一种极度濒危植物荔波杜鹃的组培繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种极度濒危植物荔波杜鹃的组培繁殖方法，该方法适用于杜鹃花科荔波杜鹃的组培快繁，属植物生物技术领域。本发明专利技术以当年发枝的当年新发嫩茎段，通过外植体消毒、愈伤组织诱导、分化、壮苗及生根一系列步骤，有效解决了极度濒危植物荔波杜鹃种群稀少，引种驯化难的问题。本发明专利技术提供的组培快繁方法，在1个月内增殖系数为10

【技术实现步骤摘要】
一种极度濒危植物荔波杜鹃的组培繁殖方法


[0001]本专利技术涉及植物生物技术中植物组织培养方法，具体地说，涉及一种濒危植物荔波杜鹃的组织培养快繁方法。

技术介绍

[0002]荔波杜鹃隶属于杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属(Rhododendron L.)，是在 1997 年首次被发现，2003年正式发表的一个杜鹃花科新种，其分布在贵州省茂兰国家级自然保护区的特有杜鹃种类，据陈正仁等报道该种仅分布在保护区内洞化山，总数约 37 株，在国际植物园保护联盟（BGCI）2013 年出版的《The Red List of Rhododendrons》中，将荔波杜鹃列为极危（CR）等级，《中国生物多样性红色名录——高等植物卷（2013年）》中也将其列为极危等级。
[0003]目前，组培快繁已成为中药材、花卉、濒危物种苗木生产的重要手段。据研究报道杜鹃花科植物对培养基的适应性与其基因型密切相关，不同品种的杜鹃对培养基的适应程度不同。对于杜鹃花科植物，目前已经报道适合组织培养使用的基本培养基有Read，WPM，1/2MS，1/4MS等，但由于杜鹃花科植物种类丰富、种间差异较大，应用时还需结合不同的杜鹃花亚属甚至亚组进行元素调整。
[0004]迄今，荔波杜鹃没有相关生物技术方法繁殖的研究与报道，为了使荔波杜鹃能免于走向灭绝的危险，解决荔波杜鹃自然匮乏、种子萌发率低、引种驯化难、濒危情况严重的问题，以更大的量和更快的速度提供大量的回归小苗，实行抢救性的保护，需要研究该种的组织培养，并形成一套专门的组织培养繁殖技术体系。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供荔波杜鹃的组织培养方法，在极度濒危的情况下实施抢救性的保护，加快种苗繁殖，提供大量的回归小苗提供切实有效的方法。
[0006]为了实现本专利技术的目的，本专利技术提供了如下的技术方案：改良的WPM培养基的制备：改良WPM培养基是将原培养基中NH4NO
3 400mg/L减少为330mg/L，原培养基中KNO3由990mg/L减少为780 mg/L，其余元素保持不变。
[0007]一种荔波杜鹃的组培繁殖方法，包括外植体的选择、消毒、愈伤组织诱导、分化、壮苗及生根步骤，取荔波杜鹃的开花后的当年新发嫩茎段为外植体，消毒先在自来水下冲洗30s，然后再用3ml洗洁精定容于1L水溶液中进行浸泡清洗3
‑
5min，后用清水冲洗干净，用无菌水冲洗至无泡沫后转移至超净工作台，用75%的酒精消毒20s，无菌水冲洗3
‑
5遍后，用0.1%升汞溶液（0.1g升汞固体溶解后定容至100ml水中）进行表面消毒8
‑
12min，无菌水冲洗3
‑
5遍后，进行如下培养：1）愈伤组织诱导：愈伤诱导培养基为改良WPM +1.5mg/L 2
‑
iP（2
‑
异戊烯腺嘌呤）+0.5mg/L 2,4
‑
D（2,4
‑
二氯苯氧乙酸） +1.0mg/L IAA（吲哚乙酸），pH5.8，蔗糖30g/L，1800强度的琼脂7g/L， pH5.8，暗培养7天后进行光照培养30
‑
40天，光暗周期为10h/14h；
2）分化培养：将上述培养基中的愈伤组织转移至改良WPM +0.8mg/l 2
‑
iP +0.1mg/L IAA+0.1mg/L IBA（吲哚丁酸），蔗糖30g/L，1800强度的琼脂7g/L，pH5.8，分化培养30
ꢀ‑
40天，光暗周期为12h/12h；3）壮苗及生根培养：将上述分化苗经切割后转接至壮苗及生根一体培养基，即改良WPM +2mg/L IAA，蔗糖35g/L，1800强度的琼脂7g/L，pH5.8，光暗周期为14h/10h。
[0008]上述培养条件均在光强度为2500LUX
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3000 LUX，温度为20
