无梗五加叶中的三萜类化合物及其分离、鉴定和应用制造技术

本发明专利技术提供了无梗五加叶中的三萜类化合物及其分离、鉴定和应用。本发明专利技术从无梗五加叶中分离鉴定出19个三萜类化合物，其中新化合物有10个。实验结果表明，在给药浓度为20μmol/L时，各化合物均能不同程度的抑制TNF

【技术实现步骤摘要】
无梗五加叶中的三萜类化合物及其分离、鉴定和应用


[0001]本专利技术涉及无梗五加叶中的三萜类化合物及其分离、鉴定和应用。

技术介绍

[0002]无梗五加(学名：Eleutherococcussessiliflorus(Rupr.&Maxim.)S.Y.Hu)是五加科五加属植物，灌木或小乔木，高2
‑
5米；树皮暗灰色或灰黑色，有纵裂纹和粒状裂纹；枝灰色；刺粗壮。叶有小叶3
‑
5；叶柄长3
‑
12厘米，无刺或有小刺。头状花序紧密，球形，直径2
‑
3.5厘米，有花多数，5
‑
6个稀多至10个组成顶生圆锥花序或复伞形花序。果实倒卵状椭圆球形，黑色，长1
‑
1.5厘米，稍有棱，宿存花柱长达3毫米。无梗五加根皮在中国东北称“五加皮”，有驱风化湿，健胃利尿之效，也可制“五加皮”药酒。
[0003]无梗五加的叶含强心甙，挥发油和皂甙。吴高松、王知斌、杨春娟、刘华、王秋红、杨炳友等采用HPLC
‑
ELSD法同时测定无梗五加果中3种3,4
‑
裂环羽扇豆烷型三萜化合物(2
‑
α
‑
hydroxychiisanogenin(1)、chiisanogenin(2)和(1R,llα)1,4
‑
epoxy
‑
11
‑
hydroxy
‑
3,4
‑
secolupane
‑
20(30)
‑
ene
‑
3,28
‑
dioic acid(3))的含量(《中医药信息》2017年34卷1期36
‑
39页)，然而目前没有对无梗五加叶中所含三萜类化合物进行系统分离、鉴定及其应用研究的相关报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种从无梗五加叶中提取分离三萜类化合物的方法及对得到的三萜类化合物的药学活性研究。
[0005]本专利技术所提供的从无梗五加叶中提取分离三萜类化合物的方法，按照图1所示流程图进行，包括如下步骤：
[0006]1)将无梗五加叶用乙醇提取，得到乙醇粗提物；
[0007]2)将所得乙醇粗提物加在HP
‑
20型大孔吸附树脂上，依次用水、40％乙醇、95％乙醇梯度洗脱，收集95％乙醇洗脱组分；
[0008]3)将所得95％乙醇洗脱组分加在正相硅胶上，用CH2Cl2‑
CH3OH系统洗脱，洗脱液经薄层和HPLC检识分别得到Fr.A
‑
C、Fr.D、Fr.E、Fr.F、Fr.G、Fr.H和Fr.I；
[0009]4)Fr.D经过ODS柱色谱分离得到Fr.D1
‑
D45，其中Fr.D15析出化合物11；Fr.D18经制备型HPLC(CH3OH/H2O＝66％,5mL/min)分离得到化合物12；Fr.D22析出化合物7；Fr.D24经制备型HPLC(CH3OH/H2O＝74％,5mL/min)分离得到化合物14；Fr.D27经制备型HPLC(CH3OH/H2O＝75％,5mL/min)分离得到化合物1；
[0010]5)Fr.E经过ODS柱色谱分离得到Fr.E1
‑
E46，其中Fr.E38析出化合物6；
[0011]6)Fr.F经过ODS柱色谱分离得到Fr.F1
‑
F43，其中Fr.F40析出化合物17；
[0012]7)Fr.G经过ODS柱色谱分离得到Fr.G1
‑
G46，其中Fr.G32析出化合物16；
[0013]8)Fr.H经过ODS柱色谱分离得到Fr.H1
‑
H42，其中Fr.H12析出化合物13；Fr.H16经制备型HPLC(CH3OH/H2O＝68％,5mL/min)分离得到化合物5、4和3；Fr.H19经制备型HPLC
(CH3OH/H2O＝73％,5mL/min)分离得到化合物19、2和8；Fr.H29经制备型HPLC(CH3OH/H2O＝79％,5mL/min)分离得到化合物15和18；Fr.H32经制备型HPLC(CH3OH/H2O＝79％,5mL/min)分离得到化合物9和10；
