用于选择性裂解细菌的嵌合蛋白质制造技术

本发明专利技术提供了用于选择性抑制某些靶向的细菌物种同时对密切相关的非靶标细菌物种具有很小至没有影响的嵌合胞外溶素。具体而言，本公开提供了用于选择性抑制金黄色葡萄球菌和/或人型葡萄球菌而非表皮葡萄球菌生长的多肽。还提供了用于选择性抑制靶标细菌物种的组合物和方法。合物和方法。合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于选择性裂解细菌的嵌合蛋白质
专利技术背景
[0001]如WO2007/130655中首次公开的，噬菌体来源的嵌合胞外溶素(ectolysins)可作为广谱抗葡萄球菌的蛋白质，其杀伤葡萄球菌(Staphylococci)不同家族的成员，包括凝固酶阳性金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)和其它凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)。在WO2007/130655中详细描述的被称为P128的嵌合蛋白是这种性质的示例性胞外溶素。葡萄球菌(Staphylococcus spp.)的细菌(尤其是CoNS)具有在医疗装置上定殖的能力，并且在允许的条件下表现为引起严重血流感染的病原体。P128的广泛抗葡萄球菌的特性对于治疗由这些细菌群引起的全身性感染特别有用。
[0002]对人类微生物组作用的认识不断提高，促使人们寻找对健康，微生物组影响最小的化学品/抗细菌剂。这在皮肤适应症的局部应用中得到了最好的例证，其中有利于维持正常的皮肤微生物组，特别是有益的皮肤菌群(如表皮葡萄球菌)以防止生态失调，并选择性地仅消除有问题的细菌(如金黄色葡萄球菌)。具体来说，表皮葡萄球菌是皮肤微生物组的一个非常重要的成员，其中它不仅可以防止致病性金黄色葡萄球菌的定殖，还可以通过减少损伤后的炎症、增强皮肤T细胞的发育和促进宿主抗菌肽的表达来改善皮肤免疫功能。因此，在不干扰皮肤上有益葡萄球菌的情况下，用作皮肤应用以去除有问题的细菌的靶向药物具有很高的价值。
[0003]本专利技术的专利技术人构建了嵌合抗葡萄球菌溶素文库，其包括具有催化半胱氨酸组氨酸依赖性氨基水解酶/肽酶(CHAP)结构域和靶向来自溶葡萄球菌素的Sh3b结构域的P128变体。这两个功能结构域对于抗细菌活性都是必不可少的，并且保留在本文所述的所有变体中。寻找选择性溶素的第一步是开发筛选测定；使用该测定，专利技术人在文库中筛选了仅对病原体具有选择性的溶素。本专利技术因此提供了新的组合物和方法，其允许选择性抑制某些细菌物种，尤其是葡萄球菌属中的那些，而对其它密切相关的细菌物种没有显著的负面影响。专利技术概述
[0004]WO2007/130655提供了可用于抑制细菌生长的嵌合多肽，其包括在涉及细菌感染的情况下抑制细菌生长。在嵌合多肽中，一些是包含提供了溶壁(muralyitc)活性的由葡萄球菌肌尾病毒K的orf56编码的蛋白质的至少一部分和提供靶标细菌细胞结合活性的溶葡萄球菌细菌素、溶葡萄球菌素的非催化细胞壁结合结构域(CBD)的至少一部分的融合蛋白。本申请首次提供了来源于最初在WO2007/130655中公开的那些嵌合多肽的嵌合多肽(包括一些突变体或变体)用于选择性抑制属于葡萄球菌属的某些细菌物种(如金黄色葡萄球菌或人型葡萄球菌)，而非属于同一属的其它细菌物种(如表皮葡萄球菌)生长的用途的公开。
[0005]因此，在第一方面，本专利技术提供了新的嵌合多肽，其能够选择性地抑制某些靶标细菌物种的生长，同时不影响同一属内的非靶标细菌物种。嵌合多肽可以包含SEQ ID NO:2、6或8的氨基酸序列。在一些实施方案中，多肽可以由SEQ ID NO:2、6或8的氨基酸序列组成。例如，多肽可以包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或可以由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成；多肽可以包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或可以由SEQ ID NO:6的氨基酸序列组成；或者多肽可以包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或可以由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成。还提供了
组合物，其包含(1)上文和本文所述多肽中的一种或多种，和(2)生理学上可接受的赋形剂(如配制用于局部应用的赋形剂)。
[0006]本专利技术还提供了编码上文和本文所述的嵌合多肽的多核苷酸序列、它们相应的表达盒、载体和宿主细胞。在一些实施方案中，本专利技术提供了包含编码多肽的多核苷酸序列的核酸，所述多肽包含SEQ ID NO:2、6或8或由SEQ ID NO:2、6或8组成。在一些实施方案中，本专利技术提供了包含此类多核苷酸序列的表达盒，或包含所述表达盒的载体，或包含上述或本文所述的表达盒或载体的宿主细胞。
[0007]在一些实施方案中，提供了用于重组产生包含SEQ ID NO:2、6或8中任一个或由SEQ ID NO:2、6或8中任一个组成的多肽的方法，所述方法包括在允许表达由所述表达盒或所述载体编码的多肽的条件下，培养包含编码此类多肽的表达盒(如载体的一部分)的所述宿主细胞。
[0008]在第二方面，本专利技术提供了用于特异性抑制靶标细菌物种而不会对其它非靶向的细菌物种造成显著影响的方法。例如，所要求保护的方法用于选择性抑制金黄色葡萄球菌和/或人型葡萄球菌而非表皮葡萄球菌的生长，并且它涉及以下步骤：将有效量的包含SEQ ID NO:2、4、6或8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2、4、6或8的氨基酸序列组成的多肽应用于其中存在金黄色葡萄球菌或人型葡萄球菌且存在表皮葡萄球菌的位置，从而抑制金黄色葡萄球菌和/或人型葡萄球菌的生长而不影响表皮葡萄球菌的生长。
