一种克雷伯氏菌WH-15及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，具体公开一种克雷伯氏菌WH

【技术实现步骤摘要】
一种克雷伯氏菌WH
‑
15及其应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体公开一种克雷伯氏菌WH
‑
15及其应用。

技术介绍

[0002]铅(Lead，Pb)是一种不可降解的重金属，主要来源于采矿、冶炼等行业，其毒性强弱与铅化合物形态有关，其中可交换态是引起环境中铅污染的主要原因，且酸性环境使Pb更易从矿石中被淋出，增加了对环境的威胁，Pb主要经由呼吸道和胃肠道进入人体，长期摄入会对机体血液系统、神经系统等产生严重损害，对人体健康造成严重威胁，因此改变Pb的存在形态，降低其移动性和生物可利用性，对环境Pb污染治理和保护人体健康具有重要意义。
[0003]铅污染治理方法主要包括物理法、化学法和生物法。常用于环境中铅污染治理的物理化学方法主要有热脱附法、固定稳定化技术和土壤淋洗法、电动修复法，光催化法等。其中物理法、化学法由于价格高昂、效果不显著、造成二次污染等缺点，未能成为较为理想的铅污染治理措施。微生物修复法是通过微生物对铅的吸收、转化或固化而以减少环境中的可交换态铅。微生物法来修复铅污染土壤因具有安全、绿色环保、费用低廉等优点成为原位治理铅污染的新途径，而从环境中获得优良的高效吸附铅菌株则是开发这一技术的关键。
[0004]目前研究工作者已经从环境中分离出了一些高效吸附铅菌株，主要分布在假单胞菌属、产碱菌属及芽孢杆菌属等。但是，迄今为止仍然只有较少的微生物修复铅污染场地案例，其主要原因可能是高效吸附铅菌株的资源不够丰富，因此从受污染环境中分离菌株仍是获得优势菌种资源的重要手段。

技术实现思路

[0005]鉴于以上技术问题，本专利技术提供了一种克雷伯氏菌WH
‑
15，该菌在好氧条件下能有效吸附Pb
2+
，且该菌株对重金属汞、砷也具有一定吸附效果。
[0006]本专利技术第一方面提供一种克雷伯氏菌WH
‑
15，保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO.M2022400。
[0007]本专利技术第二发面提供了所述克雷伯氏菌WH
‑
15在重金属吸附中的用途。
[0008]优选地，所述重金属为砷、汞、铅中的一种或几种。
[0009]本专利技术第三方面提供了所述克雷伯氏菌WH
‑
15的发酵方法，包括以下步骤：将所述克雷伯氏菌WH
‑
15接种于LB液体培养基中，于30℃、150r/min下培养24h。
[0010]本专利技术第四方面提供了根据上述发酵方法获得的发酵液。
[0011]本专利技术第五方面提供了所述发酵液在重金属吸附中的用途。
[0012]本专利技术第六方面提供了一种用于重金属吸附的微生物菌剂，其包括所述克雷伯氏菌WH
‑
15和/或所述发酵液，以及辅料。
[0013]优选地，所述辅料为用于培养所述克雷伯氏菌WH
‑
15的固体或液体培养基质。
[0014]对比现有技术，本专利技术的有益效果为：
[0015]1、本专利技术提供一种克雷伯氏菌WH
‑
15，将该菌株作用于受铅污染水体后，能明显促进水体中Pb
2+
被菌株固化，该菌株在处理受铅污染水体中具有极大的应用潜力，可被应用于铅污染水体的生物修复工程中，以促进铅的固定化，提高修复效率。
[0016]2、该菌株对汞、砷也有一定吸附效果，当汞浓度为200mg/L和600mg/L时，24h的吸附效率分别为54.8％和7.4％；当砷浓度为200mg/L和600mg/L时，24h的吸附效率分别为20.9％和18.8％。
[0017]生物保藏信息说明：
[0018]生物材料：WH
‑
15，分类学命名：克雷伯氏菌，拉丁名为Klebsiella grimontii，该菌株于2022年4月18日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO.M2022400，保藏地址：中国
·
武汉
·
武汉大学。
附图说明
[0019]图1是本专利技术所获得的菌株的革兰氏染色镜检图；
[0020]图2是本专利技术所获得的菌株在LB平板上的菌落形态；
[0021]图3是本专利技术所获得的菌株的系统发育树。
具体实施方式
[0022]本专利技术结合实施例和相应附图做进一步阐释说明，以下实施例仅用于说明目的，不用于限制本专利技术范围。
[0023]实施例1
[0024]高效吸附铅菌株的筛选
[0025]本专利技术通过富集驯化、分离纯化和吸附实验从环境中筛选出高效吸附铅的菌株，具体筛选过程如下：
[0026]1、富集与驯化
[0027]从贵州省威宁某铅锌矿周边采集长期受铅污染的土壤；
[0028]LB培养基配制：称取蛋白胨10g、酵母粉5g、氯化钠10g、蒸馏水1L，混合，调pH＝7.0，在容积为150mL的三角瓶中装入50mL LB培养基，121℃高压灭菌20min后备用；
[0029]取铅污染土壤样品2g接种至50mL LB培养基中，加入几颗玻璃珠，于30℃、150r/min条件下振荡培养2d，静置，取5mL培养液转接至新鲜LB培养基中于相同条件下再次培养，取5mL培养液接种至已灭菌的含Pb
2+
100mg/L的LB培养基中，相同条件下培养后，取菌悬液测其在600nm波长处的光密度值大于1，说明培养基中细菌丰度较高，可以进行菌株分离。
[0030]2、分离与纯化
[0031]取富集菌液1mL用无菌水进行浓度梯度稀释至10
‑5，将1mL稀释液涂布于LB琼脂平板，平板内含Pb
2+
100mg/L。将平板倒置于30℃恒温培养箱培养，观察菌落生长情况，挑选形态大小不同长势优良的菌落进行反复划线纯化，直到得到纯种，此步骤可得到对多种重金属有耐受潜能的菌株。
[0032]3、复筛
[0033]将纯化的初筛菌株分别挑接于50mL的LB培养基中培养，于30℃、150r/min摇床培
养24h，转接一次，再培养24h作为种子液，备用；
[0034]将初筛菌株的种子液分别接种至Pb
2+
浓度为500mg/L的LB培养基中，相同条件下培养24h，分别测定菌悬液在600nm波长处的光密度值和铅剩余浓度，根据OD
600
判断菌株的耐受，根据铅剩余浓度计算吸附效率。复筛菌株中，菌株WH
‑
15的OD
600
值为5.335，对500mg/L铅的吸附效率较高达99％，表明菌株WH
‑
15是一株较好的铅吸附菌。
[0035]4、鉴定
[0036]16S rDNA分析采用细菌通用引物27F(5
′‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑
3)和1492R(5
′‑<本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种克雷伯氏菌WH
‑
15，其特征在于，该菌株保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO.M2022400。2.权利要求1所述克雷伯氏菌WH
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15在重金属吸附中的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述重金属为砷、汞、铅中的一种或几种。4.一种权利要求1所述克雷伯氏菌WH
‑
15的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：将所述克雷伯氏菌WH
‑
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【专利技术属性】
技术研发人员：王慧，初诗禹，王瀚瑛，蒋科，
申请(专利权)人：贵州民族大学，
类型：发明
国别省市：