[0014]上述步骤1)中，所述无梗五加叶为无梗五加干燥叶；
[0015]所述提取包括加入70％
‑
95％浓度乙醇水溶液，回流提取1
‑
2小时，乙醇水溶液的体积与无梗五加叶的质量比为8：1
‑
10：1。
[0016]优选的，乙醇水溶液的浓度可为70％；本专利技术中，所述乙醇的浓度均指体积浓度。
[0017]优选的，乙醇水溶液的体积与无梗五加叶的质量的比可为10：1。
[0018]所述回流提取可进行多次，具体可为3次；
[0019]本专利技术中，但凡涉及到质量与体积的比时，均指单位质量的量与单位体积的量的比，质量的单位为g时，体积的单位为ml；质量的单位为Kg时，体积的单位为l；以此类推。
[0020]步骤2)中，所述HP
‑
20型大孔吸附树脂的体积可为10
‑
20倍无梗五加叶粗提物质量，优选为10倍；
[0021]洗脱用水量可为2
‑
4BV，优选为2BV；
[0022]40％乙醇用量可为2
‑
4BV，优选为2BV；
[0023]95％乙醇用量可为2
‑
4BV，优选为4BV；
[0024]所述洗脱的流速可为0.5
‑
1BV/h，优选为1BV/h；
[0025]步骤3)中，所述正相硅胶的体积可为4
‑
7倍95％乙醇洗脱组分质量，优选为7倍；
[0026]所述CH2Cl2‑
CH3OH系统中，CH2Cl2与CH3OH的体积比为1：0
‑
0：1；
[0027]所述薄层为正相薄层板，展开剂为CH2Cl2‑
CH3OH系统，其中CH3OH与CH2Cl2体积比为1：15；
[0028]所述HPLC的流动相为CH3OH
‑
H2O系统，梯度洗脱条件:0
‑
30min流动相CH3OH与H2O体积比为5：95
‑
100：0；
[0029]步骤4)中，所述ODS柱色谱的流动相为CH3OH
‑
H2O系统，CH3OH与H2O体积比为1：9
‑
10：0；
[0030]步骤5)中，所述ODS柱色谱的流动相为CH3OH
‑
H2O系统，CH3OH与H2O体积比为1：9
‑
10：0；
[0031]步骤6)中，所述ODS柱色谱的流动相为CH3OH
‑...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种从无梗五加叶中提取分离三萜类化合物的方法，包括如下步骤：1)将无梗五加叶用乙醇提取，得到乙醇粗提物；2)将所得乙醇粗提物加在HP
‑
20型大孔吸附树脂上，依次用水、40％乙醇、95％乙醇梯度洗脱，收集95％乙醇洗脱组分；3)将所得95％乙醇洗脱组分加在正相硅胶上，用CH2Cl2‑
CH3OH系统洗脱，洗脱液经薄层和HPLC检识合瓶分别得到Fr.A
‑
C、Fr.D、Fr.E、Fr.F、Fr.G、Fr.H和Fr.I；4)Fr.D经过ODS柱色谱分离得到Fr.D1
‑
D45，其中Fr.D15析出化合物11；Fr.D18经制备型HPLC分离得到化合物12；Fr.D22析出化合物7；Fr.D24经制备型HPLC分离得到化合物14；Fr.D27经制备型HPLC分离得到化合物1；5)Fr.E经过ODS柱色谱分离得到Fr.E1
‑
E46，其中Fr.E38析出化合物6；6)Fr.F经过ODS柱色谱分离得到Fr.F1
‑
F43，其中Fr.F40析出化合物17；7)Fr.G经过ODS柱色谱分离得到Fr.G1
‑
G46，其中Fr.G32析出化合物16；8)Fr.H经过ODS柱色谱分离得到Fr.H1
‑
H42，其中Fr.H12析出化合物13；Fr.H16经制备型HPLC分离得到化合物5、4和3；Fr.H19经制备型HPLC分离得到化合物19、2和8；Fr.H29经制备型HPLC分离得到化合物15和18；Fr.H32经制备型HPLC分离得到化合物9和10。2.如权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨炳友，刘艳，匡海学，韩冬，
申请(专利权)人：黑龙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：