[0009]在一些实施方案中，多肽被应用于患者的皮肤。用于所要求保护的方法中的多肽可以包含SEQ ID NO:2或由SEQ ID NO:2组成；或者用于所要求保护的方法中的多肽可以包含SEQ ID NO:4或由SEQ ID NO:4组成；或者用于所要求保护的方法中的多肽可以包含SEQ ID NO:6或由SEQ ID NO:6组成；或者用于所要求保护的方法中的多肽可以包含SEQ ID NO:8或由SEQ ID NO:8组成。在一些实施方案中，多肽被应用于患者的皮肤，例如，多肽以糊剂、霜剂、洗剂、软膏剂、喷雾剂的形式或作为贴剂/绷带或伤口敷料的掺入部分应用。
[0010]在相关的方面，本专利技术提供了嵌合多肽的新的用途，例如，包含SEQ ID NO:2、4、6或8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2、4、6或8的氨基酸序列组成的多肽用于选择性抑制金黄色葡萄球菌和/或人型葡萄球菌而非表皮葡萄球菌生长的用途；或者包含SEQ ID NO:2、4、6或8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2、4、6或8的氨基酸序列组成的多肽用于选择性抑制金黄色葡萄球菌和/或人型葡萄球菌而非表皮葡萄球菌生长的用途。在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成，用于选择性抑制金黄色葡萄球菌和/或人型葡萄球菌而非表皮葡萄球菌的生长。在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成，用于选择性抑制金黄色葡萄球菌和/或人型葡萄球菌而非表皮葡萄球菌的生长。在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列或由SEQ ID NO:4的氨基酸序列组成，用于选择性抑制金黄色葡萄球菌和/或人型葡萄球菌而非表皮葡萄球菌的生长。在一些实施方案中，多肽包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或由SEQ ID NO:6的氨基酸序列组成，用于选择性抑制金黄色葡萄球菌和/或人型葡萄球菌而非表皮葡萄球菌的生长。在一些实施方案中，多肽包本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.多肽，其包含SEQ ID NO:2、6或8的氨基酸序列。2.如权利要求1所述的多肽，其由SEQ ID NO:2、6或8的氨基酸序列组成。3.如权利要求1所述的多肽，其包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列或由SEQ ID NO:2的氨基酸序列组成。4.如权利要求1所述的多肽，其包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列或由SEQ ID NO:6的氨基酸序列组成。5.如权利要求1所述的多肽，其包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列或由SEQ ID NO:8的氨基酸序列组成。6.核酸，其包含编码权利要求1
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5中任一项所述多肽的多核苷酸序列。7.表达盒，其包含编码权利要求1
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5中任一项所述多肽的多核苷酸序列。8.载体，其包含权利要求7所述的表达盒。9.宿主细胞，其包含权利要求7所述的表达盒或权利要求8所述的载体。10.重组产生权利要求1
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5中任一项所述多肽的方法，其包括在允许表达由权利要求8所述的表达盒或权利要求8所述的载体编码的多肽的条件下培养权利要求9所述的宿主细胞。11.组合物，其包含权利要求1
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5中任一项所述多肽和生理学上可接受的赋形剂。12.如权利要求11所述的组合物，其被配制用于局部应用。13.用于选择性抑制金黄色葡萄球菌(S.aureus)和/或人型葡萄球菌(S.hominis)而非表皮葡萄球菌(S.epidermidis)生长的方法，其包括将有效量的包含SEQ ID NO:2、4、6或8的氨基酸序列的多肽应用于其中存在金黄色葡萄球菌或人型葡萄球菌和表皮葡萄球菌的位置。14.如权利要求13所述的方法，其中所述多肽被应用于患者的皮肤。15.如权利要求13所述的方法，其中所述多肽包含SEQ ID NO:2或由SEQ ID NO:2组成。16.如权利要求13所述的方法，其中所述多肽包含SEQ ID NO:4或由SEQ ID NO:4组成。17.如权利要求13所述的方法，其中所述多肽包含SEQ ID NO:6或由SEQ ID NO:6组成。18.如权利要求13所述的方法，其中所述多肽包含SEQ ID NO:8或由SEQ ID NO:8组成。19.如权利要求13所述的方法，其中所述多肽被应用于患者的皮...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾尼莎，
申请(专利权)人：艾尼莎，
类型：发明
国别省市：