一种改良小鼠眼球固定液制造技术

本发明专利技术公开了一种改良小鼠眼球固定液，所述的固定液由甲醛溶液、无水乙醇、冰醋酸和平衡盐溶液组成；将5ml甲醛溶液、35ml无水乙醇和10ml冰醋酸溶解于50ml平衡盐溶液中制得所述的固定液。采用本发明专利技术的小鼠眼球固定液对小鼠眼球固定染色的效果显著。眼球固定染色的效果显著。眼球固定染色的效果显著。

【技术实现步骤摘要】
一种改良小鼠眼球固定液


[0001]本专利技术涉及病理试剂
，具体涉及一种改良小鼠眼球固定液。

技术介绍

[0002]小鼠是目前眼科最常用的实验动物之一，小鼠眼球组织的病理切片常被应用于眼科相关疾病的实验研究。与其他组织器官结构不同，眼球解剖结构复杂，球内各种组织软硬度相差非常悬殊，而且眼球为腔隙结构，各组织层间连接性较差，常规固定、脱水过程易造成小鼠眼球的凹陷变形、皱缩及视网膜神经上皮层及色素上皮层之间的脱离，晶状体各结构软硬度不同，石蜡切片标本极易发生组织碎裂和细胞变形，因此眼球石蜡切片的难度较高，简单可靠的固定液及固定方法是眼球病理切片制备的关键因素之一。