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23℃。
[0009]移栽时，小苗在瓶内生长至3cm高，茎粗达到1.5mm
‑
2mm，有浓密须根后自来水下冲洗小苗根部后进行移栽。移栽基质为1份珍珠岩+1份腐殖土+1份进口泥炭土+1份红土。大棚温度为20
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30度，湿度为40%
‑
60%。
[0010]本专利技术技术方案的提出是基于下述的研究基础：荔波杜鹃为杜鹃花科在贵州省仅有的且为极度濒危植物，该种在1997年首次被发现，2003年正式发表为新种，据陈正仁等报道仅分布在保护区内洞化山，总数约37株，在国际植物园保护联盟（BGCI）2013年出版的《The Red List of Rhododendrons》中，将荔波杜鹃列为极危（CR）等级，《中国生物多样性红色名录——高等植物卷（2013年）》中也将其列为极危等级。荔波杜鹃种群数量少，种子萌发率低，濒危状况严重，人工引种驯化难。为解决其濒危现状，达到大量繁殖，实行抢救性保护，保育和回归种植，故此专利技术荔波杜鹃的组织培养技术。
[0011]本专利技术相对现有技术的有益效果为：1.此专利技术建立了有效的荔波杜鹃组培快繁方法，解决了其濒危状况严重，种子萌发率低，人工引种驯化难的现状。
[0012]2.此专利技术通过组培快繁得到的幼苗，大大缩短育苗时间，成苗容易，保持了木本优良的性状，可提供大量的回归种苗延续物种，且进一步被市场开发利用。
[0013]本专利技术的组培快繁方法扩繁的荔波杜鹃1个月内增殖系数为10
‑
20，生根率为80%
‑
90%，移栽成活率为88%
‑
94%，极大地提高了荔波杜鹃的繁殖系数，为该物种的保护、回归种植提供了非常有效的繁殖方法。
[0014]下面结合具体实施例进一步阐述本专利技术的技术特点，但不以此来限定本专利技术。
具体实施方式
[0015]1. 方法实施例1：取荔波杜鹃的开花后的当年嫩茎段为外植体，消毒为常规组培外植体消毒，将取到的外植体切除两端的伤口，在自来水下冲洗30s，用3ml洗洁精定容于1L水溶液中进行浸泡清洗3min，用无菌水冲洗至无泡沫后转移至超净台，用75%的酒精消毒20s，无菌水冲洗4遍后，用0.1%升汞溶液（0.1g升汞固体用少量95%无水乙醇溶解后定容至100ml水中）进行表面消毒9min，用无菌水震荡清洗5遍，将消毒后的嫩茎段分切，每段上至少带一个腋芽。将带腋芽的茎段斜插入愈伤诱导培养基：改良WPM +1.5mg/L 2
‑
iP+0.5mg/L 2,4
‑
D +1.0mg/L IAA，pH5.8，蔗糖30g/L，1800强度的琼脂7g/L，暗诱导7天后进行人工辅助光诱导35天，光暗周期为10h/14h。待长出愈伤组织，将其转入分化培养：改良WPM +1.0mg/l 2
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iP +0.1mg/L IAA+0.1mg/L IBA，蔗糖30g/L，1800强度的琼脂7g/ L，光暗周期为12h/12h培本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荔波杜鹃的组培繁殖方法，其特征在于包括以下步骤：1）培养基改良：改良的WPM培养基是将原培养基中NH4NO
3 400mg/L减少为330mg/L，原培养基中KNO3由990mg/L减少为780 mg/L，其余元素保持不变；2）愈伤组织诱导：愈伤组织诱导培养基为改良WPM +1.5mg/L 2
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iP（2
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异戊烯腺嘌呤）+0.5mg/L 2,4
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D（2,4
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二氯苯氧乙酸） +1.0mg/L IAA（吲哚乙酸），pH5.8，蔗糖30g/...

【专利技术属性】
技术研发人员：田晓玲，黄承玲，
申请(专利权)人：贵州民族大学人文科技学院，
类型：发明
国别省市：