGATAACTCCCCTCAAGGACGACCCGGAGCTGGCGGCCGACCCTCAAAGGAACAACGATTTCGACTTCGGCGATTCCTTAGTTCAAGGTGATCAGGCGAGGTGCCCCTTCGCCGCTCACATCCGAAAGGCGTACCCCCGCAACGATTTGGAGGGTCCCCCTTTGAACGCTGACATTGACAACCGTCGAATCATGCGCCGCGGGATTCAATTCGGCCCCGAGGTCACAATCCTGGAGCGCCTGAACAAGAAGACTCACCACGGACGCGGACTTCTATTTGTCTGCTACTCCAGCAGTATCGATGATGGCTTCCACTTCATTCAGGAATCTTGGGCCAATGCTCCGGACTTCCCAGTTAATGCTGTGACTTCGACTGGGC...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕国英，张作法，陈建飞，陈锦荣，毛延卿，
申请(专利权)人：浙江省农业科学院，
类型：发明
国别省市：