技术实现思路

[0003]本专利技术要解决的技术问题是提供一种改良小鼠眼球固定液，对小鼠眼球固定染色的效果显著。
[0004]为解决上述技术问题，本专利技术采取如下技术方案：一种改良小鼠眼球固定液，所述的固定液由甲醛溶液、无水乙醇、冰醋酸和平衡盐溶液组成；将5ml甲醛溶液、35ml无水乙醇和10ml冰醋酸溶解于50ml平衡盐溶液中制得所述的固定液。
[0005]进一步地，所述的甲醛溶液为体积分数为40%的甲醛溶液。
[0006]进一步地，所述的平衡盐溶液按照以下质量百分比的组分组成：氯化钠0.64%、氯化钾0.070%、二水合氯化钙0.048%、六水合氯化镁0.030%、三水合醋酸钠0.39%、二水合柠檬酸钠0.17%、盐酸和/或氢氧化钠，余量为注射用水。
[0007]进一步地，采用所述的改良小鼠眼球固定液进行眼球组织制片的处理方法如下：（1）采用改良小鼠眼球固定液室温固定24小时；（2）将固定好的标本置于脱水盒，采用体积分数70%、80%、95%乙醇及100%乙醇逐级脱水25min，二甲苯透明2次，每次15 min，透明后的组织置于63℃液体石蜡中浸蜡3h；浸蜡后的小鼠眼球水平切面朝向包埋盒底，70℃液体石蜡包埋，蜡块冷切后，4℃保存待切；（3）用Leica RM2135石蜡切片机切片，厚度为4μm，45℃水浴、展片，70℃烤片3h；眼球标本选取3
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5张经过视乳头的切片依次进行二甲苯脱蜡、梯度酒精复水、水洗、苏木素染液染色10min、水洗、1%盐酸酒精分化10s、水洗返蓝、伊红染液染色1min、梯度酒精脱水、二甲苯透明10min，干燥后中性树胶封片。
[0008]进一步地，经过视乳头的切片进行二甲苯脱蜡2次，每次15min。
[0009]进一步地，梯度酒精复水步骤中分别采用体积分数100%乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇各 2 min。
[0010]进一步地，梯度酒精脱水步骤中分别采用体积分数70%、80%、95%乙醇及100%乙醇逐级脱水各1min。
[0011]本专利技术的有益效果为：采用本专利技术的小鼠眼球固定液对小鼠眼球固定染色的效果
显著，小鼠眼球眼内结构形态正常、无皱缩；视网膜神经上皮与色素上皮疏松连接，脉络膜上腔可见，视网膜外核层、内核层、节细胞层等各层结构均完整、染色鲜明清晰，各层细胞排列整齐有序，无皱缩；晶状体组织结构基本完整、清晰，中央区稍碎裂；角膜各层结构整齐、层次分明。
附图说明
[0012]图1为本专利技术小鼠眼球石蜡切片各参数示意图。
[0013]图2为本专利技术四种眼球固定液固定小鼠眼球整体观。
[0014]图3为本专利技术四种眼球固定液对角膜形态及HE染色的比较。
[0015]图4为本专利技术四种眼球固定液对视乳头形态及HE染色的比较。
[0016]图5为本专利技术四种眼球固定液对视网膜形态及HE染色的比较。
[0017]图中：A0‑
4%甲醛固定液；B0‑ꢀ
Davidson固定液；C0‑
市售眼球固定液；D0‑
改良小鼠眼球固定液。
具体实施方式
[0018]下面将通过具体实施方式对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述。
[0019]本专利技术的一种改良小鼠眼球固定液，所述的固定液由甲醛溶液、无水乙醇、冰醋酸和平衡盐溶液组成；将5ml甲醛溶液、35ml无水乙醇和10ml冰醋酸溶解于50ml平衡盐溶液中制得本专利技术的固定液。本专利技术采用的甲醛溶液为体积分数为40%的甲醛溶液。本专利技术的平衡盐溶液按照以下质量百分比的组分组成：氯化钠0.64%、氯化钾0.070%、二水合氯化钙0.048%、六水合氯化镁0.030%、三水合醋酸钠0.39%、二水合柠檬酸钠0.17%、盐酸和/或氢氧化钠，余量为注射用水。
[0020]采用C57/BL6J小鼠12只24眼，将眼球随机分为4组：A组为4%甲醛固定液；B组为戴维森氏固定液（Davidson's固定液）；C组为市售眼球固定液；D组为改良小鼠眼球固定液。
[0021]比较上述本专利技术的固定液以及现有的A组、B组和C组固定液对小鼠眼球的固定及石蜡切片染色效果。小鼠摘除眼球后分别置于四种固定液中固定24小时，常规脱水、石蜡包埋、切片和HE染色，显微镜下观察眼球的大体结构和染色效果，比较眼球与晶状体的前后经和左右径、中央角膜及视乳头旁视网膜的厚度、前房深度及房角结构的固定和染色效果，具体的方法如下：1. 材料和方法1.1实验动物清洁级8
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10周龄雄性C57/BL6J小鼠12只，购自（南通大学实验动物中心），饲养于南通大学动物中心，饲养环境符合医学实验动物饲养要求。
[0022]1.2 主要仪器与试剂Leica RM2135石蜡切片机、QP
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B切片漂烘温控仪、DHG
‑
9053A型电热恒温鼓风干燥箱、Motic解剖显微镜、德国徕卡Thunder显微镜。甲醛（广东光华科技股份有限公司）、无水
乙醇（常试，常熟市杨园化工有限公司）、冰醋酸（上海国药集团化学试剂有限公司）、二甲苯（常试，常熟市杨园化工有限公司）、浓盐酸（上海试剂四厂昆山分厂）、苏木素染色液（北京索莱宝科技有限公司）、伊红染色液（北京索莱宝科技有限公司）、切片石蜡（上海国药集团化学试剂有限公司）、平衡盐溶液（每毫升平衡盐溶液含：氯化钠0.64%，氯化钾0.070%，二水合氯化钙0.048%，六水合氯化镁0.030%，三水合醋酸钠0.39%，二水合柠檬酸钠0.17%，盐酸和/或氢氧化钠(用于调节PH值)和注射用水）。
[0023]1.3 实验方法1.3.1 固定液配制A 4%甲醛固定液：体积分数为40%甲醛溶液10ml，溶解于90ml蒸馏水中。
[0024]B戴维森固定液：体积分数为40%甲醛溶液2ml，无水乙醇35ml，冰醋酸10ml，溶解于53ml蒸馏水中。
[0025]C市售眼球固定液：购自Phygene公司（PH1848）。
[0026]D改良小鼠眼球固定液：体积分数为40%甲醛溶液5ml、无水乙醇35ml、冰醋酸10ml、溶解于50ml平衡盐溶液中。
[0027]1.3.2 取材与固定C57/BL6J小鼠颈椎脱臼法处死后，解剖显微镜下剪开球结膜，剪断球后组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种改良小鼠眼球固定液，其特征在于：所述的固定液由甲醛溶液、无水乙醇、冰醋酸和平衡盐溶液组成；将5ml甲醛溶液、35ml无水乙醇和10ml冰醋酸溶解于50ml平衡盐溶液中制得所述的固定液。2.根据权利要求1所述的一种改良小鼠眼球固定液，其特征在于：所述的甲醛溶液为体积分数为40%的甲醛溶液。3.根据权利要求1所述的一种改良小鼠眼球固定液，其特征在于：所述的平衡溶液按照以下质量百分比的组分组成：氯化钠0.64%、氯化钾0.070%、二水合氯化钙0.048%、六水合氯化镁0.030%、三水合醋酸钠0.39%、二水合柠檬酸钠0.17%、盐酸和/或氢氧化钠，余量为注射用水。4.根据权利要求1所述的一种改良小鼠眼球固定液，其特征在于：采用所述的改良小鼠眼球固定液进行眼球组织制片的处理方法如下：采用改良小鼠眼球固定液室温固定24小时；将固定好的标本置于脱水盒，采用体积分数70%、80%、95%乙醇及100%乙醇逐级脱水25min，二甲苯透明2次，每次15min，透明后的组织置于...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦柏，张俊芳，石海红，陆志荣，管怀进，
申请(专利权)人：南通大学附属医院，
类型：发明
国别省市：